摘要：目的 探索核酸适配子特异性结合幽门螺杆菌(***)血型抗原结合黏附素(BabA)对***宿主细胞黏附的阻断作用。方法 培养***菌株并提取基因组,并设计引物PCR扩增BabA基因,扩增获得的BabA基因克隆、构建至原核表达质粒,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化后作为靶标,利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选能够特异性结合BabA的单链脱氧核苷酸(ssDNA)适配子;酶联寡聚核苷酸吸附试验(ELONA)法检测并评估候选适配子的特征;随后在体外细胞水平和小鼠感染模型中,分别采用流式细胞术和菌落计数验证ssDNA适配子阻断***黏附的效果,同时利用ELISA检测小鼠胃黏膜细胞匀浆中白细胞介素6(IL-6)、 IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、 IL-10和IL-4的水平。结果提取*** ATCC 43504基因组并构建了pET32a-BabA质粒,诱导后并纯化重组蛋白相对分子质量(Mr)约为39 000;经肽指纹图谱(PMF)分析其与BabA蛋白一致;以此为靶标运用SELEX筛选获得5个候选适配子,经分析鉴定适配子A10、 A30和A42识别相同位点,A3和A16与上述三个适配子各自识别不同的位点。适配子体外能够显著阻断***的黏附,且动物模型实验证明适配子经灌胃处理后,对胃黏膜的***定植有阻断效果,且能够减轻诱导的炎症反应,适配子治疗组胃黏膜匀浆中IL-4、 IL-6、 IL-8和TNF-ɑ水平低于模型组。结论 适配子特异性结合BabA封闭***与胃黏膜上皮细胞的黏附能够阻断***在胃黏膜的定植。

摘要：实验教学是免疫学课程的重要组成部分,传统免疫学实验课内容虽经典,但很多已落后于飞跃发展的免疫学理论和技术,也与科研和临床应用有脱节;此外,随着网络信息技术的发展,学生能快速便捷的获取知识,传统的教师为主的实验课授课模式已难以调动学生学习的积极性和锻炼其探究创新能力。开展自主设计性实验可以充分发挥学生学习的主观能动性,锻炼其创造性思维和分析、解决问题的能力,提升其科研素质;能有效弥补传统实验课的不足。但开展自主设计性实验对教学科研软硬件平台资源均有一定要求,在地方院校全员开展的可行性较低。作为开展自主设计性实验的第一步,撰写项目书则不依赖于平台资源,并且能对学生自主学习、科研思维、创新能力、团队合作等方面进行综合锻炼,后续择优开展自主设计性实验也是对有限平台资源的合理利用。将自主设计性实验项目书的撰写纳入实验教学是值得开展的免疫学实验课改革的一小步。