摘要：稻瘟病严重威胁福建省水稻生产。稻瘟病菌田间种群无毒基因的变异监测是实现优质抗稻瘟病水稻品种合理布局和轮换、有效预防因抗性丧失导致的稻瘟病爆发成灾的重要措施。本研究以福建省3个水稻主产区采集并分离的113个稻瘟病菌单孢菌株为材料,检测其无毒基因的变异情况。首先,利用24个已知抗性的水稻单基因系对它们进行致病性测定,分析致病频率、毒力频率、无毒基因的存在频率和无毒基因的组合频率。结果显示,福建省建阳、宁化和上杭3个水稻主产区的稻瘟病田间菌株对24个水稻单基因系的致病频率分别为12.50%~95.83%、29.17%~100%和4.55%~86.36%。3个水稻主产区菌株均对Pik^(s)、Pib、Pi3和Pi12表现为强毒性,而建阳和宁化菌株还对其他12个抗性基因表现为强毒力(毒力频率≥70%),包括Pia、Pii、Piz、Pita、Pit、Pis^(h)、Pi5、Pi7、Pi19、Pi20、Pita^(2)和Pi11。其次,本研究还设计了8个无毒基因Avr-Pita、Avr-Pib、Avr-Pik、Avr-Piz-t、Avr-Pii、Avr-Pi9、Avr-Pi54和Avr-Co39的特异性引物,对单孢菌株进行基因型鉴定。结果显示,所有菌株均未检测到Avr-Co39,表明这些稻瘟菌株中均不携带该无毒基因。此外,Avr-Pib的出现频率也很小,仅为37.17%,但是该比例仍远超致病性测定中推测的Avr-Pib所占比例,表明检测到的Avr-Pib中很大一部分存在突变。为此,对Avr-Pib基因部分扩增产物进行测序,发现这些菌株的Avr-Pib在启动子区发生了缺失、插入和替换等突变。此外,部分菌株的Avr-Pik或Avr-Piz-t也存在启动子单核苷酸变异,而上杭菌株Avr-Pi9和宁化菌株Avr-Piz-t则均存在编码区的突变。这些位点的突变均可能导致无毒基因功能的缺失。研究还表明,携带Pi1、Piz5、Pi9和Pik、Pik^(h)、Pik^(m)位点的水稻品种仍适合在福建地区种植。

摘要：为快速检测马铃薯晚疫病菌——致病疫霉Phytophthora infestans对甲霜灵的抗性,基于已知致病疫霉RPA190基因的T1145A变异引起的F382Y氨基酸点突变与甲霜灵抗性有关,通过设计4对特异性引物F382Y-F1/F382Y-R、F382Y-F2/F382Y-R、F382Y-F3/F382Y-R和F382Y-F4/F382Y-R建立等位基因特异性PCR(allele specific-polymerase chain reaction,AS-PCR)快速分子检测法,其中F382Y-R引物在4对引物里保持不变,并分析所建分子检测法的特异性和灵敏度。结果表明,正向特异性引物F382Y-F2、F382Y-F3和F382Y-F4的3′末端在致病疫霉抗甲霜灵菌株原有核苷酸突变位点1145A(对应引物为F382Y-F1)的基础上,再人工引入第1144位的核苷酸突变,将1144T分别突变成1144G、1144C和1144A,并优化退火温度和特异性引物与内参引物ITS1/ITS4比例,最终确定最适退火温度分别为54、60和58℃,特异性引物与内参引物最适浓度比例均为5∶1。以该3条引物对应的3对特异性引物和内参引物ITS1/ITS4组成的3组多重AS-PCR引物对甲霜灵敏感和抗性菌株具有良好的特异性,敏感菌株的扩增产物含1条879 bp的内参片段,抗性菌株的扩增产物为1条879 bp的内参片段和1条461 bp的目的片段。3组AS-PCR检测体系均具有较高的灵敏度,其中引物F382Y-F4/F382Y-R对致病疫霉DNA的检测灵敏度达0.4 pg/μL,引物F382Y-F2/F382Y-R和F382YF3/F382Y-R的检测灵敏度达4 pg/μL。

摘要：为提高昆虫病原真菌莫勒菌产孢量,通过正交试验设计L_(9)(3^(4)),对莫勒菌培养基成分进行筛选和优化。结果表明,有助于莫勒菌产孢的碳源、氮源、金属离子和维生素分别为7 g·L^(-1)可溶性淀粉、10 g·L^(-1)酵母浸粉、4×10^(-4)mol·L^(-1)Fe^(2+)和50 mg·L^(-1)V_(C)。莫勒菌在优化培养基上培养2周后的产孢量可达1.2×10^(8)孢子·cm^(-2),比优化前提高60倍。

