摘要：构建人NOVA1基因的真核表达载体pCMV-Myc-NOVA1,转染PC12细胞后筛选最佳转染条件,进而结合细胞免疫组织化学研究NOVA1蛋白在PC12细胞中的表达分布,并探究其抗低氧活性。根据NCBI数据库NOVA1基因序列设计上下游引物,以pCR4-TOPO-NOVA1载体为模板采用聚合酶链式反应扩增获得NOVA1基因的全长c DNA编码序列,限制性内切酶SalⅠ和XhoⅠ双酶切后插入pCMV-Myc真核表达载体,酶切及直接测序验证后采用脂质体转染法转染入PC12细胞,针对转染比例和转染时间进行优化,进而采用实时定量PCR和Western blotting检测NOVA1蛋白的表达,最后采用细胞免疫组织化学检测NOVA1蛋白在PC12细胞中的表达定位及其抗低氧活性。通过酶切和直接测序验证,成功构建了真核表达载体pCMV-Myc-NOVA1;质粒和Lipo2000最佳转染比例为1:2.5,最佳转染时间为72 h;最佳转染条件下NOVA1基因和蛋白的表达水平显著增加,转染pCMV-Myc-NOVA1质粒后,NOVA1蛋白主要分布于细胞核和细胞质;过表达NOVA1的PC12细胞增殖活性明显增加。本文采用分子克隆的方法成功构建了NOVA1基因的真核表达载体,通过条件优化实现了高效表达并测定过表达NOVA1蛋白具有明显的抗低氧活性,不仅为深入揭示NOVA1蛋白的作用机理提供了重要参考,而且为NOVA1蛋白潜在的药物开发提供了重要技术支撑。

摘要：为研究应用锁核酸（10ckednucleicacid，LNA）抗HBV的作用，我们设计针对HBVS基因的反义寡核苷酸，分别经过LNA、硫代反义寡核苷酸（phosphorothioateantisenseoligodeoxynucleotide，PS-ODN）修饰，以阳离子脂质体为载体介导转染HepG2．2．15细胞，比较它们对细胞表达HBsAg、HBeAg和复制HBVDNA的影响。

摘要：微型超级电容器具有高功率密度和长循环寿命,有望为物联网设备供电。然而,较低的能量密度阻碍了微型超级电容器的实际应用。电极材料是影响微型超级电容器性能的一个重要因素。石墨烯由于具有比表面积大和导电性高等优势,是微型超级电容器的理想电极材料。当石墨烯用于具有平面构型的微型超级电容器时,其二维表面与电解质离子的传输方向平行,有利于提高电极的离子可及性。因此,构建石墨烯基平面微型超级电容器,引起了研究人员的极大兴趣。本文从电极材料设计的角度,总结了平面微型超级电容器用石墨烯和石墨烯基材料的最新研究进展。这些电极材料包括通过化学气相沉积、液相剥离、氧化石墨烯还原、激光诱导和杂原子掺杂方法获得的石墨烯,及石墨烯基复合材料(碳纳米管/石墨烯、过渡金属氧化物/石墨烯、导电聚合物/石墨烯和二维材料/石墨烯)。讨论了石墨烯基平面微型超级电容器面临的挑战和机遇,并展望了未来的研究方向和发展趋势。

摘要：目的构建葡萄糖调节蛋白75(GRP75)不同结构域、不同形式突变体与线粒体信号肽重组蛋白并鉴定其亚细胞定位。方法通过重叠延伸PCR,将线粒体靶向信号肽序列分别与GRP75不同结构域基因拼接。利用定点突变PCR分别扩增实现62和65位氨基酸突变的磷酸化失活型、磷酸化激活型突变体、482位氨基酸突变的底物结合缺陷型突变体及三位点同时突变重组体。将上述重组基因克隆入p EGFPC1真核表达质粒,酶切和测序验证后分别用脂质体转染He La细胞,Western blot法检测重组蛋白表达水平,激光共聚焦显微镜观察比较重组蛋白亚细胞定位情况。结果成功构建了线粒体信号肽融合或缺失的GRP75结构域、磷酸化失活和激活突变体、底物结合缺陷突变体真核表达质粒。各重组质粒的片段插入、位点突变、信号肽融合情况均符合设计目的,在He La细胞表达后产物的相对分子质量大小均符合预期。EGFP蛋白C端插入信号肽能引导下游融合的GRP75全长蛋白、结构域片段、突变体蛋白表达定位于He La细胞线粒体中,而缺失信号肽的对应重组蛋白则主要分布于胞质和局部核周。结论构建了一系列GRP75重组真核表达质粒,EGFP融合信号肽能引导重组蛋白在线粒体中表达定位。

摘要：生物化学与分子生物学是揭示生命现象本质的重要学科,也是医药院校各专业学生的必修课程,因其内容微观、抽象,所涉及的基础知识庞杂,该课程的教学也存在较多困难。为了提升本科教育质量,从2016年开始,甘肃医学院生物化学与分子生物学教研室重组教学内容、设计核心病例问题,通过应用多媒体技术资源整合小组讨论的方法挖掘课程内在联系,在五年制临床医学专业教学中尝试问导式四步教学方法。教学实践证明,问导式四步教学方法有助于提高学生的学习兴趣和创新能力,学生课程成绩良好,对该教学方法也有较高的评价。

