摘要：背景:研制具有结构与功能化仿生作用的骨修复替代材料,应在模拟体内细胞生长环境中进行。目的:观察生物活性玻璃/胶原蛋白/透明质酸/磷酸丝氨酸仿生复合支架材料植入体内后诱导成骨和促进矿化的能力。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-06/2006-02在南方医科大学珠江医院血液科实验室完成。材料:生物活性玻璃/胶原蛋白/透明质酸/磷酸丝氨酸支架、生物活性玻璃/胶原蛋白支架和58S生物玻璃支架为自制。40只健康成年日本大耳白兔制造两侧桡骨10mm骨缺损模型。干预:将40只模型兔随机分成4组,生物活性玻璃/胶原蛋白/透明质酸/磷酸丝氨酸组12只、生物活性玻璃/胶原蛋白组12只、58S生物玻璃组12只分别植入相应支架材料,空白对照组4只不植入任何物质。主要观察指标:检测植入材料2,4,8,12周后缺损部位X射线、硬组织切片、骨形成率和矿化沉积率。结果:40只模型兔80条桡骨全部进入结果分析。①术后所有动物伤口愈合良好,未发生骨折。②生物活性玻璃/胶原蛋白/透明质酸/磷酸丝氨酸组术后4周硬组织切片可见大量玫瑰红色新骨和绿色骨小梁形成,术后12周支架已基本由新生骨组织替代,哈弗系统形成;术后8周X射线显示骨皮质连接完整,12周缺损完全修复,髓腔基本再通。③生物活性玻璃/胶原蛋白/透明质酸/磷酸丝氨酸组术后4周的矿化沉积率和新骨形成速率比58S生物玻璃组高出了2.85倍和3.16倍,且明显优于生物活性玻璃/胶原蛋白组(P<0.001)。结论:生物活性玻璃/胶原蛋白/透明质酸/磷酸丝氨酸仿生复合支架在诱导成骨和促进生物矿化方面性能优越,其矿化机制有待进一步观察探讨。

摘要：现代移植免疫学理论和技术的发展,极大地推动着临床骨髓移植的进步,已从有血缘关系间 (相关 )的移植发展到无血缘关系 (无关 )间移植,从遗传上全相关间移植发展到半相合间的移植,从治疗低危险度恶性血液病发展到治疗高危险度恶性血液病,从住院病房中移植发展到门诊家庭中的移植.

摘要：目的:探讨舒尼替尼诱导人肝癌HepG2细胞表达的自然杀伤细胞2族成员D配体(natural killer group 2 member D ligands,NKG2DLs)与核因子kappa B(nuclear factor B kappa,NF-κB)信号通路之间的相互作用。方法:常规体外培养HepG2细胞,利用实时荧光定量PCR检测1μmol/L舒尼替尼处理HepG2细胞24 h前后NF-κB基因家族成员mRNA的表达情况,利用计算机辅助设计并合成NF-κB1、NF-κB2和Rel B siRNA引物,通过脂质体法将目的基因siRNA转染于HepG2细胞,荧光显微镜观察转染情况,实时荧光定量PCR检测干扰效率,Western blotting检测siRNA转染前后He G2细胞内NF-κB1、NF-κB2和Rel B蛋白表达,流式细胞术检测siRNA前后HepG2细胞NKG2DLs表达率。结果:实时荧光定量PCR结果显示,舒尼替尼处理HepG2细胞后,NF-κB1、NF-κB2和Rel B mRNA表达水平升高,主要以NF-κB2 mRNA和Rel B mRNA升高为主。荧光显微镜观测siRNA转染后HepG2细胞红色荧光表达率约为60%,干扰效率达95%以上。siRNA转染后HepG2细胞内NF-κB1、NF-κB2和Rel B蛋白表达水平明显下降,siRNA转染+药物组NKG2DLs表达率明显低于药物处理组(P<0.05)。结论:首次揭示了舒尼替尼通过NF-κB旁路途径诱导肿瘤细胞表达NKG2DLs。

