摘要：目的应用荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术,建立一种快速、灵敏度高、特异性强且可以定量分型检测单纯疱疹病毒(HSV)的方法。方法根据单纯疱疹病毒糖蛋白B基因序列设计引物和探针,建立HSV1、2型检测的方法;构建标准品进行定量分析,测试方法的灵敏度;检测相关的其它临床分离菌株和样本,测试方法的特异性。结果检测HSV1、2的自建标准品,检测下限分别可以到达300copy/mL和400copy/mL,且标准曲线的相关系数均大于0.998。通过检测参考菌株和临床标本,证明具有100%的特异度;且可以对HSV1、2分型。结论本方法是一种快速、灵敏且准确的HSV分型检测方法,具有重要的临床使用价值。

摘要：目的通过对绵羊骨髓细胞抗菌肽(sheep myeloid antibacterial peptides with 29 amino acids,SMAP-29)的活性片段SMAP-29(1-18)基因的改造,使其以C-端融合蛋白的形式在大肠埃希菌(***)BL21(DE3)中表达。方法根据大肠埃希菌偏爱密码子表,将SMAP-29的活性片段SMAP-29(1-18)基因序列进行改造,应用ProtParam分析SMAP-29的理化特性,Anthorprot软件预测其螺旋轮结构,设计新的基因片段,插入质粒pET-30a中,构建重组表达质粒pET-30aSMAP-29[1-18,K2,4,L13],转化感受态*** BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物过2次Ni2+NTA His Bind resin柱进行纯化。结果 SMAP-29基因序列经改造后,稳定性、等电点及半衰期均明显提高。重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确。表达的重组蛋白相对分子质量约61 257,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的41%,纯度为81%。结论已成功对SMAP-29基因进行改造,实现了其在*** BL21(DE3)中的高表达,获得了纯度较高的目的蛋白,为进一步规模化生产SMAP-29奠定了理论及实践基础。

摘要：目的探讨胃癌高发区河西走廊地区患者幽门螺杆菌(Hp)iceA和babA基因型的分布及其与消化道疾病相关因素的关系。方法收集甘肃省第二人民医院、张掖市人民医院、武威市肿瘤医院及金川公司职工医院82例胃镜检查患者的胃黏膜标本、从胃黏膜中分离并培养Hp菌株,设计引物进行PCR扩增及基因型判定,通过病例资料整理,分析Hp菌株中iceA和babA2基因不同基因型与患者临床病理类型、性别和年龄的关系。结果分离Hp菌株并成功扩增73份目的基因,其中HpiceA1型和2型的构成比分别为76.71%(56/73)和23.29%(17/73),babA2基因型为38.36%(28/73)。HpiceA1型在浅表性胃炎、萎缩性胃炎、消化性溃疡组的患者中的感染率均明显高于iceA2型(P0.05)。消化性溃疡、胃癌患者中babA2型感染率明显高于其他病理组(P0.05)。结论河西走廊地区Hp菌株iceA基因均为阳性并且以1型为主,其分布与患者的疾病类型、年龄相关;babA2基因型感染多与消化性溃疡和胃癌有关。