摘要：根据GeneBank库上国际标准菌株绵羊种布鲁氏菌(63/290)的OMP25的基因序列设计引物,用聚合酶链式反应(PCR)技术从新疆绵羊种布鲁氏菌(80/019)基因组DNA中扩增出OMP25基因片段,T4DNA连接酶将其连接于PBS-T克隆载体质粒上,将重组质粒转化到受体菌DH10B中,蓝白斑筛选阳性菌落,结果成功克隆OMP25基因片段,进行核苷酸序列测定,测序结果分析表明:新疆绵羊菌株与国际标准菌株有明显差异。

摘要：目的重组表达牛支原体P81膜蛋白,为研制牛支原体疾病诊断试剂提供研究基础。方法根据GenBank发表的牛支原体P81基因的编码序列,利用点突变试剂盒基于重叠延伸PCR原理设计5对引物,将P81基因的第165、690、1 455、1 674位编码色氨酸的TGA密码子分别突变为TGG,并连接到表达载体pET-32a(+),转化DH5α感受态细胞后经IPTG诱导表达目的蛋白,Western blot检测其反应原性。结果成功扩增出4处TGA突变为TGG的牛支原体新疆分离株P81基因,大小与预期值2 112bp一致。重组表达载体转化菌经IPTG 37℃诱导8h,表达分子质量单位(Mr)约94×103的目的蛋白,与预期相符。Western blot检测该蛋白能被抗P81多克隆抗体识别。结论成功构建重组牛支原体P81膜蛋白基因表达载体,获得的目的蛋白具有良好反应原性,为研发牛支原体病免疫诊断试剂奠定了基础。