摘要：背景:近期很多研究表明,神经系统的营养和支配对于骨发育和骨折愈合修复过程具有的作用。目的:探讨脑源性神经营养因子对骨折愈合及其生物力学性能的影响。设计:以实验动物为研究对象的随机对照实验。单位:一所军医大学医院的创伤骨科和血液科。材料:SD大鼠胫骨横行骨折髓内针内固定模型共16只,随机分到实验组和对照组各8只。干预:术后实验组每隔1d皮下注射脑源性神经营养因子(BDNF),对照组注射生理盐水,然后分别在第2,3,4,5周取动物胫骨进行结果观察。主要观察指标:两组骨折愈合情况大体比较、生物力学测试和电镜观察。结果:大体观察可见术后2周两组骨折均为结缔组织连接,可见明显的活动;3周时实验组已呈编织骨性愈合,而对照组仍有较明显的骨折端活动;4周两组均呈骨性愈合,但实验组的骨痂较小,成角畸形较小;5周时实验组骨折线已消失,骨折塑形好,对照组骨折端仍呈较大骨痂。大体测量骨折矢状面成角,在第3,4,5周实验组分别为(25.00±1.82)°,(24.75±2.50)°,(23.25±3.77)°,对照组分别为(32.00±2.45)°,(33.00±5.72)°,(29.25±2.22)°(P<0.05)。生物力学测试中,各个阶段实验组抗折应力均优于对照组(P<0.05)。结论:早期、不间断的应用BDNF对骨折愈合修复过程中的各阶段均可能有促进作用。

摘要：目的 :克隆有特异调控活性的人CD34基因 5′端转录调控序列。方法 :根据已知的CD34抗原基因 5′ 端启动子调控序列 ,自行设计 2对引物 ,用巢式 PCR方法从染色体DNA中成功的克隆 6 6 1bp长度的CD34抗原转录调控序列 (CD34TRS) ,CD34TRS片段插入启动子报告质粒 pEGFP 1,观察重组质粒pCD34EGFP在造血系细胞和非造血系细胞中的调控表达作用。结果 :经限制性内切酶酶切鉴定及DNA序列分析证实 ,克隆的CD34启动子序列与文献报道的顺序基本一致 ,能特异调控EGFP基因在造血细胞系细胞K5 6 2中表达。结论 :所克隆的人CD34分化抗原转录调控序列有特异调控真核基因表达作用 ,本研究为构建造血干细胞特异性表达载体奠定了基础。

摘要：背景:模拟生理条件体外细胞培养可排除生物材料受体内多种因素的影响,控制实验条件,方法简便,重复性好。目的:以改性生物活性玻璃粉体和胶原为基础,配以透明质酸钠、磷酸丝氨酸制备4种仿生复合支架材料,观察其与体外成骨细胞的细胞相容性。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-03/08在南方医科大学珠江医院临床医学基础研究所完成。材料和方法:小鼠胚胎成骨细胞株MC3T3-E1由浙江大学医学院病原生物学教研室提供。采用冷冻干燥和仿生矿化技术自制4种仿生复合骨组织工程三维支架材料。将小鼠胚胎成骨细胞种植于自制4种支架及58S生物玻璃支架上。主要观察指标:培养1,3,5d后,MTT法测定各组材料上成骨细胞活性,铁氰化钾法检测各组材料上细胞的碱性磷酸酶活性。倒置相差显微镜观察细胞动态变化,扫描电镜观察细胞形貌特征及其在材料上的生长情形。结果:成骨细胞活性和碱性磷酸酶活性测定结果表明,生物活性玻璃/胶原蛋白/透明质酸/磷酸丝氨酸组>生物活性玻璃/胶原蛋白/磷酸丝氨酸组>生物活性玻璃/胶原蛋白/透明质酸组>生物活性玻璃/胶原蛋白组>58S生物玻璃组,各组间差异均有显著性意义(P均0.05);成骨细胞活性和碱性磷酸酶活性随着培养时间增长而增加,各时间点间比较差异均有显著性意义(P均<0.05)。成骨细胞在4种仿生复合材料上能良好黏附、增殖,尤其在生物活性玻璃/胶原蛋白/透明质酸/磷酸丝氨酸复合支架上生长活力最旺盛,在58S生物玻璃上黏附差、细胞逐渐死亡。结论:仿生复合支架生物活性玻璃/胶原蛋白/透明质酸/磷酸丝氨酸具有促进成骨细胞黏附、生长、分泌与迁移等作用,细胞相容性好,与天然骨基质的生物效应相类似,优于其他3种复合支架材料。

