摘要：利用已筛选出的菌株Pseudomonas putida ECUST5-2降解咖啡因,并对其培养基组分进行优化。首先采用单因子试验从多个因素中寻找出可参考的因素。在此基础之上,利用Plackett-Burman试验筛选出显著影响咖啡因降解率的主要因素为:咖啡因、Na2HPO4、MgSO4和酵母粉。随后用最陡爬坡试验逼近降解菌最大降解率区域。然后利用中心组合设计试验对相关显著因素进行优化,得到咖啡因、Na2HPO4、MgSO4和酵母粉的最佳浓度分别为:3.409 1 g·L-1,0.056 4 g·L-1,0.1611g·L-1和3.570 7 g·L-1。在优化后培养基条件下,咖啡因的降解率(0.105 g·h-1)比其初始咖啡因降解率提高了3.28倍。

摘要：目的:构建以HBc为载体的甲型流感病毒HA和M2e流感通用疫苗(Flu@u V),利用大肠杆菌BL21(DE3)表达系统,进行初步的蛋白表达及纯化。在此基础上,构建DNA流感通用疫苗。方法:利用全基因合成的序列为模板,成功构建HA-M2e-HBc、M2e-HBc、HBc、3M2e-HBc和3HA-3M2e-HBc基因的重组质粒,并在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE、Western blot和电镜检测其表达。将纯化的蛋白与弗氏佐剂共同免疫小鼠,取小鼠外周血进行流式细胞分析。通过荧光分析和Western blot初步验证DNA流感通用疫苗在人源胚胎肾细胞(HEK293T)中的表达情况。结果:成功表达纯化了HA-M2e-HBc、M2e-HBc、HBc和3M2e-HBc四种蛋白,经电镜观察到30nm左右的蛋白纳米颗粒样结构。小鼠外周血流式细胞分析显示HBc和3M2e-HBc可以增加小鼠的免疫力,而HA-M2e-HBc和M2e-HBc对小鼠免疫力的提高没有影响。通过荧光检测和Western blot检测说明DNA流感通用疫苗在真核细胞中成功表达。结论:成功构建HBc与甲型流感病毒HA和M2e的病毒样颗粒,为流感通用疫苗的研制奠定了重要基础。

摘要：为了探索具有新型骨架的抗癌剂,设计了一系列的以环丙烷限制构象的双酰胺类化合物.大多数含有顺式环丙烷中心的外消旋体对四种肿瘤细胞系(MCF-7、BGC-823、HepG2和NCI-H460)具有良好的抑制活性.其中,消旋体顺式-N^(1)-(2-甲基-4-(全氟丙-2-基)苯基)-N^(2)-(4-苯氧基苄基)环丙烷-1,2-二羧酰胺(1-19)对MCF-7的IC_(50)值为(8.38±0.67)mg·L^(-1),显示出可进一步优化为抗癌先导物的潜力.此外,甾醇硫酸酯酶(steryl-sulfatase,STS)被PharmMapper预测为可能的靶标蛋白,并由分子对接实验进行了验证.

摘要：通过MIG基因的同源性设计简并引物,采用PCR方法从毕赤酵母(Pichia pastoris)中成功克隆了两个MIG同源基因的核心片段,同时利用Genome Walking的方法获得了基因的全长及其侧翼序列,并分别命名为PpMIG1和PpMIG2。序列分析显示,PpMIG1基因全长1335bp,编码444个氨基酸;PpMIG2基因全长1365bp,编码454个氨基酸。这个两个基因所编码的蛋白质均与酿酒酵母碳源阻遏因子ScMig1同源,在氨基末端具有两个典型的C2H2锌指结构域,该结构域能够与受葡萄糖阻遏的许多基因的启动子相结合。PpMig阻遏因子的获得为毕赤酵母碳源阻遏机制的研究奠定了基础。

