摘要：根据GenBank上已公布的植物黑芥子酶基因序列设计引物,采用RT-PCR和3′/5′-RACE相结合的方法,从芥蓝中克隆出黑芥子酶基因全长cDNA序列.序列全长为1832 bp,开放阅读框为1647 bp,编码549个氨基酸,含有糖基水解酶家族Ⅰ(Glyco_hydro_1)活性位点,GenBank登录号为DQ767973.该核苷酸序列与十字花科其他植物的黑芥子酶基因序列具有较高的同源性,同油菜、萝卜、芥菜和大白菜的同源性达90%以上.利用pET28-α(+)构建芥蓝黑芥子酶基因的原核表达载体,转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表明表达蛋白的分子质量约为65 ku.

摘要：【目的】克隆籼稻谷氨酸脱羧酶(GAD)基因的全长cDNA,并进行序列分析和植物表达载体构建,为改良水稻的营养保健品质奠定基础。【方法】根据已知植物GAD基因的保守区域设计引物,以高GABA籼稻品系"新-9-4"的胚芽为材料,利用RT-PCR和RACE技术克隆GAD基因的全长cDNA;扩增其编码序列,构建双T-DNA植物表达载体。【结果】扩增获得长1962bp的籼稻GAD基因全长cDNA(OsiGAD),包含1479bp的开放阅读框,编码492个氨基酸。OsiGAD与已报道的水稻GAD基因OsGAD1、OsGAD2、OsGAD3的核苷酸序列同源性分别为67.1%、69.4%、98.3%,推导氨基酸序列的同源性分别为77.6%、70.1%、100.0%。OsiGAD蛋白序列具有磷酸吡哆醛结合位点和与钙调蛋白结合的C端延伸区域;构建了其具有水稻胚乳特异表达特性的双T-DNA植物高效表达载体pCDMAR-OsiGAD-hpt,选择标记基因和OsiGAD基因分别位于此载体的两个不同T-DNA区。【结论】克隆获得的籼稻GAD基因OsiGAD长1962bp,并成功构建了其双T-DNA植物高效表达载体。

摘要：选择绞股蓝叶片为受试材料,采用正交设计法,进行微波辅助水提绞股蓝主要保健成分(皂甙、多糖、黄酮)的研究,得到提取的最佳工艺条件:料液比1∶30,浸提温度70℃,浸提时间120 min,微波强度中高,微波时间120 s。微波水提绞股蓝既可以节约生产成本,又能提高效率。

摘要：β-胡萝卜素是维生素A原,对人体健康具有重要作用,可降低多种癌症特别是肺癌的发病率.ζ-胡萝卜素脱氢酶是β-胡萝卜素生物合成途径的关键酶之一.根据其它植物ζ-胡萝卜素脱氢酶基因(zds)的保守序列,设计简并引物,从甘薯块根总RNA逆转录的cDNA中扩增出608 bp的zds保守序列,然后用RACE技术扩增出该基因的全长***全长cDNA共2057 bp,有一1773 bp的开放阅读框,编码591个氨基酸,相对分子质量为65 ku.并成功构建了zds植物表达载体p2300-zds,可进一步用于提高作物β-胡萝卜素含量的遗传转化研究.

摘要：通过密闭玻璃箱内测定了2变型4栽培品种变叶木类植物在常态下、固定脉冲电场和正交设计脉冲电场刺激下负离子释放浓度,分析与探讨植物在不同情况下负离子释放浓度及影响负离子释放的电场因素,旨在筛选在电刺激下能高效释放负离子的植物种质资源与高效释放负离子的最佳电场参数组合。结果表明:(1)常态下植物能释放负离子,戟叶变叶木释放负离子最高浓度为381 ion/cm3,引起生态效应有限。不同植物对负离子的产生影响极显著(P=0.000<0.01),可能与物种本身特性有关。(2)固定脉冲电场刺激下,研究的变叶木类植物在负离子释放量较常态下显著提高,倍增系数在283~3 161,脉冲电场刺激下研究植物释放负离子的能力与植物在常态下释放负离子浓度显著相关。推测植物负离子释放量激增的原因是源于脉冲电场对植物生理活动造成的影响。(3)每个研究植物接受最佳脉冲电场参数组合刺激可产生最大量的负离子,最佳脉冲电场刺激下6个研究植物有5个产生的负离子比在固定的脉冲电场刺激下大1~2个数量级。设定最佳脉冲电场刺激柳叶变叶木,能持续10 d高效产生负离子而不产生"疲惫现象"。