摘要：背景:GPIIb/IIIa是特发性血小板减少性紫癜患者最常见的血小板糖蛋白,已证实该蛋白独特型抗体结合血小板后会激活补体,破坏血小板。目的:以GPIIb/IIIa抗体为靶抗原,应用生物信息学软件对其CTL、Th细胞表位进行多参数预测。设计、时间及地点:开放性实验,于2008-03/08在珠江医院血液科实验室完成。材料:GPIIb/IIIa抗体的氨基酸序列由GENBANK公司提供。方法:分别应用SYFPEITHI,RANKPEP,BIMAS,SVMHC,PREDEP,MHCPRED,PROPRED软件对人和鼠源的血小板糖蛋白GPIIb/IIIa抗体蛋白进行HLA-A*0201,HLA-A*1101,HLA-A*2401限制性表位预测,经去除能引起自身免疫的已发表的多肽,取前者覆盖后二者的多肽为混合CTL表位,再联合软件predTAP、TAPPred的TAP结合预测结果,以及NetChop、MAPPP、PAProC软件的蛋白酶切位点预测结果,取能包含二者的多肽为CTL修正表位。用基于肽MHC-Ⅱ结合的算法Syfpeithi,RANKPEP,Mhcpred,HLAPRED进行HLA-DR的Th表位预测,最后取Th表位覆盖CTL修正表位,得到CTL、Th细胞混合表位。结果:从1740条多肽中筛选出5条人源抗人血小板糖蛋白GPIIb/IIIa抗体的CTL、Th细胞混合表位肽,即Anti-GPIIb/IIIa-Human的第1-15,24-38,50-64,65-81,109-121位;筛选出5条鼠源抗人血小板糖蛋白GPIIb/IIIa抗体的CTL、Th细胞混合表位肽,即Anti-GPIIb/IIIa-Mice的第1-15,26-40,46-60,68-82,93-107位。结论:根据血小板糖蛋白GPIIb/IIIa抗体预测的CTL、Th细胞优势抗原表位,可用于制备特异性抗体,可成为特发性血小板减少性紫癜新疫苗研究的靶点。

摘要：目的 探讨阻断Eag—1通道活性对胶质瘤细胞生物活性的影响。方法设计3对Eag-1通道蛋白的特异性小分子干扰RNA（siRNA）并转染人U87细胞，RT—PCR及Westernblotting检测其对U87细胞Eag-1 mRNA和蛋白表达的影响；将50nmol／LsiRNA1、siRNA2转染U87细胞，同时设5、10、20、30和40mmol／L奎尼丁（Eag-1通道特异性阻断剂）组和空白对照组，MTT法观察作用24、48、72h后U87细胞增殖情况，流式细胞仪检测作用48h后细胞周期、细胞凋亡率、胞内活性氧簇（ROS）浓度的变化。结果RT—PCR及Westernblotting结果显示siRNAl和siRNA2转染U87细胞12h后细胞Eag-1mRNA、蛋白的表达产物带明显弱于空白对照组，而siRNA3转染组产物条带虽也弱于空白对照组，但条带仍清晰；MTT检测结果显示与空白对照组比较，50nm01／LsiRNA1、siRNA2转染组和10、20、30、40mmol／L奎尼丁组细胞培养24、48和72h后吸光度值均降低，差异有统计学意义（P＜0．05），奎尼丁IC。为33．7mmol／L。流式细胞仪分析显示与空白对照组比较，50nmol／LsiRNA1、siRNA2转染组和33．7mmol／L奎尼丁组G1期细胞百分比、细胞凋亡率和胞内ROS水平均增加，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论阻断Eag-1通道活性能明显抑制胶质瘤细胞增殖，使G1期细胞比例、胞内ROS水平明显升高并诱导其凋亡。

摘要：目的　构建BALB/c小鼠MHCI类分子的逆转录病毒表达载体。方法　用RT -PCR从BALB/c小鼠脾细胞基因组中扩增BALB/c小鼠MHCI类分子H -2Dd的编码基因 ,克隆于载体pGEM -T中。经EcoRI和XhoI双酶切后 ,亚克隆于逆转录病毒载体pMSCV ,构建pMSCV -H2Dd重组逆转录病毒表达质粒 ,并进行酶切和序列测定鉴定。结果　用EcoRI和XhoI双酶切鉴定证实 ,H -2Dd基因正确插入载体pMSCV。H -2Dd的编码基因经序列测定证实 ,与文献报道完全一致 ,阅读框架与设计相符。结论　成功构建BALB/c小鼠MHCI类分子编码基因的逆转录病毒载体 。

摘要：慢性粒细胞白血病(CML)的免疫治疗是清除白血病微小残留病并最终根治CML的方向之一,包含BCR-ABL融合区的多肽具有良好的免疫原性,在体内、外可诱发BCR-ABL特异的T细胞克隆.以BCR-ABL融合肽瘤苗激发特异性T细胞应答抗CML免疫治疗有希望成为根治CML残留白血病的有效手段.本实验通过基因工程技术,设计一个280 bp的融合抗原基因片段,包含HLA-A2,HLA-A3,HLA-DR11等3个限制性BCR-ABL抗原表位,以及破伤风类毒素和霍乱毒素B亚单位的外源T细胞刺激表位.该融合抗原基因已在大肠杆菌中获得高效表达,所纯化的融合蛋白具有良好的活性及抗原性,为进一步实验奠定了基础.