摘要：旨在建立能同时检测出猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪丁型冠状病毒(Porcine delta corona virus,PDCOV)的二重RT-PCR检测方法。根据GenBank已收录发表的PEDV和PDCOV基因序列设计2对特异性引物,首先运用RT-PCR反应技术,通过PEDV和PDCOV病毒的目的基因的单项扩增,对反应条件进行优化。然后通过特异性试验、敏感性试验以及临床样品的检测验证确定二重RT-PCR方法的建立。结果显示,目的基因PEDV-M扩增的片段大小是750 bp,PDCOV-N扩增的片段大小是372 bp;能够同时检测出PEDV和PDCOV目的基因,却检测不到PRV、CSFV、PPV三种病毒;体系优化扩增PEDV-PDCOV混合核酸浓度下限为100 pg/μL;能够初步诊断出临床疑似病毒感染的病例。结果表明,成功的建立PEDVPDCOV二重RT-PCR检测方法,此方法敏感性高、特异性强,是一种能够快速有效的检测出猪PEDV-PDCOV单病毒感染或多病毒混合感染的临床诊断方法。

摘要：为研究RNA干扰对捻转血矛线虫Hc38基因转录的抑制作用,针对Hc38基因序列设计并合成特异性dsRNA、3对siRNAs(siRNA1,siRNA2,siRNA3),采用浸泡方式分别将dsRNA、siRNAs导入捻转血矛线虫感染性L3期幼虫体内,利用实时荧光定量PCR分析Hc38基因在L3期幼虫中的相对含量以确定抑制效果。通过体外转录成功获得高浓度和高纯度的dsRNA,L3期幼虫经浸泡处理3d后,siRNAs组Hc38基因的相对含量分别为(14.93±1.75)%、(26.34±2.91)%和(15.86±2.54)%,dsRNA组为(32.27±1.50)%,均显著低于对照组。表明通过浸泡法导入的dsRNA和siRNAs均能有效抑制Hc38基因的转录,从而为捻转血矛线虫及其他寄生线虫的基因功能研究提供了一种新的方法。

摘要：本试验旨在研究苜蓿黄酮对杂交绵羊瘤胃发酵功能和纤维降解酶活性的影响。选择体重为27.02kg±3.03kg、安装有永久性瘤胃瘘管的萨福克羊×小尾寒羊杂交F1代绵羊(公羊)12只,采用单因素随机区组试验设计,分成4组,每组3个重复,每个重复1只。对照组饲喂基础日粮,试验组分别在基础日粮中添加0.1%、0.2%和0.4%苜蓿黄酮。预试期7d,正试期41d。结果表明:1与对照组相比,添加苜蓿黄酮12h后,0.2%组pH显著升高(P0.05);各试验组氨态氮(NH3-H)浓度均无显著变化(P>0.05),浓度变化幅度随剂量增加而变大。2与对照组相比,0.1%和0.4%组乙酸、丙酸、丁酸、戊酸和总挥发性脂肪酸的平均浓度均提高,0.2%组则相反;添加苜蓿黄酮2h后,0.1%、0.2%组异戊酸浓度显著高于0.4%组(P0.05)。综上所述,日粮中添加苜蓿黄酮可维持杂交绵羊瘤胃发酵功能稳定,不同剂量苜蓿黄酮对纤维降解酶活性作用不同。在本试验条件下,建议苜蓿黄酮在杂交绵羊日粮中的添加量为0.4%。

