摘要：细胞因子诱导杀伤细胞(Cytokine-induced killer cells,CIK cells)是一类广泛应用的肿瘤过继免疫疗法的效应细胞,其体外扩增过程中常需要使用无血清培养基。今以胰岛素、亚麻酸、胆固醇和乙醇胺4种可替代血清促进细胞扩增的组份为研究对象,采用中心组合设计和响应面分析相结合的方法,考察上述组分的浓度以及相互作用对单个核细胞扩增的影响,得到了可支持单个核细胞扩增的最优浓度,分别为10、5.66、19.86和1.22 mg?L?1。将上述4种组分以优化的浓度添加到DMEM/F12和IMDM以1:1体积比混合而成的基础培养基中,制成无血清培养基Optimizer。以含10%FBS的RPMI 1640为对照,采用半量稀释法培养脐血单个核细胞,以培养14天的总细胞扩增倍数、细胞组成、CD3+CD56+细胞扩增倍数以及对K562细胞的杀伤活性为指标,评价了制成的无血清培养基Optimizer支持CIK细胞扩增的效果。结果显示,采用所制备的无血清培养基Optimizer,总细胞扩增倍数为56.54±18.87,明显高于SFM1的5.14±1.03(p0.05)接近;CD3+细胞为97.98%±1.41%,与含10%FBS的RPM I1640的94.34%±1.29%相当(p>0.05);尽管CD3+CD56+细胞比例18.17%±7.38%低于含10%FBS的RPMI 1640中的数值25.49%±3.35%(p0.05);当效靶分别为9:1时分别采用两种培养基扩增的细胞对K562细胞的杀伤活性均能达到50%以上。该研究结果为用于CIK细胞体外扩增的无血清培养基的开发提供了依据。

摘要：采用流加培养方式，实现了杂交瘤细胞在营养物富裕、葡萄糖限制和谷氨酰胺限制3种条件下的拟稳态培养。代谢动力学分析表明：葡萄糖限制时，葡萄糖比消耗速率（qGluc）降低到1.1×10^-9mmol/（cell·d），相比营养物富裕时降低了40％以上；乳酸生成量降到最低。谷氨酰胺限制时，谷氨酰胺的最小比消耗速率（qGln）约为0.28×10^-9mmol/（cell·d），相比营养物富裕时降低了56％以上；氨的比生成速率降低到0.23×10^-9mmol/（cell·d），营养物富裕时为0.93×10^-9mmol/（cell·d）；丙氨酸的生成降到最低。3种拟稳态下单抗的比生成速率都在29×10^-9～37×10^-9mg/（cell·d）。本文的流加培养设计方法为快速认识细胞的代谢规律，设计相应的培养基和调控策略，实现细胞高密度和产物高浓度的培养过程提供了指导。

摘要：软骨组织工程生物支架材料的内部结构(如孔结构)对于细胞行为有着重要影响。3D打印技术可以实现对支架结构的精确控制。聚己内酯(poly(ε-caprolactone),PCL)是广泛应用的组织工程支架材料,具有良好的生物相容性,支持多种细胞的黏附、增殖和基质分泌。3D打印制备的PCL多孔支架包含相邻三部分,每部分由六层纤维堆积,相邻两层的纤维夹角分别为30、45和60°,而同层中纤维间距为分别为450、400和300μm;力学性能测试梯度支架的杨氏模量在47 MPa左右,与天然软骨组织20 MPa相匹配;微断层扫描和扫描电镜观察支架表面和内部形貌的结构特征,Image J软件对支架特征参数进行量化分析。支架表面和内部形貌规整,呈现孔结构梯度分布,具有良好的孔连通性和57%左右的孔隙率,孔径梯度大小为342~747μm。经细胞接种培养后,应用扫描电镜、CCK8检测和死活染色方法分析支架材料对细胞生长及活性的影响。梯度支架能够很好地支持细胞生长和活性。研究通过对支架材料的设计和制备为软骨组织工程研究奠定了基础。

摘要：悬浮细胞的生长对剪切力较敏感,在搅拌式生物反应器中采用球体搅拌可减少流体剪切力对细胞扩增的影响。为此,研究采用两步法制备海藻酸钠/壳聚糖双组分磁性搅拌珠并将其运用于磁力搅拌瓶,用于NK-92细胞的动态培养。结果显示,当海藻酸钠质量浓度达到25 mg×mL^(-1)时,磁性搅拌珠的力学性能最佳;用于NK-92细胞扩增时,在保证细胞活性的同时,总细胞扩增倍数以及扩增后的细胞杀伤活性分别可达到(72.63±7.80)倍和(85.57±3.69)%,显著高于T 25培养瓶静态培养时的(22.41±1.46)倍(p<0.05)和(70.53±1.72)%(p<0.05)。研究结果为悬浮细胞动态培养设备的设计提供了新的思路,为免疫细胞的体外扩增提供了技术支持。

