摘要：为建立能同时检测并区分鸭圆环病毒（Duck circovirus，DuCV）和鹅圆环病毒（G00se circovims，GOCV）的方法，根据DuCV和GoCV基因组的保守区域设计两对特异性引物，预期特异性扩增DuCV和GoCV片段大小分别为192bp、556bp。经过反应条件的优化，建立了DuCV和GoCV的双重PCR检测方法。特异性检验表明该方法无法扩增其他水禽病原；DuCV和GoCV的最低检出限分别为10^4拷贝／μL和10^5拷贝／μL。临床样品检测结果显示，DuCV阳性率为8．01％，GoCV阳性率为1．6％，与常规PCR方法完全一致。结果表明，建立的双重PCR方法可以用于水禽圆环病毒检测和流行病学调查。

摘要：文章旨在探讨日粮添加玉米油对狗肠道养分表观消化系数及粪便特性的影响。本研究进行两个试验。在试验一中选择8只健康的成年犬,评估日粮添加不同水平(4、8和12%)玉米油替代家禽脂肪对养分表观消化系数、日粮代谢能和粪便特性的影响。试验二采用随机试验设计,对9只成年犬用含有玉米或家禽脂肪作为脂肪来源的饲粮替代92%含有牛油的基础饲粮中营养物质的表观消化系数进行评估。结果显示:日粮添加不同水平的玉米油或家禽脂肪对干物质、粗蛋白质、粗脂肪、总能表观消化系数和代谢能含量均无显著影响(P>0.05)。日粮玉米油添加水平及玉米油组和对照组对粪便评分、pH、氨氮、干物质含量和粪便产量的影响均无显著差异(P>0.05)。日粮添加玉米油和家禽脂肪对狗干物质、粗脂肪表观消化系数及代谢能含量均无显著影响(P>0.05)。但玉米油组较家禽脂肪组有提高总能表观消化系数的趋势(P=0.09)。对照组较玉米油和家禽脂肪组显著提高粪便排泄量(P<0.05)。结论:含有玉米油的狗粮与含有家禽脂肪的狗粮具有相似的养分消化系数。玉米油易消化,很容易被狗接受。日粮添加不同水平的玉米油对成年犬粪便特征无显著影响,这些结果表明玉米油可以作为狗粮的脂肪来源。

摘要：目的在mRNA水平对山羊Th1/Th2型细胞因子进行定量分析,建立山羊Th1/Th2型细胞因子实时荧光定量检测方法。方法根据GenBank山羊Th1(IL-2和IFN-γ)和Th2(IL-4、IL-6和IL-10)细胞因子基因保守序列设计引物,以标准阳性质粒为模板分别进行荧光定量PCR反应的标准曲线、溶解曲线建立。结果山羊Th1/Th2细胞因子实时荧光定量检测方法Ct值与标准品呈良好的线性关系,R^2均大于0.985,所有稀释度标准品模板出现特异性熔解峰;利用N1蛋白缺失的重组山羊痘病毒(△N1L株)与山羊痘AV41株感染山羊外周血淋巴细胞进行IL-4和IFN-γmRNA表达水平检测,△N1L株与山羊痘AV41株均能能够刺激机体IL-4和IFN-γ细胞因子,但二者差异无统计学意义(t=3.333,P>0.5)。结论本研究建立山羊Th1/Th2细胞因子实时荧光定量检测,为山羊痘基因工程疫苗的研究奠定基础。

摘要：为了解牛乳头瘤病毒1型(bovine papillomavirus genotype 1,BPV-1)广西GX01株全基因组序列、结构特征及遗传变异情况,同时了解该毒株引起宿主产生的病理组织学变化情况,本研究选取广西贺州市患病牛皮肤肿瘤样物制作石蜡切片后镜检观察,提取病料DNA,以乳头瘤病毒L1基因的简并引物FAP59/FAP64进行PCR扩增以确定此病毒的基因型,根据GenBank中BPV参考株设计嵌套引物,对GX01株进行全基因组扩增、克隆测序及序列分析。病理组织学检查结果显示,可在病变部位发现表皮细胞增生、肿胀,角质过度及挖空细胞等乳头瘤病毒感染的特征性病变。序列分析结果表明,GX01株为BPV-1,其全基因组长为7 945bp,包含E1、E2、E4、E5、E6、E7、L1、L2 8个开放阅读框,符合BPV-1型基因组的结构特征;GX01与BPV-1参考株全基因组核苷酸序列同源性为98.6%~99.6%,与BPV-2型参考株(M20219.1)、BPV-13型参考株(JQ798171.1)同源性分别为86.9%和87.2%。GX01株为广西地区首次经检测确认并测定全基因组序列的牛乳头瘤病毒。本研究为广西地区乃至全国的牛乳头状瘤的病原鉴定、流行规律、遗传变异、疫源追溯及科学防控提供了基础数据。

摘要：根据山羊Toll样受体（TLR2、TLR4和TLR9）及管家基因β-actin的保守序列设计特异性引物,分别建立不同的荧光定量PCR标准曲线及直线回归方程,并对方法的灵敏度、重复性和特异性进行检验。结果表明：山羊TLR2、TLR4、TLR9及管家基因β-actin的荧光定量RT-PCR标准曲线相关性R2大于0.984;特异性强,出现特异性熔解峰;重复性好,组内与组间的变异系数均小于2%。应用所建立的方法对N1蛋白缺失的重组山羊痘病毒（△N1L株）感染山羊外周血淋巴细胞TLR2和TLR9 mRNA表达水平进行了检测,△N1L株可以显著提高机体固有免疫应答水平。本研究建立的山羊天然免疫因子相关受体荧光定量PCR方法可应用于山羊痘新型基因工程疫苗的评价。

摘要：为了建立一种可同时精准、快捷鉴别检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法,本研究选择猪源β-actin为内参基因,根据ASFV的P72基因及PRRSV的ORF6基因设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了ASFV和PRRSV多重TaqMan荧光定量PCR检测方法,对该方法的特异性、敏感性、重复性进行验证,并初步应用于临床样品的检测。结果显示,该方法可在45 min内完成对ASFV、PRRSV及猪源β-actin基因的特异性扩增;对ASFV、PRRSV及猪源β-actin标准品模板的最低检测拷贝数分别为7.87×101 copies/μL、1.19×102 copies/μL和5.99×103 copies/μL,同一模板的3次重复试验的组内及组间变异系数均小于2%;用该方法检测92份临床样品,未检出ASFV,检出19份PRRSV阳性样品。结果表明,本研究建立了一种可快速鉴别检测ASFV及PRRSV的多重荧光定量PCR方法,较普通PCR敏感性高103倍,可应用于ASFV和PRRSV的快速鉴别诊断及流行病学调查。

摘要：为探讨羊痘病毒感染后机体的凋亡细胞因子mRNA表达水平的变化,深入探讨羊痘病毒免疫机制,本研究设计针对羊凋亡细胞因子Fas、FasL、TNFR1和TNF-α特异性引物,建立羊凋亡细胞因子实时荧光定量方法。分别建立荧光定量PCR反应体系并进行优化。结果表明:Fas、FasL、TNFR1和TNF-α的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR各基因的溶解曲线均呈单一溶解峰。组内变异系数均小于2.00%。本研究建立的羊凋亡细胞因子SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法为凋亡细胞因子mRNA表达水平提供了技术平台。