摘要：试验旨在研究苜蓿黄酮对绵羊生长性能和血清指标的影响。选择体重为(27.02±3.03)kg的萨福克羊×小尾寒羊杂交F1代公羊28只,采用单因素随机区组试验设计,分成4组,每组7个重复,每个重复1只。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在基础日粮中添加0(对照组)、0.1%、0.2%、0.4%苜蓿黄酮。预试期7d,正试期41d。结果表明:1日粮中添加苜蓿黄酮对绵羊生长性能无显著影响(P>0.05)。2日粮中添加苜蓿黄酮对绵羊血清中球蛋白(GLB)、天冬氨酸(ASP)、尿素氮(BUN)、高密度脂蛋白(HDL)、磷(P)含量有显著影响(P<0.05),其中Ⅲ组GLB含量在第1天时显著低于Ⅰ、Ⅱ组(P<0.05);Ⅳ组ASP含量在第1和21天时显著低于Ⅰ组(P<0.05),BUN含量在第1天时显著低于Ⅰ组(P<0.05);Ⅱ组HDL含量在第21天时显著低于Ⅰ、Ⅲ组(P<0.05);Ⅳ组P含量在第21天时显著低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05)。综上所述,日粮中添加苜蓿黄酮可调节绵羊脂类代谢,提高氮的利用率;维持体内能量代谢及平衡Ca、P含量;具有潜在的促生长功能;对肝脏功能无不良影响。建议绵羊日粮中苜蓿黄酮的适宜添加量为0.2%。

摘要：为研究胸膜肺炎放线杆菌(APP)三聚体自转运黏附素(TAAs)的功能,以GenBank登录的APP血清5b型自转运黏附素基因5'端的3875bp序列设计引物,通过PCR的方法首次获得APP血清8型运黏附素N端的基因序列片段,测序结果与已知血清型的基因序列和氨基酸推导序列分别进行比对,结果表明与血清7型自转运黏附素N端同源性达到93%,氨基酸推导序列同源性达到97%;与血清5b型自转运黏附素N端同源性达到92%,氨基酸推导序列同源达到100%。经软件分析获得的序列含有与细菌的黏附、聚集和侵入密切相关的Hep_Hag基序,应用马克斯-普朗克研究所的在线分析TAAs的基序和蛋白域的软件daTAA,进行预测并证明所得序列为TAAs,并且具有完整的N段头部序列,有重要功能区具有良好的抗原性。比对的结果为寻找研究APP的定植基序和毒力因素提供了重要基础。

摘要：【目的】构建炭疽芽孢杆菌弱毒株C40-202 PA-LF 1融合基因表达载体并对其进行原核表达和反应原性检测,为炭疽亚单位疫苗制备、炭疽诊断和疫苗免疫效果检测提供依据。【方法】根据GenBank中登录的炭疽芽孢杆菌PA和LF基因序列设计2对引物,利用PCR方法从炭疽芽孢杆菌弱毒株C40-202中分别扩增出PA和LF 1基因片段,经XhoⅠ限制性内切酶消化后,通过黏性末端进行连接,获得PA-LF 1融合基因片段,利用SWISS-MODEL分析软件分别对PA、LF1和PA-LF1融合蛋白进行三级结构预测;将融合基因片段克隆至pET32a(+)质粒中,构建重组质粒pET32a-PA-LF1,并将重组质粒pET32a-PA-LF1转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,SDS-PAGE分析重组蛋白表达,Western blotting鉴定融合蛋白并分析其反应原性。【结果】从炭疽芽孢杆菌弱毒C40-202株成功扩增出PA、LF 1和PA-LF 1融合基因;成功构建了炭疽芽孢杆菌PA-LF 1融合基因表达质粒pET32a-PA-LF1,融合蛋白三级结构预测可折叠为正确的空间构象;构建的重组质粒经诱导表达、纯化和SDS-PAGE,获得分子质量为96 ku的融合蛋白,以包涵体形式表达;经Western blotting验证,纯化后的重组蛋白与经Ⅱ号炭疽芽孢苗免疫后的绵羊血清发生特异性结合,表明其具有良好的反应原性。【结论】PA-LF1融合蛋白具有良好的反应原性,可为炭疽诊断和疫苗免疫效果检测提供理论依据,同时也可作为一种炭疽亚单位疫苗的候选组分。

