摘要：拟通过对双芽巴贝斯虫棒状体相关蛋白1(rhoptry-associated protein-1,RAP-1)羧基端进行研究,以期了解该蛋白的一些免疫学特性。利用生物信息学软件,对RAP-1进行抗原表位预测,并与其他重要的巴贝斯虫和泰勒虫相应基因序列进行比对,以筛选出抗原性和特异性均良好的基因片段;针对筛选出的基因片段设计引物,对该基因进行克隆和原核表达,最后利用Western-blot对重组蛋白的反应原性和特异性进行分析。结果显示,融合目的蛋白含His标签,分子质量为26ku左右,该蛋白只与双芽巴贝斯虫阳性血清发生特异性反应,与其他主要巴贝斯虫、泰勒虫的阳性血清无交叉反应。结果表明,表达的PAP-1蛋白可作为ELISA诊断方法的候选抗原,为建立一种双芽巴贝斯虫病特异性的免疫学诊断方法奠定了基础。

摘要：目的：筛选二类中兽药畜禽抗应激颗粒中黄柏总生物碱提取工艺。方法：采用L9（34）正交设计法对黄柏药材提取时所用乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数进行考察;采用单因素考察法对黄柏药材提取粒度进行考察。结果：黄柏提取总生物碱最佳提取工艺为：黄柏细丝2~3 mm,用药材10倍量75%乙醇回流提取3次,每次提取1.5 h。结论：该工艺稳定,质量可控,可用于产业化生产。

摘要：目的了解细粒棘球绦虫的乳酸脱氢酶蛋白基因的生物信息学特性,并进行原核表达。方法利用NCBI网站登录的细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶基因序列设计特异性引物和qRT-PCR引物,使用PCR扩增细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶基因,使用荧光定量法检测细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶在不同发育阶段的相对表达量,使用生物信息学软件对细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶蛋白进行分析;构建重组pET28a-EgLdh质粒,转进大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,利用SDS-PAGE检测蛋白的表达,并通过Western blot对蛋白进行免疫原性分析;利用原核表达重组pET28a-EgLDH蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,通过间接免疫荧光分析其在虫体上的分布。结果生物信息学分析发现EgLDH全长996 bp,编码331个氨基酸,分子式为C_(1575)H_(2561)N_(425)O_(470)S_(17),相对分子质量为35516.25,理论等电点为6.32,不稳定指数为27.96,显示为稳定蛋白,脂肪系数为106.83,亲水性为0.236,为疏水性蛋白,有13个潜在的B细胞抗原表位;通过双酶切鉴定及测序分析证明,pET28a-EgLDH重组质粒构建成功。重组质粒pET28a-EgLDH转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞后使用IPTG成功诱导表达蛋白,分子质量约为40 ku,Western blot结果显示,重组蛋白能被感染棘球蚴的犬阳性血清识别,表明其均具有良好的反应原性。EgLDH在细粒棘球绦虫阶段的相对转录水平显著高于原头蚴阶段。间接免疫荧光分析显示其定位在原头蚴的表皮层。结论rEgLDH具有较好的免疫活性,是一种潜在的疫苗候选抗原。

摘要：mRNA差异显示技术是在基因转录水平上研究差异表达和性状差异的有效方法之一。该技术以其简便、灵敏和RNA用量少,且可同时比较多组样品等优点成为目前该领域中最受青睐的技术之一。但是,该技术也存在假阳性率高、所得差异片段较短等诸多不足。针对这些缺陷,人们在引物的设计、PCR循环参数的优化、阳性克隆的鉴定等方面进行了改进。文章就该技术的原理、优越性、主要缺点、技术改进及其在寄生虫学研究中的应用方面进行了综述。

摘要：根据leptin基因在GenBank中的已知序列设计两对引物,采用PCR-SSCP和DNA测序技术在新疆细毛羊群体中进行单核苷酸多态性(SNPs)检测分析。结果表明,新疆细毛羊leptin基因第二、三外显子都具有多态性。其中,第二外显子扩增片段上有AA和AB两种基因型,AA基因型为优势基因型;而在第三外显子有CC、CD两种基因型,以CC基因型为优势基因型。并且经过DNA测序发现,在leptin第一内含子上有两处突变,即TTG三个连续碱基的插入和C→T的碱基替换;而在第三外显子上发生了G→T替换突变。

摘要：[目的]研究汉赛巴尔通体(Bartonella henselae,Bh)P26蛋白的抗原特性。[方法]根据GenBank中Bh P26基因DNA序列设计特异性引物,对阳性猫血液样品进行PCR扩增,克隆测序后进行分子特征分析。构建表达载体pETP26,转化至感受态细胞*** BL21(DE3)进行诱导表达;将重组蛋白纯化后免疫小鼠,用间接ELISA抗体检测试剂盒检测抗体,分析其免疫学特性。[结果]P26基因全长738 bp,编码246个氨基酸。推导的P26蛋白氨基酸序列含有4个潜在的N-糖基化位点、4个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个N-豆蔻酰化位点和1个信号肽序列;抗原表位主要集中在106~190位。SDS-PAGE和Western Blot分析结果表明,表达的分子量为35 kDa,可与B h阳性血清发生反应;重组蛋白免疫小鼠后其血清样本Bh抗体检测结果为阳性。[结论]P26重组蛋白在大肠杆菌的高效表达且具有良好的反应和免疫原性,为进一步探讨P26蛋白在Bh感染诊断研究中的潜在价值提供前期基础。