摘要：为了优化免疫细胞体外培养体系实现其高效扩增,以自然杀伤细胞系(natural killer-92 cells,NK-92)为对象,通过氨基酸代谢分析及正交实验设计优化了关键代谢物浓度,并在有/无血清培养基中进行了验证。结果表明,谷氨酰胺丙酮酸钠浓度对NK-92细胞的体外扩增有显著影响,其最适浓度为13.0和2.5 mmol·L^-1。在此浓度下,有血清培养体系中NK-92细胞扩增15 d后,其扩增倍数可达到(3712.85±225.74)倍,显著高于优化前对照组的(2255.93±243.00)倍(p<0.05);其杀伤活性均值由57.23%提高到63.53%;无血清体系中NK-92细胞扩增15 d后,其扩增倍数可达到(3193.59±199.99)倍,明显高于对照组的(1917.16±242.87)倍(p<0.05),且显著提高了扩增后NK-92细胞中CD3-CD56+细胞比例和杀伤活性(p<0.05)。该结果可为免疫效应细胞无血清培养基的开发提供技术支持。

摘要：设计了一种结构新型的多孔陶瓷固定床生物反应器 ,与传统的固定床相比 ,该反应器具有氧传递性能好 ,能够均匀接种等优点。通过模拟 ,考察了反应器内的流体流动和气液传递性质 。

摘要：利用响应面方法对枯草芽孢杆菌生产腺苷的培养基进行了优化。首先用两水平因子实验对培养基组分酵母粉、玉米浆、KH2PO4、MgSO4、(NH4)2SO4对产苷的影响进行评价,结果表明:主要影响因子为酵母粉、KH2PO4和(NH4)2SO4。根据实验结果对主要影响因子的大致范围进行估计,选定合适的浓度作进一步试验,然后用中心组合设计及响应面分析确定主要影响因子的最佳浓度。通过实验发现当酵母粉15g/L,KH2PO46g/L,(NH4)2SO410g/L时,腺苷产量达到7.42g/L,比优化前的5.77g/L提高了28.6%。

摘要：初步摸索大肠杆菌DH 5α生产核酸疫苗的发酵条件。通过均匀试验设计确定,当胰蛋白胨与酵母粉的质量比为1∶1.2,并且磷酸盐的加量较大时菌体的质粒产量较高。在菌体生长刚进入对数生长期时采用指数式流加葡萄糖与采用恒速流加葡萄糖,菌体得率相同,而产物收率前者高于后者。在菌体生长进入平稳期时将温度由37°C升高到42°C,在菌体密度没有改变的情况下,质粒产量得到提高,达到75 m g/L。

摘要：该文在已有的乳酸发酵全合成培养基基础上,研究了氨基酸和维生素类组分对菌体生长和乳酸生成的影响。通过单组分浓度梯度实验确定了对菌体生长和乳酸合成有明显影响的6种氨基酸和3种维生素;以此作为Plackett-Burman实验设计的因素,筛选出了生物素、天冬氨酸、谷氨酸3种对于乳酸生物合成有极显著影响的因素;通过最陡爬坡实验确定3种因素具有最大响应值的浓度范围;并最终通过Box-Behnken实验得出3种因素的最佳添加浓度。在250 mL摇瓶和2.5 L发酵罐中对优化后的培养基进行验证实验,发现优化后合成培养基的乳酸产量、产率和糖酸转化率都较优化前有了显著提高。该实验研究结果为该菌株今后的代谢调控研究奠定了基础。

摘要：以毕赤酵母为异源表达宿主合成人胰岛素前体,在实验室研究和工业生产中已有广泛应用。目前研究主要使用天然甲醇诱导型AOX1启动子,以甲醇为单一基础碳源进行胰岛素前体的诱导发酵生产。但在毕赤酵母高密度发酵生产过程中,甲醇代谢过程耗氧大、产热高,补料控制工艺复杂,限制了发酵生产的放大。基于前期对启动子AOX1的转录调控设计研究,提出以人工设计的高效组成型转录调控器件CSAD5驱动胰岛素前体基因表达,开发了以葡萄糖为碳源的发酵生产工艺,以解决甲醇体系中的产热、耗氧及工艺控制问题。在此基础上,通过增强筛选压力提高异源基因拷贝,获得了一株胰岛素前体高表达重组毕赤酵母,利用优化的培养工艺在5L反应器水平发酵生产,胰岛素前体产量在108h达到1. 85g/L,为目前报道以葡萄糖为碳源,生产人胰岛素前体的最高水平,为胰岛素前体的工业生产及毕赤酵母的应用提供了新的思路和方法。