摘要：肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)可负调控骨骼肌的发育。本研究利用胞嘧啶碱基编辑器(cytidine base editor,CBE)在哈萨克羊MSTN基因编码区提前引入终止密码子,以期达到敲除MSTN基因的目的。共设计2条靶向哈萨克羊MSTN基因不同外显子的sgRNAs,分别连接至pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin质粒,并与pCMV-AncBE4 max-P2A-GFP质粒共转染哈萨克羊胎儿成纤维细胞,经CruiserTM酶酶切检测、Sanger测序和TA克隆分析。结果显示,成功筛选出可以在哈萨克羊MSTN基因外显子提前引入终止密码子的2条sgRNAs,其中STOPsg-1靶位点编辑效率为26.7%,STOPsg-2靶位点的编辑效率为6.7%。本研究成功运用CBE(AncBE4 max)技术在哈萨克羊胎儿成纤维细胞MSTN基因编码区实现定点编辑,为培育精确编辑MSTN基因的哈萨克羊奠定基础。

摘要：【目的】研究以玉米秸秆和小麦秸秆为中性洗涤纤维来源的日粮,对巴什拜羊采食量、日增重、屠宰率、器官发育及血液生化指标的变化,分析不同秸秆源的NDF对巴什拜羊生产性能和血液生化指标的影响。【方法】采用单因素试验设计,选取体重为(21. 76±4. 86) kg的羔羊20只,随机分为2个组,分别为Ⅰ组(饲喂玉米秸秆为纤维源的日粮)、Ⅱ组(饲喂小麦秸秆为纤维源的日粮),预试期为10 d,正试期为60 d。【结果】试验Ⅰ组、Ⅱ组羊平均日增重和干物质采食量、料重比、屠宰率差异不显著(P> 0. 05),两组间试验羊头、蹄、肾脏、胃重无显著差异(P> 0. 05),试验Ⅰ组肝脏和肺重量显著高于试验Ⅱ组(P 0. 05);试验Ⅰ组血清白蛋白含量、白球比、甘油三酯显著高于Ⅱ组(P <0. 05)。【结论】两种秸秆来源NDF的日粮对巴什拜羊的生长性能、屠宰性能没有显著的影响,以玉米秸秆为NDF来源的日粮对肝脏和肺部器官机体抵抗力、免疫力影响较大,以小麦秸秆为NDF来源的日粮可能更利于脂肪的消化吸收。

摘要：为了研究绵羊细粒棘球蚴重要抗原基因Tetraspanin 1-TSP1(TSP1)和Tetraspanin 1-TSP6(TSP6)的功能,对Gen Bank中Eg基因组数据库检索,获得TSP1和TSP6的c DNA序列并设计特异性引物。以Eg头节为总RNA模板,进行RT-PCR,将PCR产物克隆到p MD19-T载体后测序并进行生物信息学分析。TSP1 c DNA全长792个核苷酸,编码263个氨基酸,该多肽含有3个潜在的N端糖基化位点,2个N端酰基化位点,与已登录的标准株TSP1基因序列(EG_11043)同源性为98.99%,其推导的氨基酸序列同源性为98.48%;TSP6 c DNA全长666个核苷酸,编码221个氨基酸,该多肽含有5个N端酰基化位点,1个酪氨酸激酶磷酸化位点,与已登录的标准株TSP6基因序列(EG_00715)同源性为98.18%,其推导的氨基酸序列同源性为85.07%。运用分子生物学软件对Eg TSP1和TSP6基因进行生物信息学分析,预测已知序列的蛋白质抗原的结构和表位,为疫苗的研发奠定了前期基础。

摘要：为了优化棉粕源生物蛋白饲料二元复合发酵工艺参数,试验采用二因子重复设计方法,测定发酵产物中游离棉酚(free gossypol,FG)含量,确定优化热带假丝酵母(Candida tropicalisZD-3)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiaeZD-5)对棉粕源基础底物复合发酵的接种量和接种比例。结果表明:热带假丝酵母与酿酒酵母复合固体发酵棉粕源基础底物接种量为80 mL/kg,热带假丝酵母与酿酒酵母的接种比例为3∶7;二元复合固体发酵优化的条件参数为发酵温度32℃,发酵时间48 h,底物初始水分40%,自然pH值。