摘要：目的筛选适用于显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)的内参基因。方法设计简并引物,采用RT-PCR从显齿蛇葡萄中克隆6个候选内参基因片段,包括肌动蛋白基因(Actin)、3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)、18 S核糖体rRNA基因(18 S-rRNA)、α-微管蛋白基因(α-Tubulin)、β-微管蛋白基因(β-Tubulin)和多聚泛素酶基因(UBQ)。应用qRT-PCR技术检测这6个候选内参基因在显齿蛇葡萄不同组织器官中(茎尖、嫩叶、成熟叶、老叶、茎和根)的表达情况。借助Ge Norm、Norm Finder和Best Keeper 3种统计学软件综合评价6个内参基因的表达稳定性。通过苯丙氨酸解氨酶基因(Ag PAL)的表达分析对筛选出的内参基因进行稳定性验证。结果 18 S-rRNA、GAPDH和Actin的表达稳定性较好,适合作为显齿蛇葡萄不同组织基因表达研究的内参基因,以这3个基因为内参基因分析Ag PAL基因的相对表达量,结果发现它们在各组织器官中的表达变化趋势基本一致。结论确定显齿蛇葡萄qRT-PCR分析的合适内参基因,为后续相关基因表达研究奠定基础。

摘要：采用响应曲面分析法对葡萄籽原花青素的提取工艺进行优化。对提取率影响因素进行单因素分析后,以Box-Behnken设计(BBD)评价提取剂浓度、料液比、提取时间和提取温度4个因素显著性和交互作用的分析,得出葡萄籽原花青素的最佳提取条件为:丙酮浓度75%,料液比1∶10(w/v),时间44 min,温度51℃。在该条件下,葡萄籽原花青素提取率的预测值为2.90%,验证为2.88%,纯度为55.92%。

摘要：研究金边龙舌兰糖类组分的最佳提取工艺及不同施肥配比对金边龙舌兰糖类组分的影响。利用正交设计筛选最佳的提取工艺为A1B3C3D3(85%乙醇,料液比为1 g∶35 mL,65℃超声提取10 min),利用该最佳提取工艺研究不同施肥配比对金边龙舌兰糖类组分含量的影响,结果表明,在N3P3K1(N3=0.18 g/L、P3=0.07 g/L、K1=0.02 g/L)处理下蔗糖及果糖的含量最高,分别达0.66、0.09 mg/mL,葡萄糖则是在N4P3K2(N4=0.23 g/L、P3=0.07 g/L、K2=0.06 g/L)处理下含量最高,达到0.42 mg/mL,而在N3P3K1组合处理下的葡萄糖含量为0.40 mg/mL,与其相差甚小,因此要整体提高金边龙舌兰糖类组分可施用N3P3K1(N3=0.18 g/L、P3=0.07 g/L、K1=0.02 g/L)组合的氮、磷、钾(NPK)配比。

摘要：从本实验室保存的57株菌株中筛选出一株可高效降解纤维素的纤维素酶高产菌株哈茨木霉APS62,其滤纸酶活力(FPA)为4.981 IU.g-1,是对照里氏木霉模式菌株APS63的3.02倍.产酶条件优化研究的结果表明,以稻草粉为底物,APS62菌株产滤纸酶的最适条件为:培养温度28℃,培养时间3 d,稻草粉与麸皮比5∶0,接种量6%,氮源为NH4NO3(总氮量0.4%),培养基起始pH为5.0,吐温80含量0.1%.此条件下的FPA为6.125 IU.g-1,比优化前提高8.10%.

摘要：利用超声波提取芹菜中槲皮素,采用正交试验L16(45)对芹菜槲皮素成分提取工艺进行优化设计。结果表明,芹菜槲皮素提取工艺的最佳条件为:浸泡4 h,超声波功率320 W,乙醇浓度90%,液料比25∶1,提取40 min,在此条件下芹菜槲皮素的提取率最高,达0.2221%。