摘要：利用非修饰寡核苷酸基因芯片技术,根据HLAⅡ类抗原DQA位点不同基因亚型的特异性序列设计探针,制成分型芯片;待测样本经PCR反应标记上荧光之后,与探针在芯片上进行杂交,根据杂交产生的荧光信号值,确定样品DQA位点基因亚型。将这一方法应用于125例临床样本和10例标准品的HLA-DQA分型,该方法分型的结果与准确结果相比,准确率达到93.3%。实验结果表明:非修饰性寡核苷酸芯片用于HLA-DQA分型技术可行。

摘要：利用碳限制恒化实验研究了黑曲霉生长和糖化酶生产之间的相关性,结果表明当比生长速率低于0.068 h–1时,菌体生长与产酶是相关的,当比生长速率大于0.068 h–1时,菌体生长与产酶不相关。根据恒化实验结果获得黑曲霉葡萄糖底物消耗的Monod动力学模型,并结合葡萄糖和氧消耗的Herbert-Pirt方程和产物形成的Luedeking-Piret方程构建黑曲霉产糖化酶的黑箱模型。应用该模型设计指数补料分批发酵实验控制菌体比生长速率在0.05 h–1,使糖化酶的得率最高达到0.127 g糖化酶/g葡萄糖,并成功地使用模型描述了黑曲霉产糖化酶的发酵过程。实验值和模拟值进行比较表现出很好的适用性,表明黑箱模型可以用于指导黑曲霉产糖化酶发酵过程的设计和优化。

摘要：人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc融合蛋白在治疗风湿性、类风湿性关节炎方面拥有广阔的市场前景和巨大的经济价值。本实验以表达TNFR-Fc融合蛋白的GS-CHO细胞为研究对象,结合细胞生长代谢特性和动力学参数分析,以葡萄糖为关键控制参数,通过测定培养上清的葡萄糖浓度对培养过程中的葡萄糖消耗进行及时的预测,调整流加速率,形成了以满足细胞生长代谢需要为基本原则的动态流加培养过程设计模型。在此控制模型指导下,建立了高效的流加培养过程。使最大活细胞密度和最大融合蛋白浓度分别达9.4×106cells/mL和207mg/L,较批次培养分别提高了3.4倍和3倍。本研究所采用的研究方法和控制策略为优化GS-CHO细胞培养过程和TNFR-Fc融合蛋白成功迈向产业化奠定了基础。

摘要：针对产业化规模的木质纤维素生物炼制工艺,在Aspen plus流程模拟平台上建立了全过程流程模拟模型。构建了木质纤维素生物炼制中涉及物质的全组分物性数据库,建立了Aspen plus平台上的严格热力学流程模拟模型;对年加工300 000t玉米秸秆原料生产纤维素乙醇的产业化装置进行了严格流程模拟计算,从节能减排角度对纤维素乙醇生产过程中的新鲜水用量、废水减排和蒸汽能耗等工程问题进行了分析,并给出了积极的节能减排解决方案。该模型可以为产业化纤维素乙醇生产技术的过程设计、操作优化以及技术经济评价提供设计和优化工具。

摘要：【目的】为了研究龟裂链霉菌Streptomyces rimosus M4018中的rex基因对自身rex operator(ROP)的调控机制。【方法】根据天蓝色链霉菌Streptomyces coelicolor A3(2)中rex基因的同源序列设计引物进行PCR,从*** M4018中获得其rex基因(Sr-rex)。同时,通过染色体步移的方法,获得其上游的ROP序列。采用体外凝胶迁移的方法,分析了Sr-Rex对ROP的调控作用。【结果】获取的Sr-rex基因核苷酸序列长度为846 bp,预测的编码氨基酸序列与*** A3(2)中Rex的同源性为84%,获得GenBank登录号:GQ849479。圆二色光谱显示Sr-Rex的结构以α螺旋和β折叠为主,与软件预测相符。凝胶迁移实验表明,Sr-Rex能与*** M4108中扩增到的ROP片段特异性结合。同时,以Rex:ROP的最小结合序列为基础,设计了一条22 bp的单链DNA片段,和Sr-Rex的最大结合摩尔浓度比约为5:1。高浓度的NADH抑制两者的结合活性,而NAD+对结合没有影响。【结论】在*** M4108中,Rex是通过响应胞内NAD(H)水平的方式来调控ROP的表达的。

