摘要：目的运用实时定量PCR(Real-time PCR)检测结核分枝杆菌耐异烟肼菌株和敏感株Ag85B、38kDa及MPT64编码基因(fbpB、psts1、mpt64)的mRNA表达水平,探讨结核分枝杆菌耐异烟肼株和敏感株的蛋白抗原在转录水平的差异性。方法根据GenBank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1、mpt64及内参基因Sigа的特异引物,将fbpB、psts1、mpt64及Sigа扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料建立检测fbpB、psts1、mpt64的实时定量PCR方法,并应用此方法检测22株耐异烟肼菌株及25株敏感菌株(含H37Rv标准株)中fbpB、psts1、mpt64的mRNA表达水平。结果耐异烟肼菌株的fbpB表达水平为0.65±0.22,敏感菌株的表达水平为0.36±0.13,两者有显著性差异(t=5.683,P0.05)。结论成功建立了fbpB、psts1、mpt64基因的实时定量检测方法,检测显示耐异烟肼菌株的fbpB、psts1基因的mRNA表达水平显著高于敏感菌株,可能为耐异烟肼MTB的实验室诊断提供分子标识。

摘要：目的研究髓样细胞白血病-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)基因在小鼠巨噬细胞Raw264.7和人巨噬细胞THP-1中的表达情况,筛选出表达含量高的细胞株作为实验用细胞,根据筛选的结果构建靶向小鼠Mcl-1基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒进行转染,最后筛选出沉默Mcl-1基因效果最明显的shRNA表达质粒。方法利用半定量RT-PCR和蛋白质免疫印迹(Western blotting)分别检测两种巨噬细胞中Mcl-1mRNA和蛋白表达情况。采用小分子干扰RNA(siRNA)软件设计3个针对Mcl-1基因不同位点的shRNA片段,由公司构建携带此shRNA片段的真核表达质粒(Mcl-1shRNA1-3),然后通过脂质体将真核表达质粒载体转染到小鼠巨噬细胞株Raw264.7中,24、48h后通过倒置荧光显微镜观察转染效果,并分别采用实时定量PCR和Western blot检测Mcl-1mRNA和蛋白表达情况。结果小鼠巨噬细胞Raw264.7中Mcl-1的mRNA及蛋白质的表达显著高于人巨噬细胞,差异有统计学意义(P<0.05);构建的shRNA表达载体在24、48h均能降低Raw264.7细胞内mcl-1mRNA和蛋白水平,尤其在48h沉默效果最为明显;转染48h后与正常组、脂质体组和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);与Mcl-1shRNA1和Mcl-1shRNA2相比,Mcl-1shRNA3对Mcl-1mRNA和蛋白的沉默作用最强。结论成功筛选出了实验所用细胞Raw264.7及对小鼠巨噬细胞Raw264.7内Mcl-1具有明显沉默效果的靶向Mcl-1shRNA3真核表达质粒。

摘要：目的运用实时定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)检测结核分枝杆菌蛋白Ag85B、38kDa及MPT64编码基因的表达水平,探讨结核分枝杆菌耐药菌株和敏感株,北京基因型和非北京基因型的蛋白抗原在转录水平的差异性及qRT-PCR诊断活菌的价值。方法根据Genbank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1、mpt64及内参基因Sigа的特异性引物,将扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料建立检测fbpB、psts1、mpt64基因表达水平的实时定量PCR方法。选用46株结核分枝杆菌临床分离株,以及2株非结核分枝杆菌。应用qRT-PCR检测上述菌株、H37Rv国际标准株fbpB、psts1、mpt64基因的表达水平。结果结核分枝杆菌活菌的扩增结果呈典型的S型曲线,而结核分枝杆菌死菌和非结核分枝杆菌呈水平直线,没有检测到荧光信号;耐药组中的mpt64基因表达水平低于敏感组及H37Rv标准株,有统计学意义(t=3.093,P<0.01;t=2.545,P<0.05),北京基因型组中的psts1基因表达水平低于非北京基因型组及H37Rv标准株。结论有统计学意义(t=2.567,P<0.05;t=2.373,P<0.05)。结论成功建立了fbpB、psts1、mpt64基因的qRT-PCR检测方法,该方法可以快速判断活菌与死菌。检测发现耐药组中的mpt64基因表达水平低于敏感组及H37Rv标准株;北京基因型组中的psts1基因表达水平低于非北京基因型组及H37Rv标准株。

摘要：基于案例学习教学方法以案例为中心、以学生为主体、以培养和提高学生运用基础知识分析解决问题的能力为目标,其在医学教学中已经得到广泛应用。本研究以石河子大学医学院针对五年制临床医学专业学生开设的医学微生物学实验课程为例,阐述了基于案例学习教学方法在医学微生物学实验课程中的教学设计和教学实施过程,采用医学微生物学实验考核、问卷调查方法和师生座谈会评价教学效果。结果表明,87.3%(55/63)的学生成绩为优秀,基于案例学习的医学微生物学实验教学将基础与临床相融合,有利于提高学生的病原学诊断分析能力,得到了学生的认可,从而提高了医学微生物学实验的教学质量。

摘要：以学生为中心的医学微生物学课程思政是以学生全程参与教学过程,通过“演、做、辩、学、评”教学方式,发挥“00后”学生“虚拟化、个性化、独特化、开放化”的优势,使学生在学习医学微生物学知识的同时培养“科学家精神、核心价值观、批判性思维、创新思维”,达到课堂教学润物无声的育人效果。

摘要：目的 :为培养学生自主学习能力,本文就《病原微生物学》实验教学中,如何开展自主设计性实验做了探讨。方法:以2015级临床医学1、2班混合班24人及口腔医学专业2班27人,共51名本科生为研究对象,开展了一项自主设计性实验——脓汁标本的分离鉴定,并且针对性地开放实验室。结果:根据代课教师多年的经验及一定的调查,实验班学生完成脓汁标本分离鉴定的实验好,学生做实验兴趣高且实验设计方案更全面,操作过程中也体现了团结协作的精神。结论:开设自主设计性实验,学生作为实验主体,由被动转为主动,有效地调动了学生实验的积极性,有助于提高学生问题解决能力和动手能力,有助于学生临床思维能力的培养,增强团队协作精神。因此如何开展自主设计性实验值得今后不断地摸索和完善。

摘要：目的运用实时定量qPCR(quantitative real-ti me PCR)检测结核分支杆菌耐异烟肼菌株和敏感株Ag85B和38 ku蛋白编码基因(fbpB、psts1)的表达水平,分析结核分支杆菌耐异烟肼株和敏感株的蛋白抗原在转录水平的差异性。方法根据GenBank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1及内参基因Sigа的特异引物,将fbpB、psts1及Sigа扩增片段克隆入载体pMD18-Tsi mple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用实时定量PCR检测22株耐异烟肼菌株及25株敏感菌株(含H37Rv标准株)中fbpB、psts1的表达水平。结果耐异烟肼菌株的fbpB表达水平为0.65±0.22,敏感菌株fbpB表达水平为0.36±0.13,差异有统计学意义(t=5.683,P<0.01);耐异烟肼菌株的psts表达水平为13.63±4.16,敏感菌株psts1表达水平为9.86±2.79,差异有统计学意义(t=3.869,P<0.01)。结论应用实时定量PCR检测耐异烟肼菌株的fbpB、psts1的表达水平显著高于敏感菌株,为耐药结核的实验室诊断提供分子标识。