摘要：应用均匀设计的方法对利福霉素SV发酵培养基中的氮源配比进行优化。研究了氮源中各成分对发酵效价的影响,确定各成分的最佳配比并用实验验证,使摇瓶发酵效价提高了10%以上,并对利福霉素SV产生菌在新、老培养基中的代谢特性进行了比较。

摘要：设计了基于碳氮源平衡的底物流加策略,研究其对重组大肠杆菌(Escherichia coli)生长与表达目的蛋白融合型乳酸片球菌素的影响。在菌体生长的不同时期流加不同碳源与氮源的质量比(mC/mN)的营养源,实现碳氮源的实时平衡流加,有效地避免了乙酸的积累,获得了高密度的菌体(最大菌体密度可达57.6 g/L)和高表达的融合蛋白(产率可达46.3 mg/L)与可溶性蛋白(产率可达15.7 mg/L)。

摘要：工业生物技术的进步离不开工业生物过程工程研究的不断深入及发展,我国作为工业发酵大国在工业生物技术由实验室向产业化转化过程中面对诸多挑战,由此而逐渐发展起来的我国工业生物过程工程发展先后经历了多个阶段,伴随着不同阶段的发展,我国的工业生物技术水平得到不断的提升。本文重点回顾了近三、四十年来我国工业生物过程工程发展的历程,包括早期由化工过程研究引入的动力学模型化研究、基于过程控制的优化理论与方法的应用、基于过程在线监测技术发展起来的参数相关性分析方法、过程多尺度理论的建立、基于现代固态发酵的新型固态发酵罐的设计及优化技术发展等。通过对生物过程工程发展历程的回顾对先进工业生物过程发展面临的技术难题及由此引出的未来发展重点方向进行了探讨。

摘要：利用SAS,Minitab和Design-Expert软件,采用Placket-Burman设计和中心组合设计对盐霉素的发酵条件进行优化。并运用响应面方法对盐霉素发酵条件进行进一步的分析,根据建立的多元二次方程确定其最佳水平,得到最佳的培养基:糊精4.5%,玉米浆0.6%,黄豆粉0.3%,氯化钾0.3%,硝酸铵0.3%,磷酸氢二钾0.04%,豆油10%,碳酸钙0.1%。培养条件为:接种量10%,pH7.0,摇床转速为250r/min,培养周期10d。在此最优化条件下得到盐霉素发酵单位比优化前的产量提高了44%。

摘要：中国仓鼠卵巢细胞(CHO)流加培养生产单克隆抗体是目前主流培养方式,其中环境参数(pH和温度)和营养成分均影响细胞生长、碳氮源代谢和外源蛋白表达,是培养过程中关键的控制参数。采用实验设计(design of experiment,DOE)方法研究培养参数(温度、pH)对CHO细胞生长和抗CD20抗体表达的影响,建立营养限制型氨基酸流加策略,实现抗CD20抗体的高表达。结果表明,温度是影响蛋白质表达的显著因素,35℃有助于提高细胞密度和目标抗CD20抗体表达,而pH对抗CD20表达影响不显著,且温度和pH无交互作用,经DOE预测分析最佳培养条件是温度35℃和pH7.0。在该最佳培养条件下,在培养后期酪氨酸和半胱氨酸的浓度都低于0.1mmol/L。在培养的第2天通过补加1.5mmol/L酪氨酸和1mmol/L半胱氨酸避免营养限制,抗CD20抗体表达水平提高了24.1%,且对蛋白糖型无影响。

摘要：针对重组毕赤酵母（Pichia pastoris GS115-phy）表达的基因工程产品的高吨位发酵罐的工业生产，采用称重传感器与计算机组合方式设计并制造了一新型智能称量式补料系统，具有高精度和重复性。智能称量式补料装置与电子秤对比试验误差均在-0．001—0．009kg之间，相对误差小于0．5％。将智能称量式补料装置应用于重组植酸酶发酵，很好地控制了甲醇补料速率，在25m3发酵罐中211h植酸酶表达量达到23，077U／ml的高水平。