摘要：利用响应面方法对土曲霉生产洛伐他汀的培养基进行了优化,使用两水平因子实验对培养基中的碳、氮源组分:葡萄糖、豆粕、蛋白胨、麦精和硝酸钠对洛伐他汀效价的影响进行分析,发现主要的影响因素为葡萄糖和豆粕。通过进一步中心组合实验,考察葡萄糖和豆粕浓度对菌浓、效价、残糖浓度、单位菌体产量(YP/X)和得率(YP/S)的作用。并通过引进残糖浓度为参考,得到最优的葡萄糖和豆粕配比分别为22%和5%,结果比对照提高了17%。同时在15L发酵罐上放大,确定最适初始葡萄糖浓度为21%,效价为7.34g/L。

摘要：目的探讨通过细胞因子及其组合体外诱导脐血CD34+细胞转分化成肝样细胞的效果。方法采用密度梯度离心法分离脐血单个核细胞(mononuclear cell,MNC),从MNC中获得富集CD34+细胞。选用人白血病抑制因子、制瘤素M、bFGF、aFGF、肝细胞生长因子、EGF及干细胞生长因子7种细胞因子,浓度分别为10、10、10、10、20、20和50 ng/mL,设计了49种细胞因子组合,分别采用这些细胞因子组合体外培养脐血CD34+细胞,培养周期为28 d。以新鲜脐血CD34+细胞作为对照。每7天检测诱导后细胞中细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK-19)、CK-18、谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)、人血清白蛋白(albumin,ALB)以及甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)的mRNA转录情况,并应用免疫荧光法、过碘酸-雪夫(periodic acid-schiff,PAS)染色与吲哚菁绿(indocyanine green,ICG)染色法检测细胞分泌ALB、合成糖原以及解毒能力,以此判断是否存在脐血CD34+细胞体外向肝样细胞的转分化。结果在经细胞因子诱导后的CD34+细胞中均可检测到人肝细胞所能表达的CK-19、CK-18和GS的mRNA条带,未能检测出肝细胞特征性的ALB与AFP的mRNA条带;而新鲜脐血CD34+细胞中以上5种蛋白的mRNA均未能检出。免疫荧光染色观察示诱导前后的细胞中均未能检测到ALB的表达,且均不能有效吞噬ICG染料。PAS反应检测结果显示,经细胞因子诱导后的细胞紫红色糖原沉积区域较新鲜脐血CD34+细胞增大,出现紫红色区域的细胞增多。结论脐血CD34+细胞体外经细胞因子组合诱导后,虽有肝细胞相关蛋白mRNA表达,但未能转分化为肝样细胞。

摘要：为解决生物发酵过程放大问题,文中提出了一种基于时间常数分析与计算流体力学(CFD)相结合的生物反应器放大方法。首先根据大肠杆菌发酵过程生理代谢数据,对诱导前后两阶段氧消耗和底物消耗时间常数进行了计算。通过菌体"消耗型"时间常数与设备的"供给型"时间常数的对比分析发现,诱导前为供氧条件限制,而诱导后为混合条件限制。在菌体生长期需保证氧传递时间常数tmt0.236 s^-1;而在诱导期需保证混合时间tm<36 s。据此,对工业规模20 t生物反应器进行了理性设计,并通过CFD方法对设计方案进行验证。结果表明:设计的反应器kLa大于0.236 s^-1,且混合时间小于36 s,氧传递和混合性能均达到设计要求,能满足诱导型大肠杆菌高密度发酵过程的需求。

摘要：采用优化设计方法研究金属离子在林可链霉菌(Streptomyces lincolnensis)林可霉素生物合成中的交互作用,并应用均匀设计法,以最终发酵液的生物效价为目标函数建立模型,通过软件Uniform Design Version 3.00分析得出优化配比:FeSO4.7H2O 0.45g/L,CuSO4.5H2O 1g/L,MnCl21g/L;按优化方案添加金属离子,使发酵液的最终生物效价较原配方提高20%,明显提高了林可霉素的发酵水平。

摘要：组织工程是临床上用于修复以及重建受损软骨的一项有广泛应用前景的方法。但是在支架材料内部物质传递仅仅依赖于扩散,这是支架材料中细胞生长的主要限制因素。利用氧扩散-反应基本原理建立了软骨细胞生长过程的数学模型,同时考虑了由于细胞生长引起的扩散系数下降以及空间抑制因素对细胞生长的影响。模拟结果与实验数据吻合良好,表明该模型对材料内部的细胞生长的分析具有较高的可靠性,可用于组织工程生物反应器以及三维多孔支架材料的优化设计。