摘要：目的开发EST-SSR标记,分析其在党参属及近缘属种间的通用性。方法利用MISA软件对轮叶党参在NCBI公布的EST序列进行SSR位点查找,Primer 3.0软件设计引物,经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳对引物进行初步筛选,聚丙烯酰胺凝胶电泳对所筛选的引物进行多态性检测。结果共查找到204个EST-SSR位点,总长5 263 bp,平均长度25.80 bp,出现频率为22.97%,其中单核苷酸、二核苷酸和六核苷酸重复占比最多,分别为36.8%、24.8%和15.3%。单核苷酸、二核苷酸、六核苷酸中的主要重复基元类型是A、TG和CAGCTC/GTGGCA。共设计引物112对,以党参为模板,能够扩增出清晰稳定条带的引物有67对,有效引物比率59.82%,其中27对能扩增出多态性条带,多态引物比率24.11%。随机选取5对引物对党参属及桔梗共12份材料进行PCR扩增,聚类结果将党参属和桔梗属分为2大类。结论研究筛选出的EST-SSR标记能够在党参属及近缘属内进行区分鉴别,研究结果为党参种质鉴别、遗传多样性分析及资源的评价利用等提供了重要技术手段。

摘要：利用转录组测序技术开发SSR标记,旨在为食用黄花菜种质资源鉴定、评价及遗传多样性分析提供技术支撑。测序共得到104177个Unigene,总长度为79106833 bp,平均长度为759 bp,利用MISA软件对Unigene进行搜索,共检测到15890个SSR,其中单核苷酸、二核苷酸和三核苷酸重复占比较高,分别为18.57%、27.23%和44.26%。设计合成SSR引物114对,通过聚丙烯酰氨凝胶电泳最终筛选出20对核心引物,20对引物在43份黄花菜种质中共检测到88个等位变异,每个位点的等位变异数为3~8个,平均为4.4个,多态信息含量(polymorphism information content,PIC)值变幅为0.23~0.77,平均为0.4995。依据扩增产物的片段大小确定了每个SSR位点的等位变异以及对应的参照品种,建立了基于SSR的DNA指纹鉴定技术体系,并构建了43份黄花菜种质的DNA指纹数据。该研究开发的SSR标记具有丰富的多态性。

摘要：目的开发卷丹Lilium lancifolium、兰州百合L. davidii var. willmottia、岷江百合L. regale、香水百合L. casa和龙牙百合L. brownie var. viridulum的EST-SSR分子鉴别体系,分析EST-SSR分子标记技术对百合近缘种的开发效率和鉴别能力。方法利用***程序对NCBI公布的百合属EST基因序列进行SSR位点的识别,通过Primer3程序模块批量生成EST-SSR引物,经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳对引物进行初筛,用聚丙烯酰胺凝胶电泳验证初筛引物,标记并分析不同种质的特征泳带,构建鉴别体系。结果共设计了199对SSR引物,经过26对引物的筛选,获得了2对高效鉴别引物,其中引物JZ391构建的分子鉴别体系,可有效鉴别混掺的商品百合,具有一定的实用价值。结论基于研究材料具有极端的遗传特征,本实验鉴定标记开发非常高效,研究结果证实了物种的遗传基础是影响其EST-SSR分子标记开发效率的重要因素,同时,该案例可为其他类似百合遗传基础的中药材进行EST-SSR标记开发,提供参考尺度。

摘要：采用同源序列克隆方法，通过设计特异性引物从甘肃西和半夏叶片基因组DNA中克隆到1条1069bp的半夏凝集素基因pta，与以同科内植物的mRNA为模板扩增得到的凝集素基因序列的同源性很高，达到98％以上，功能区完整，具有1条信号肽和3个甘露糖结合区，GenBank登录号AY725425。用该基因替换pBI121载体的GUS基因，正向插入35S启动子之下，构建了植物表达载体pBI—pta。通过农杆菌介导法转化烟草，从20株Kan抗性植株中得到PCR检测阳性植株14株，证明pta已整合到烟草基因组中。对随机挑取的7株PCR阳性植株进行了抗蚜虫（Myzus persicae）筛选试验，结果表明：不同株系蚜口密度抑制率在22．5％～89．4％，平均蚜口密度抑制率56．2％。

摘要：采用同源序列克隆方法,通过设计特异引物克隆甘肃西和半夏(Pinellia ternata)凝集素基因pta,其序列全长l069bp,编码区804bp,编码268个氨基酸残基,有3个典型的甘露糖结合位点,预测分子量和等电点分别为29.1kD和7.77,GenBank登录号AY725425。构建了35S启动子驱动的植物表达载体pBI-pta。建立了陇棉2号花粉管通道法遗传转化技术,获得5株卡那霉素抗性和PCR检测阳性植株,为建立棉花转基因方法和培育抗虫种质奠定了基础。

摘要：利用亚麻NCBI数据库中的7941条亚麻EST序列进行SSR的筛选,共发现222个SSR,占整个EST数据库的2.73%,其中三核苷酸重复单元的EST-SSR占总SSR的72.1%,二核苷酸和四核苷酸二者出现的频率基本相近,分别占总SSR的14.4%和13.5%.AGAA是四核苷酸中的优势重复类型,占四核苷酸重复类型的67.67%.设计的21对EST-SSR引物中有18对在10个亚麻材料中有扩增产物,占设计引物的85%,有14对产物条带比较清晰并具有多态性.基于SSR标记进行聚类分析,可将10个亚麻材料划分为3个组.本研究建立的亚麻SSR标记,为亚麻遗传多样性鉴定、分子作图等研究提供了一种有效的分子标记系统.

