摘要：根据临床重症监护的实际要求,设计了一种具有监测功能的小儿口腔分泌物一体式吸引检测系统。该系统具备可调间歇性吸引功能,其间歇停止和吸引时间长短、间歇比例均可根据患儿重症监护个体化要求进行调节。采用的安抚奶嘴式吸引头可尽可能减少设备对小儿口腔黏膜机械性损伤。同时,该系统对收集的口腔分泌物可以进行实时生化指标检测并进行监测,用于判断误吸及对微循环功能障碍进行定量评估。

摘要：目的 精子筛选是IVF的一项关键步骤.目前临床上使用上游法来挑选有活力的精子进行后续操作.然而,除了活力以外,其他参数如顶体反应能力、化学趋向性、温度趋向性等也是精子健康的重要指标.为了同时筛选精子的活力和化学趋向反应,我们设计并制作了一款微器件,使用直管道连接双分叉管道来模拟女性生殖道.方法 我们对直管道的长度和宽度进行优化来筛选活力精子.我们有选择性地将卵丘细胞种植在双分叉管道的其中一侧来形成化学梯度.我们用游向不同分叉管道的精子数量比例来表征精子的化学趋向性.结果 长7 mm、宽1 mm的管道可将精子活力从（58.5±3.8）%提高到（82.6±2.9）%.我们的试验证实约有10%的精子具有化学趋向能力,这一比例和以往的研究相一致.结论 我们第一次在微装置上同时实现了精子活力和化学趋向性的评估,具有良好活力和化学趋向能力的精子可以被富集出来以改善后续IVF的结果.

摘要：乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)在肝细胞内复制过程中,病毒反转录酶(P蛋白)与前基因组RNA(Pregenomic RNA,pgRNA)上的RNA包装信号ε形成P-ε复合物,启动反转录合成和核衣壳装配。封闭P-ε相互作用是一种极具吸引力的抗HBV策略。已知P-ε形成RNP复合物正常发挥活性时,需要热休克蛋白(Heat-shock proteins,Hsps)参与。本研究探索Hsps抑制剂KNK437对HBV复制及转录的影响。主要运用了三种工作模型:HepG2.2.15细胞系、瞬时转染1.05×HBV(pCH9-3091)质粒的Huh7细胞系和瞬时转染1.3×HBV(pGEM-1.3×HBV)质粒的Huh7细胞系。采用CCK-8方法检测KNK437的细胞毒性,ELISA测定细胞培养液上清中HBsAg和HBeAg的分泌水平;q-PCR和qRT-PCR分别检测细胞内HBV核衣壳中DNA和细胞内HBV RNA水平;Western blotting检测细胞内衣壳亚单位(core)表达水平;qRT-PCR检测细胞内Hsps本身的转录水平。结果表明:20μM KNK437对细胞没有毒性,且在该浓度下KNK437除HepG2.2.15模型外,均下调HBV HBsAg和HBeAg的胞外分泌,抑制细胞内HBV核衣壳中DNA合成,降低细胞内HBV RNA转录水平,最低可使DNA水平降至1.5%左右,RNA水平降至30%左右,从而表明KNK437抑制HBV复制和转录。在HepG2.2.15中的Western blotting显示,KNK437明显减少细胞内衣壳亚单位(core)表达水平。KNK437也抑制Hsp70,Hsp90b,Hsp40等三种热休克蛋白RNA的转录,从而验证了它的确是一种泛Hsps抑制剂。本研究结果显示KNK437具有潜在抗HBV应用前景。

摘要：目的:应用正交模拟法分析护骨胶囊(HG)各药味对该复方药效的贡献值,并对该方不同组合的复方进行药效模拟。方法:采用正交模拟法,将HG 10个药味按照设计的正交表分为13个组(第13组为阴性对照组),通过血清药理学实验得出相应含药血清,采用CCK-8法检测各组血清对成骨细胞(Ob)增殖的影响。DAS3.0软件处理数据,分析各药味的药效贡献值并对复方药效进行模拟。结果:以Ob增殖为指标,经正交模拟法分析,确定HG各药味在复方中的药效贡献值顺序为:淫羊藿>骨碎补>巴戟天>山药>龟甲>当归>熟地黄>续断>杜仲>制首乌;以Ob增殖为指标,对复方药效进行模拟研究,结果显示27个模拟组方预测药效值明显优于阴性对照组,而且原方最好,4个模拟组方接近于原方。结论:正交模拟法分析HG,确定了HG各药味在复方中的药效贡献值,并发现多个组方的模拟药效与原方接近。

摘要：组织工程化血管的出现为治疗血管缺损提供了新的希望。本文综合国内外最新文献,就组织工程化血管的种子细胞来源、细胞外基质生物材料的选择以及用于培养工程化血管的生物发生器的设计等方面进行了综述。同时,讨论了不同培养条件对组织工程化血管发育和功能的影响,并提出了组织工程化血管的功能评价方法。最后,指出了目前尚需解决的问题和对未来研究的展望。

摘要：个体内临床试验(within person trial)是一种高效的随机对照试验研究设计,广泛应用于口腔医学、皮肤病学和眼科学领域。然而,由于存在一系列特有方法学难点,个体内临床试验的设计、实施与报告往往需要研究人员具备更多方法学知识、进行更全面的考量。为规范和提高这类临床试验的报告质量,BMJ近期发表了临床试验报告统一标准:个体内临床试验扩展声明(CONSORT for Within Person Trials)。本文旨在对CONSORT for WPT进行解读,以促进其在国内研究人员中的理解与应用。