摘要：采用溶剂蒸发法制备了多杀菌素·甲氨基阿维菌素苯甲酸盐聚乳酸微球,考察了内相聚乳酸浓度(X1)、理论载药量(X2)和搅拌速率(X3)对微球载药量、包封率、粒径、跨距及5 d释放率的影响。用数学方法将试验设计中的多指标"归一"化,采用中心多点等距设计法,对各指标以及总评"归一值"进行二项式拟合,描绘三维效应面,用Design-expert V8.06软件对总评"归一值"较佳的试验条件进行预测。结果表明,当聚乳酸质量浓度和搅拌速率减小、以及理论载药量增大时,总评"归一值"增大。经预测,当聚乳酸质量浓度为77.79 mg/mL、理论载药量(质量分数)为51.06%、搅拌速率为560.91 r/min时,总评"归一值"理论值达到最大(0.681 1)。依据上述较佳条件制备的微球总评"归一值"实测值为0.630 8,与理论预测值的偏差为-5.03%,其中包封率为84.49%,粒径7.19μm,跨距为1.134,5 d释放率为52.95%。微球表面光滑,DSC测试结果表明,其有效成分与微球骨架结合完好。表明研究建立的数学模型可用来预测多杀菌素·甲氨基阿维菌素苯甲酸盐聚乳酸微球的较优配方。

摘要：柯浩体蛋白coilin是细胞器柯浩体的重要指示蛋白,参与病毒侵染。本文根据拟南芥柯浩体蛋白(Atcoilin)在本氏烟基因组数据库中的比对结果,确定其对应的靶基因并设计引物,首次获得本氏烟柯浩体蛋白(Nbcoilin)基因全长序列3017 bp,编码区为2409 bp,编码803个氨基酸;具有柯浩体蛋白3个典型功能域以及一个类似动物柯浩体蛋白特有的精氨酸/甘氨酸富集区("RGG"box);系统发育树显示该蛋白归属植物coilin分支,亚细胞定位显示该蛋白定位在柯浩体上,确定该蛋白是coilin的同源蛋白。研究结果为探究Nbcoilin的功能及其与病毒互作奠定了基础。

摘要：采用二次回归旋转组合设计方法,对苏云金杆菌WB7菌株的溶解性葡萄糖培养基配方进行了摇瓶优化筛选.建立了产孢量与C源、N源、P源的数学模型,分析了各因素的单因素效应和互作效应.试验获得的C、N、P三因素最佳组合为:C源、N源、P源的质量分数分别为 1. 27%、2. 144%、0. 122%.

摘要：利用细胞固定化制备苏云金芽胞杆菌LLP29-M19漂浮剂,为提高其漂浮效果,应用数学统计方法对该菌株漂浮剂配方进行优化.通过单因素试验确定海藻酸钠质量分数为1.0%,CaCl2质量分数为2.0%,空心玻璃微珠质量分数为3.5%;采用Plackett-Burman设计对影响该漂浮剂漂浮效果的8个因素进行筛选,确定漂浮剂配方中的3个重要影响因子为CaCl2、固定化时间和黑色素;通过最陡爬坡试验逼近以上3个因子的最大响应区域后,采用响应面分析获得这3个重要因子的最佳条件,确定LLP29-M19漂浮剂最佳配方:海藻酸钠0.80%、CaCl24.90%、空心玻璃微珠3.2%、菌粉3.0%、黑色素0.012%、苯甲酸钠0.3%、小白鼠饲料0.5%,固定化时间4.74 h.优化后的漂浮剂漂浮效果为1698.25,与响应面数学模型预测值的误差仅1.8%,比初始漂浮剂配方漂浮效果(64.5)提高了25.32倍.

摘要：通过设计特异引物PR1/PR2和ST1/ST2分别扩增出香蕉枯萎病菌1号和4号生理小种的DNA特异片段,优化检测体系的反应参数,建立了香蕉枯萎病菌生理小种双重PCR检测方法,检测体系的最佳退火温度为56℃,检测灵敏度的最低起始DNA为200pg。应用结果表明该体系有较高的准确性和稳定性,在1次PCR扩增中引物PR1/PR2和ST1/ST2能同时检测香蕉枯萎病菌1号和4号生理小种。

摘要：蜡蚧轮枝菌Lecanicillium lecanii(Z imm.)viegas V l6063菌株在2种不同培养基发酵培养后,经萃取、干燥浓缩得到4种不同的毒素粗提物(次生代谢产物),用均匀设计法设计实验方案研究了4种不同毒素粗提物对4种不同寄主植物上烟粉虱Bem isia tabaci(Gennad ius)成虫的忌避作用,并构建了模型,分析结果表明,忌避作用与毒素粗提物浓度显著相关,忌避率随毒素粗提物浓度增大而增大,1 g/L浓度的毒素粗提物忌避率与烟粉虱的寄主植物相关不显著,毒素的忌避作用与培养基相关不显著,从菌株发酵的菌丝体和发酵液中提取的毒素粗提物的忌避率差异不显著。

摘要：应用快速有效的数学统计方法对苏云金芽孢菌FS140耐温蛋白酶的发酵条件进行优化.首先采用二水平Plackett-Burman设计对影响产酶的8因素进行筛选,获得培养基成分中3个重要影响的因子:黄豆饼粉、酵母粉、葡萄糖;再利用响应面分析法对该3个因素进行3水平的优化,获得它们的最佳组合:黄豆饼粉1.8%、酵母粉0.36%、葡萄糖0.14%.优化后产酶水平达到837.71U mL-1,与响应面数学模型的预测值只有1.34%的误差.同时进行了发酵温度、初始pH、摇瓶装量与接种量等发酵条件的优化,FS140最终发酵产酶水平达918.91U mL-1.