摘要：【目的】本文构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)HSP20基因的重组表达载体并表达、纯化重组蛋白,研究其反应原性。【方法】根据Gen Bank中Eg HSP20蛋白基因c DNA序列设计特异性引物,以细粒棘球蚴Eg头节总RNA为模板,进行RTPCR扩增,将PCR产物克隆至p MD19-T载体,测序验证后,将Eg HSP20抗原基因亚克隆至表达载体p ET-32a中,再将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞内,用IPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白进行纯化及反应原性分析。【结果】Eg HSP20 c DNA全长945个核苷酸,编码314个氨基酸。该多肽含有1个N端糖基化位点,1个CAMP磷酸化位点,5个PKC磷酸化位点,10个CKⅡ磷酸化位点;抗原表位区集中在39~53位和120~168位。SDS-PAGE检测显示,重组菌可表达分子量为51 k Da的重组蛋白;Western blot结果显示,表达的重组蛋白Eg HSP20抗原能与Eg阳性血清发生特异性反应。【结论】证实Eg HSP20蛋白具有较强的反应原性,为进一步利用Eg HSP20重组蛋白作为Eg感染诊断中候选标识分子奠定了前期基础。

摘要：从新疆维吾尔自治区石河子地区某猪场采集了150份猪脑组织样品,利用RT-PCR方法进行流行性乙型脑炎病毒(JEV)NS1基因扩增,结果有32份组织样品扩增出了430 bp的特异性目的条带。用检测的阳性样品研磨液接种乳鼠进行JEV的分离,经3次乳鼠传代后获得了1株JEV,命名为XJ/08/01。在此基础上,设计引物从接毒乳鼠脑组织样品中扩增JEV的主要抗原基因PrM/E并进行序列分析,结果表明,该分离毒株与JEV疫苗株SA14-14-2的同源性为99.6%,根据基因分型法确定该分离株属于基因Ⅲ型JEV。

摘要：选5头经产并装有永久性十二指肠瘘管的中国荷斯坦奶牛,采用5×5拉丁方试验设计,分为对照组(烟酸和核黄素,0g/d)、烟酸组(烟酸,3g/d)、核黄素组(核黄素,0.3g/d)、烟酸+核黄素组(烟酸3g/d+核黄素0.3g/d)、VB混合物组(烟酸3g/d+核黄素0.3g/d+硫胺素0.03g/d+泛酸0.42g/d+吡哆醇0.03g/d+生物素0.04g/d+叶酸0.04g/d),以研究十二指肠灌注烟酸、核黄素、烟酸+核黄素、VB混合物对奶牛生产性能、血液参数及牛奶风味的影响。结果表明,奶牛干物质采食量和产奶量在烟酸+核黄素组、VB混合物组中增加(P0.05);外周血红细胞数和血红蛋白含量在VB混合物组中增加(P0.05),核黄素组外周血红细胞数降低(P0.05),处理组间其余外周血红细胞参数、血小板参数及牛奶风味均无显著差异(P>0.05)。因此,泌乳奶牛十二指肠灌注烟酸+核黄素、VB混合物可以提高奶牛生产性能,且VB混合物对外周血红细胞数量和血红蛋白含量具有提高作用,经十二指肠灌注烟酸、核黄素、烟酸+核黄素、VB混合物对牛奶风味无副作用,且烟酸+核黄素、VB混合物组牛奶风味较对照组更佳。

摘要：试验旨在研究新疆驴细管冻精制作过程中精液冷冻液、降温平衡时间及液氮熏蒸时间对精子冻后活力的影响。研究共设计3个试验。试验1对比了INRA-Freeze、Optidyl、房氏驴精液冷冻保存液、自配马精液冷冻冷冻液等4种精液冷冻液在精子冷冻过程对精子冻后活力的影响,筛选出适合制作新疆驴细管冻精的冷冻液;试验2探索在细管冻精制作过程中平衡90、120、150 min对精子冻后活力的影响;试验3比较在细管冻精制作过程中使用液氮熏蒸5、6、7、8、9、10 min时对精子冻后活力的影响,探索液氮熏蒸的最佳时间。结果显示,使用INRA-Freeze冷冻液或房氏冷冻液在冷冻过程中对精子的损伤最小;冷冻过程中,降温平衡90、120、150 min对精子冻后活力的影响差异不显著(P>0.05);在冷冻过程中液氮熏蒸7 min时精子冻后活力最高,显著高于熏蒸5、9、10 min的精子冻后活力(P0.05)。研究表明,为降低成本可使用INRA-Freeze冷冻液稀释精液,于冰箱中平衡90~150 min后装入0.5 mL的细管中、液氮熏蒸7 min制作的冻精细管的精子活力最佳。