摘要：基于ITS2片段序列特征,该研究设计了西洋参的特异性引物、探针,通过条件的优化建立了西洋参的实时荧光定量PCR快速鉴别方法。利用该方法对43个中药材样本进行了验证,结果能准确地鉴别出43个药材样本中的22个西洋参,并且灵敏度高,检测限可达到1×10-4ng。该方法具有准确、快捷、灵敏的特点,可对西洋参及其加工产品进行准确的鉴别和检测,应用前景广阔。

摘要：针对大肠埃希氏菌O145的O抗原基因簇的wck D基因的特异性序列设计引物和Taqman探针,建立检测大肠埃希氏菌O145的荧光PCR方法,对其灵敏度、特异性进行验证,并将其用于食品样品的检测。结果表明,本研究中的方法可实现对大肠埃希氏菌O145的特异性扩增,其它27株非O145大肠埃希氏菌和20株非大肠埃希氏菌细菌的菌株均无扩增;检测的灵敏度可达165拷贝/反应;339份食品样品EC肉汤增菌后用本荧光PCR法进行检测,检出大肠埃希氏菌O145阳性31份,阳性率为9.1%。实验结果表明,本研究成功建立了可用于食品中大肠埃希氏菌O145的Taqman探针荧光PCR方法,食品样品采用EC肉汤增菌24 h、热裂解法提取核酸,增菌后检测所需时间由至少3 d^7 d缩短为仅需2 h^3 h,食品检测全过程仅需约28 h,经证实本方法特异性强、操作简便,为食品中大肠埃希氏菌O145提供了一种的快速检测手段。

摘要：根据过敏原大豆的保守内源基因Lectin的序列,设计6条特异性LAMP引物,利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物,建立食品中过敏原大豆成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价。结果表明:该方法能够特异性检出食品中的过敏原大豆成分,特异性高,灵敏度达0.1%(w/w)。对含有大豆成分为10%、1%、0.1%、0%(w/w)的样品分别进行20次重复实验,其稳定性好,假阳性和假阴性率为0%。本实验建立的LAMP方法适用于特异性快速检测食品中的过敏原大豆成分。

摘要：针对大肠埃希氏菌(Escherichia coli,***)O121的O抗原基因簇的vio A基因的特异性序列设计引物和探针,通过对荧光聚合酶链式反应(real-time PCR)扩增条件的优化,建立检测*** O121的血清型特异性荧光PCR方法。*** O121标准菌株呈现扩增曲线,其它22株非O121 ***和19株非***细菌的菌株均无扩增,检测的灵敏度可达155拷贝/反应。339份食品样品用EC肉汤增菌后用本荧光PCR法进行检测,检出*** O121阳性9份,阳性率为2.7%,其中市场上采购获得的生猪肉和生牛肉阳性率达4.1%。上述试验结果表明,本方法特异性强、操作简便,食品中*** O121检测全过程可在1.5 d内完成,适用于食品中*** O121的快速检测。

摘要：针对产志贺毒素大肠埃希氏菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC) stx1和stx2基因的特异性序列分别设计4条特异性引物,采用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,利用实时浊度仪建立食品中STEC的LAMP实时浊度法快速检测方法。LAMP反应在实时浊度仪63℃恒温下1 h可完成。对方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价,并在实际样品检测中进行应用。经优化该方法的检测灵敏度可达150拷贝/反应,4株STEC菌株LAMP扩增结果与其基因型一致,其他21株非STEC菌株均未出现非特异性扩增。395份食品样品检出STEC阳性68份(阳性率为17.2%),所检食品类别中畜产品阳性率最高(达31.3%),禽产品、水产品和可生食蔬菜均有少量阳性样品检出,阳性样品中以stx2基因阳性型为主。结果表明,LAMP实时浊度法具有快速、灵敏、特异性强、操作简便的优势,适用于食品中STEC的快速筛查。

摘要：以常见的转基因大米、大豆和玉米为研究对象,设计了相应的引物对与探针,构建了可视的生物芯片检测方法。通过PCR对样品核酸进行扩增,将扩增产物与固定于芯片的特异性探针进行杂交分析,对该方法的特异性、灵敏度、重复性和稳定性进行了评价。结果表明,该方法操作简便、通量高、实用性强,能够特异性检出大米、大豆和玉米中的转基因成分,特异性高,重复性及稳定性好,灵敏度达0.1%。建立的生物芯片方法适用于特异性快速检测大米、大豆和玉米中的转基因成分。

摘要：根据转基因植物常用的选择标记基因NPTⅡ(HE582394.1)的序列,设计6条特异性LAMP引物,利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物,最终建立转基因植物NPTⅡ基因的LAMP检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价。结果表明,该方法能够特异性检出含有NPTⅡ基因的植物及其加工产品,特异性高,灵敏度达0.5%。对转基因玉米MON863(含NPTⅡ基因)含量为10%、1%、0.5%、0%(W/W)的样品DNA分别进行扩增,其稳定性好,无假阳性和假阴性。所建立的LAMP方法适用于特异性筛选检测含NPTⅡ基因的植物及其加工样品。

摘要：为了研制小反刍兽疫病毒(PPRV)与蓝舌病病毒(BTV)双重荧光RT-PCR快速检测试剂盒,根据GenBank公布的小反刍兽疫病毒、蓝舌病病毒的基因序列,设计两套特异性的引物和探针,建立基于Taqman探针的双重荧光RT-PCR快速检测小反刍兽疫病毒与蓝舌病病毒的方法。实验结果表明,该方法特异性好、灵敏度高,检测最低浓度为10拷贝/μL数量级阳性标准品。通过对临床样品的检测,证实本研究建立的检测方法具有较好的临床应用价值。

摘要：本文首次测定了苹果异胫小卷蛾(Thaumatotibia leucotreta)、坚果异胫小卷蛾(Thaumatotibia batrachopa)、苹果蠹蛾(Cydia pomonella)、梨小食心虫(Grapholita molesta)等8种卷蛾的r DNA ITS的序列,以探索苹果异胫小卷蛾的分子鉴定方法。8种卷蛾的ITS1和ITS2区序列变异较大,其中ITS1区所分析307个位点中可变位点达到212个,ITS2区则在分析的203个位点中可变位点达到151个。根据8种卷蛾ITS区序列差异,设计了针对苹果异胫小卷蛾的特异性引物,应用特异性引物对样品进行PCR扩增,扩增产物经凝胶电泳分析,结果表明只有苹果异胫小卷蛾的样品有目的 DNA扩增条带,其余卷蛾无扩增条带。灵敏度试验结果显示,最低检测限量可达0.01 ng/μL。因此,采用本文设计的ITS区特异性引物可以对苹果异胫小卷蛾进行快速分子鉴定。

摘要：本研究选取9种常见转基因食品外源基因,设计了引物对与探针,并制备可视芯片。通过PCR对样品核酸进行扩增,将扩增产物与固定于可视芯片的特异性探针进行杂交分析,验证了芯片的特异性和重复性,并对检测芯片灵敏度进行测试。该方法可以一次检测出5种的常见转基因植物,且实验结果表明该方法高效、准确、简便、高通量、实用性强,灵敏度可达0.1%,并摆脱了基因芯片在杂交结果分析阶段对荧光扫描仪的依赖,杂交结果明显直观。