摘要：基本局部比对搜索工具(basic local alignment search tool,BLAST)是核酸或蛋白质序列相似性分析最常用的工具之一。因为程序涉及参数较多,一些学生和研究者有时不根据实际情况也不阅读说明书就直接选择默认参数,可能会得出错误结论。BLAST可以进行核酸、蛋白质序列及其相互间的比对,一些低年级学生会有困惑,不知如何进行程序的选择等问题。鉴于这些情况,笔者尝试用2020年初网络的热议话题"新冠病毒极有可能源于实验室"作为引子吸引学生注意力,通过复现并从理论上初步分析其错误,以及产生错误的原因来达到让本科生快速熟悉BLAST的使用及易错点,达到BLAST理论教学的目的。在实验课中,虚构恐龙基因,即一个小组在基因中插入"密码",由另一小组解开"密码",通过小组间利用BLAST工具进行加密与解密的趣味活动,从而加深对程序正确选择的理解,同时巩固了理论教学内容。此教学设计利用当下新冠病毒起源的热点话题不仅提高了学生的学习兴趣,同时也帮助他们利用该工具解决实际问题,培养了学生利用专业知识进行言论分辨的能力。希望此文能对BLAST工具的正确使用和新医科背景下生物医学教学有所启发和帮助。

摘要：为寻找脑内新基因 ,以正常成人全脑cDNA为模板 ,采用锚定PCR方法进行扩增 ,将经琼脂糖DNA电泳鉴定获得的一约 12 0 0bp大小的特异性条带回收 ,并克隆入Teasy载体 .用 310GeneticAnalyzer进行自动测序 .所得序列进行生物信息学分析 :BLAST相似性分析结果证明所得序列为新序列 ,读框分析表明 ,该序列中存在一完整编码区 ,编码含 35 7个氨基酸的蛋白质 .ProDom软件分析发现其含有酰基携带蛋白 (ACP)样结构域 .随后 ,经 3′RACE法克隆到该基因的全长cDNA ,其全长为 2 0 2 4bp ,染色体定位在 14q11 2 ,含有 16个外显子 ,15个内含子 ,该基因已登录到GenBank .经设计编码区引物 ,从Teasy载体扩增出编码区后再克隆入pGEX 4T1表达载体 ,经异丙基硫代 D 乳糖苷 (IPTG)化学诱导表达 .其编码区克隆入 pGEX 4T1表达载体后 ,转入JM10 9宿主菌 ,经IPTG诱导已得到表达 .点杂交及RNA印迹表明 ,该基因在正常成人脑内广泛高表达 .

摘要：在艺术创作领域,以《黄河大合唱》为"原型"的艺术改编不断出现。艺术家们通过对《黄河大合唱》的汲取、改编,创作出一系列优秀的艺术作品。从《黄河大合唱》到《黄河》钢琴协奏曲,再到各种类舞蹈作品的创编,主要经历了大合唱、器乐和舞蹈三种艺术样式。这些转化不仅涉及到有关音乐与舞蹈的艺术创编的问题,也涉及到有关艺术经典的改编问题,具有重要的学术研究价值。本文通过对"黄河"的改编史的简要梳理,对当代舞蹈创作的一个重要现象进行了归纳与总结,又从美学的角度探讨了"黄河"系列艺术创编对于艺术创作所具有的普遍性意义和启示价值。

摘要：目的:探讨RNA干扰酪蛋白激酶2(CK2α)基因表达后对HCT116细胞生长的抑制作用并阐明其作用机制。方法:针对CK2α的mRNA序列设计CK2α-siRNA序列,将体外培养的HCT116细胞分为正常对照组(未转染)、阴性对照组(转染siRNA)和CK2α-siRNA组(转染CK2α-siRNA),应用Lipofectamine 2000进行转染,利用Western blotting法检测CK2α、cyclin H、P53和P21蛋白表达水平;应用MTT法检测各组HCT116细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞周期时相的分布。结果:与阴性对照组比较,CK2α-siRNA组CK2α和细胞周期蛋白cyclin H的表达水平明显降低(P0.05),P21蛋白表达水平则明显升高(P<0.01);MTT检测,与阴性对照组比较,转染48和72h,CK2α-siRNA组细胞存活率明显降低(P<0.01);流式细胞术分析,与阴性对照组比较,CK2α-siRNA组S期细胞所占比例逐渐减少(P<0.01),G1期细胞则明显增加(P<0.01),细胞滞留在G1期。结论:RNA干扰CK2α表达能够抑制HCT116细胞增殖,发生G1期阻滞;其机制可能与RNA干扰CK2α表达后cyclin H表达下调及P53活性恢复有关。

摘要：发育生物学是生命科学领域的前沿学科之一,代表着生命医学最有潜质的研究方向。发育生物学作为生物技术、生物科学、生物制药等专业的必修课程,其课程德育效果对生命医学领域人才培养尤为重要。为贯彻执行党中央加强高校思政教育的号召,需要在发育生物学课程教学中融入思政元素,将发育生物学课程建设成为知识传授、能力提升与价值引领的重要载体。文章探讨了在发育生物学中思政元素的融入方法和课程思政建设,力求促进发育生物学课程思政的发展。