摘要：DMRT1(Double sex and Mab-3 related transcription factor 1)是鸡性腺分化和发育的关键候选基因,其详细的功能和作用途径还未被阐明。为了解明DMRT1在鸡性腺分化和发育过程中的功能,研究首次利用在线sg RNA平台设计4条鸡DMRT1 sg RNA序列,构建了4个sg RNA表达载体:Guide-1、Guide-2、Guide-3和Guide-4。转染鸡DF-1成纤维细胞后,利用T7E1内切酶的方法检测4个表达载体的打靶效率。结果显示,成功构建了4条正确的鸡DMRT1 sg RNA表达载体,并且都能高效地在DF-1细胞中表达,其中Guide-4表达载体能有效地打靶DMRT1基因,打靶效率为24.82%。研究结果为进一步在鸡胚敲除DMRT1基因,研究其功能奠定了基础。

摘要：鸡W染色体为进化过程中保留下来的Z染色体高度退化后的拷贝,在机体发育和代谢等过程中发挥着重要作用。以鸡W染色体上富含GC启动子的结合蛋白(GPBP1)基因为对象,对其在胚胎发育过程中的表达和功能进行初步研究;根据GPBP1基因在W和Z染色体上序列的不同,设计特异性引物扩增其W拷贝(GPBP1-W)、Z拷贝(GPBP1-Z)及同时扩增W和Z拷贝(GPBP1-ZW),采用qPCR及Western blot技术分析其在胚胎发育过程中不同组织的表达量,并通过FAD诱导性反转探究其对性别表型的响应。结果表明:GPBP1-W在孵化6 d的胚胎性腺中高表达,且表达量随胚胎发育而升高。GPBP1-W和GPBP1-Z在所检测的孵化12 d的胚胎组织中均有表达,其中mRNA高表达于脾脏组织中,蛋白高表达于性腺组织中;GPBP1-Z mRNA和蛋白质在雄性组织中的表达量高于雌性。GPBP1-W表达受雌性向雄性性反转的影响而显著降低,但GPBP1-Z的表达不受性反转的影响。这一研究提示,鸡性染色体基因GPBP1在鸡胚的性腺和脾脏中表达量高,且其Z拷贝在性别间和各组织中存在剂量效应和转录后调控作用,而W拷贝可能在雌性的部分组织中作为Z拷贝的补偿以保证其生物学功能的发挥。