摘要：目的　研究二氢叶酸还原酶 (DHFR ,D)与谷氨酰胺合成酶 (GS ,G)单基因和二氢叶酸还原酶与谷氨酰胺合成酶 (DHFR +GS ,DG)双基因筛选扩增系统对外源基因表达的影响。方法　选择N端部分TPO基因 (T1 84)作为靶基因 ,以DHFR和GS基因作为筛选及扩增基因构建重组质粒pDCT1 84与pGCT1 84,将两种质粒分别转染CHOdhfr- 细胞形成单基因筛选扩增系统 ,两种质粒共转染CHOdhfr-细胞形成双基因筛选扩增系统。在双基因筛选扩增系统中设计三种药物加压方式。第一种为DG方式 :先用DHFR系统压力 (MTX)筛选 ,再用GS系统压力 (MSX)筛选 ;第二种为GD方式 :先用GS系统压力筛选 (MSX) ,再用DHFR系统压力筛选 (MTX) ;第三种为共加压方式 :同时利用DHFR与GS系统压力筛选 (MTX +MSX)。通过比较T1 84基因拷贝数及表达水平来研究DHFR和GS双基因筛选扩增系统对外源基因表达的影响。结果　T1 84基因拷贝数及表达水平在DG双基因筛选扩增系统不同药物加压方式中 ,均比DHFR或GS单基因筛选扩增系统高 ,但不同药物选择方式没有明显差异。结论　采用DHFR +GS双基因筛选扩增系统共加压方式是提高CHOdhfr-