摘要：目的以成骨细胞增殖和分化为指标,通过正交模拟法与非线性混合效应模型(NONMEM)(DAS3.0软件)分析护骨胶囊(HG)各味药对药效的协同和拮抗作用,并对该方不同组合的复方进行药效模拟。方法将HG 10个组分按照设计的正交表分为13个组,血清药理学实验获取13个组的含药血清,CCK-8法及AKP法检测各组血清对成骨细胞(Ob)增殖和分化的影响。DAS3.0软件处理数据,分析各味药对药效的协同和拮抗作用,并对复方药效进行模拟。结果 (1)以Ob分化为指标,淫羊藿、山药、巴戟天、熟地黄、杜仲对成骨细胞分化有促进作用,骨碎补、制首乌无作用,龟甲、当归、续断对Ob分化有抑制作用;以Ob增殖为指标,淫羊藿、骨碎补、巴戟天、山药、龟甲、当归、熟地黄、续断对Ob增殖有促进作用,杜仲及制首乌对ob增殖无作用。(2)以两种指标进行观察,DAS3.0软件处理不同组合的复方进行药效模拟发现,分化药效预测最大值为0.2263,且共有6个组分化药效预测值大于0.2,原方排第二;增殖药效预测值最大为1.1620,为原方,另外还有4个组增殖药效大于1.0;此外,将两个结果综合发现,有三个模拟组方同时满足分化大于0.2和增殖大于1.0。结论利用Ob增殖和分化为指标,结合定量药理学方法综合分析HG,可提供丰富的组方信息,为HG的研究和开发提供了理论基础。

摘要：目的探讨CircCpsf6在N2a细胞中对细胞活力的影响,同时对CircCpsf6结合蛋白进行功能富集分析,预测CircCpsf6影响细胞活力的分子机制。方法在N2a细胞中转染CircCpsf6的siRNA或过表达质粒,对CircCpsf6进行敲减或过表达,用CCK-8法检测细胞活力。在CircCpsf6的接口处设计特异性探针,进行下拉实验,即CircCpsf6的反义纯化实验。经过磁珠吸附,蛋白的洗脱、纯化,蛋白的质谱检测,得到CircCpsf6可能结合的蛋白。利用在线网站STRING对这些蛋白之间可能存在的相互作用进行预测,同时利用在线网站DAVID进行蛋白功能富集分析。结果在N2a细胞中,CircCpsf6能够被有效的敲减或过表达(P<0.01),敲减CircCpsf6后,细胞活力上升(P<0.01);过表达CircCpsf6后,细胞活力下降(P<0.05)。经过CircCpsf6的反义纯化实验,发现CircCpsf6可能与385个蛋白结合。GO分析和KEGG富集分析提示CircCpsf6可能通过结合蛋白影响细胞的增殖或者凋亡,从而影响细胞活力。结论CircCpsf6能够抑制N2a细胞的细胞活力。CircCpsf6可能通过结合G6pdx、Pcx、Csl影响细胞增殖,通过结合2210010C04Rik、Try10、Gm2663影响细胞凋亡。

摘要：目的原核表达人CC趋化因子配体17(CC chemokine ligand 17,CCL17)重组蛋白,纯化并分析其趋化活性。方法根据GenBank中登录的人CCL17基因序列(NM002987.2)设计特异性引物,扩增人静脉全血CCL17基因,将其PCR产物与pCold-TFM载体连接构建重组表达质粒pCold-TFM-CCL17,转化至*** BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达;表达产物经镍亲和层析,酶切移除融合蛋白的6×His-TF标签后,进行离子交换亲和层析纯化;凝胶过滤层析分析其聚合特性,分光光度法分析蛋白浓度,应用表达CCL17受体的Hut78细胞进行趋化试验。结果经双酶切及测序鉴定证明,重组表达质粒pCold-TFM-CCL17构建正确;融合蛋白以可溶性形式表达;纯化的人CCL17重组蛋白相对分子质量约为11000,纯度达95%以上,其蛋白峰呈均匀、对称的单个色谱峰,色谱峰面积占总曲线面积95%以上,蛋白表达量≥6 mg/L,其可趋化Hut78细胞发生迁移。结论成功表达了可溶性、高纯度、高产量、具备一定趋化活性的人CCL17重组蛋白,为其工业化生产及科研应用提供了参考。

摘要：目的建立一种基于颜色判定的快速、灵敏、简便的检测生殖支原体(MG)感染的环介导等温扩增(LAMP)方法。方法使用PrimerExplorer V5软件依据gap基因保守区域设计4条特异性MG等温扩增引物,通过优化体系dNTPs、MgSO4浓度,建立一种基于羟基萘酚蓝(HNB)作为结果判读指示剂的MG等温扩增方法,进行灵敏度、特异性检测并与普通PCR比较;对30份性病门诊病例标本进行LAMP、RT-PCR和普通PCR检测,并进行比较分析。结果建立的LAMP方法对8种常见支原体以及8种泌尿生殖道常见病原菌扩增均为阴性,特异性度为100%。对于MG ATCC 33530标准菌株核酸的检测限约为10~2copies,与MG普通PCR一致,比MGRT-PCR检测限(10 copies)低一个数量级。30份临床标本使用LAMP、普通PCR和RT-PCR方法的MG阳性检出率分别为16.7%,16.7%和20.0%。结论建立的MG LAMP检测方法灵敏、特异且操作简便,可在基层推广应用。