摘要：为全面评价引进的欧洲、北美啤酒大麦种质在甘肃省的育种潜力,选取来自欧洲、北美的26份啤酒大麦及甘肃省自育的7份啤酒大麦种质为试验材料,采用随机区组设计,鉴定了33份材料的农艺、产量和品质性状。结果表明,不同地区来源的参试品种间在农艺性状上具有显著差异,其中,欧洲啤酒大麦品种间差异最大,其次为北美啤酒大麦,甘肃啤酒大麦品种间差异较小。参试品种间产量性状也存在显著差异,其中,欧洲啤酒大麦和甘肃啤酒大麦品种间产量差异显著,北美啤酒大麦品种间差异不显著;北美二棱啤酒大麦平均产量最高,其次为欧洲啤酒大麦、甘肃啤酒大麦、北美多棱啤酒大麦。参试品种中,甘啤7号产量最高,为9 364.28 kg·hm^(-2),其次为甘啤6号(9 269.03 kg·hm^(-2))、MERIT(9 223.32 kg·hm^(-2))和Z090M066M(9 143.31 kg·hm^(-2))。参试品种间蛋白质含量、千粒重、饱满度差异均达到显著水平;其中,甘肃啤酒大麦的千粒重最高,其次为北美啤酒大麦;欧洲啤酒大麦的饱满度最高,其次为甘肃啤酒大麦。麦芽品质方面,北美啤酒大麦麦芽的水分、蛋白质含量、浊度和细粉浸出物较低,但可溶性氮、库值含量、α-氨基氮、α-淀粉酶和糖化力较高;甘肃啤酒大麦麦芽的水分、蛋白质含量、浊度、细粉浸出物、β-葡聚糖含量较高;欧洲啤酒大麦品种的β-葡聚糖含量较低。综上所述,欧洲、北美和甘肃啤酒大麦品种互有优劣,在选育啤酒大麦新品种时,不同来源的种质资源都应给予充分的重视和利用。

摘要：为了提高野生白刺(Nitraria sibirica)组培过程中的增殖系数,以野生白刺的无菌苗幼嫩茎段为外植体,利用响应面法对白刺茎段增殖诱导试验进行优化。在添加不同激素浓度NAA、IBA、IAA与6-BA组合的单因素增殖诱导试验基础上,根据CCD中心组合试验设计原理,采用2因素5水平的响应面法,对挑选出的6-BA和IBA两个因素浓度进行优化,得出增殖诱导最佳培养基为MS+6-BA(0.22mg·L-1)+IBA(0.55mg·L-1)。在此条件下,实际增殖系数可达到3.90。优化后的培养基使得增殖系数从之前单因素实验所得最高增殖系数3.63提高到了3.90。为野生白刺组培方面稳定增殖以及后续在组培环境下与锁阳接种研究提供了保障。

摘要：为了降低啤酒大麦蛋白的含量,提高啤酒大麦品质,利用甘肃推广面积最大的品种甘啤4号为材料,克隆大麦醇溶蛋白基因保守区序列,构建RNAi表达载体。根据已知大麦醇溶蛋白基因保守序列设计一对特异性引物B2PF5′-CAACCATTTC-CACAGCAACCACCAT-3′,B2PR5′-GAAAGATAGAGTAGACGATTGCACG-3′,采用PCR技术从甘啤4号大麦基因组中获得了1个349bp片段(GP4)。依据载体pHANNIBAL和pART27的结构,分别将GP4按所对应酶切位点正反向插入,利用热激法转化。结果分析显示,克隆出的片段与GenBank(NCBI)中醇溶蛋白基因核苷酸序列同源性高达92%,所构建成的RNAi表达载体pART27-pHAN-GP4中含目标片段。

摘要：采集当归及近缘属种材料,从文献中搜集SSR引物,及从NCBI中下载当归EST序列并设计若干引物,采用SSR标记技术筛选可用于鉴定当归真实性的特异标记。结果表明,共合成引物75对,利用2个当归模板进行引物筛选,能够扩增出清晰条带的引物有21对,有效引物扩增率为28%,筛选出多态性引物5对,多态引物扩增率为6.7%。5对引物在36份当归及近缘属种间共检测到41个位点,平均为8.2个;多态性位点41个,多态性比率(PPB)为100%;多态信息含量为0.1187~0.3101,平均为0.2588。遗传距离和相似度分析表明,当归与独活的遗传距离最近,与红柴胡遗传距离最远。当归与近缘属种间的遗传距离最小值明显大于4个产地的当归种内遗传距离最大值,因此,SSR标记可有效地鉴定区分当归与其它近缘属药材。