摘要：热休克蛋白70 (heat shock protein 70,Hsp70)是绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Movi)的重要膜蛋白,是机体内高度保守的生物分子,但在种间差异大,可作为分子生物学检测的候选靶区。为建立基于Hsp70基因的Movi通用型TaqMan实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,并进一步了解其遗传变异情况,本研究基于GenBank中Movi的Hsp70基因特征,设计特异性的引物及探针,建立了基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体qPCR检测方法。应用建立的检测方法对88份山羊鼻拭子样品及43份疑似羊支原体性肺炎(Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats, MPSG)病料进行检测。将检测结果为Movi阳性的肺组织样品进行分离鉴定,并对分离株Hsp70基因进行序列分析。结果显示,建立的qPCR检测方法其相关系数为1.00,扩增效率为96.0%,斜率为-3.411,Y轴截距为37.29。特异性强,与丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides ***, Mmc)、山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum ***, Mccp)、莱氏无胆甾原体(Acholeplasmalaidlawii, AL)、无乳支原体(Mycoplasma agalactiae, Maga)、伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis, CP)、羊口疮病毒(orf virus, ORFV)、牛支原体(Mycoplasma bovis, Mb)等牛羊常见病原均无交叉反应;敏感性高,最低检测限为5.72 copies·μL^(-1);重复性优,组内变异系数和组间变异系数均小于1.00%。6株Movi分离株Hsp70基因全长均为1 818 bp,与其它Movi参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%~99.4%和98.0%~100.0%;进一步分析发现,山羊源Movi均比绵羊源多1个N-糖基化位点。遗传演化分析表明,其均处于ClusterⅠA亚分支(均为山羊源)。综上,本研究建立了特异性强、敏感性高、重复性优的基于Hsp70基因的Movi的qPCR检测方法。序列分析发现,不同来源Movi的Hsp70基因核苷酸同源性高;遗传演化分析证实,Movi福建株与山羊源分离株遗传关系较近。本研究不仅为Movi临床诊断提供了技术支持,更为进一步了解Movi遗传演化规律提供参考。

摘要：猪细小病毒7型(PPV7)是近年来新发现的一种新型PPV。目前,缺乏更为高效的针对PPV7的检测方法,为了建立能够快速检测PPV7的方法,本研究根据PPV7 NS1基因的保守区序列,设计1对特异性引物及TaqMan探针。经过各反应条件的优化,初步建立了一种便捷、灵敏、能够快速准确检测PPV7的荧光定量PCR(qPCR)方法,并对其特异性、敏感性、稳定性以及与SYBR GreenⅠqPCR检测方法的符合率进行检测与对比。结果显示,该方法除对PPV7的基因组DNA有特异性扩增,对猪伪狂犬病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、日本乙型脑炎病毒及PPV1核酸均无交叉反应,特异性较强。该方法对重组质粒标准品检测限为1.76拷贝/μL,而常规PCR方法检测限为1.76×10^(2)拷贝/μL,表明本研究建立的方法敏感性较高。该方法对不同浓度质粒标准品的组内和组间重复性试验变异系数均小于1.7%,重复性较好。利用本研究建立的qPCR方法和SYBR GreenⅠqPCR方法对采自福建地区的150份样品进行检测,结果显示,两种检测方法的阳性率分别为24.67%(37/150)和6.67%(10/150),二者的总符合率为80.67%(121/150)。表明本研究建立的qPCR方法可以用于临床样品的检测。本研究建立的qPCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性稳定性好,为PPV7的流行病学调查及检测提供了新的技术支撑。

摘要：试验旨在研究低蛋白日粮中添加复合酶对白羽肉鸡生长性能、血清生化和抗氧化指标、免疫功能和消化器官的影响。将288只1日龄白羽肉鸡随机分为6组,试验期42 d,试验配方设计1~21日龄和22~42日龄两阶段。对照组(CK组)饲喂常规蛋白日粮(两阶段粗蛋白水平分别为21.28%和19.04%);试验组均饲喂低蛋白日粮(两阶段粗蛋白水平较CK组分别降低0.97%和0.94%),试验1、2、3组全程分别添加200 mg/kg复合酶A(T1组)、200 mg/kg复合酶B(T2组)、300 mg/kg复合酶B(T3组),试验4组两阶段分别添加复合酶B 100、300 mg/kg;另设低蛋白日粮组(T0组)。试验结束时进行生长性能、血清生化和抗氧化指标、免疫功能和消化器官发育情况的测定分析。结果表明:T2、T3组21日龄活体重、42日龄活体重和欧洲生产效率指数均较高,T3组1~42日龄料重比低于其他组;CK组和T3组血清中尿素(UREA)含量显著低于T4组(P<0.05),T2组血清谷草转氨酶(AST)活性显著高于T1组外的其他组(P<0.05),T0、T1和T2组血清超氧化物歧化酶(SOD)含量显著低于T4组(P<0.05);T4组IgA、IgG和IgE显著高于T0组(P<0.05)。综上所述,在低蛋白日粮中添加复合酶能够提高白羽肉鸡指标和抗氧化能力,促进免疫器官和消化器官发育,提高免疫力。

摘要：探究不同添加剂处理笋壳对其发酵品质及湖羊瘤胃微生物的影响,采用小罐青贮的方式进行单独以及复合添加甲酸、纤维素酶、EM菌对笋壳发酵效果的影响研究,试验分为8个组:CK组(对照组)、FA组(甲酸)、CE组(纤维素酶)、EM组(EM菌)、FC组(甲酸+纤维素酶)、CM组(纤维素酶+EM菌)、FM组(甲酸+EM菌)、FCM组(甲酸+纤维素酶+EM菌),发酵80 d后测定营养成分和发酵品质。随之筛选出较优FM、FCM组进行湖羊饲养试验,采用单因素随机试验设计,选取30只体重相近[初始体重(16.68±1.05)kg]、健康状况良好的公湖羊,将试验羊随机分为3组,每组10只。结果表明:1)FM和FCM组青贮感官评价良好,CK和CM组较差,其他各组一般。2)FA、EM、FC、FM、FCM组干物质(DM)、粗蛋白(CP)含量分别为:32.14%、32.37%、32.30%、33.96%、34.15%;9.31%、9.64%、9.80%、10.82%、11.18%;均显著高于CK组(29.34%、8.57%)(P0.05);FM组(6.44%)、FCM组(6.12%)BS11科相对丰度高于CK组(1.84%),但无显著差异(P>0.05)。综上所述,复合添加青贮剂发酵笋壳感官品质、发酵特性和营养品质提高,用于饲喂湖羊,能促进湖羊瘤胃形态发育,但改善瘤胃微生物组成和结构的作用不太明显。

摘要：旨在研究不同添加剂发酵对笋壳营养成分和发酵品质的影响,探究不同处理对湖羊生产性能、肉质氨基酸、血液生化指标、瘤胃发酵参数的影响。通过预试验筛选出FM(甲酸10 mL·kg^(-1)+EM复合菌20 mL·kg^(-1))和FCM组(甲酸10 mL·kg^(-1)+纤维素酶150 mL·kg^(-1)+EM复合菌20 mL·kg^(-1))对笋壳进行为期45 d的青贮,并进行湖羊饲养试验。采用单因素随机试验设计,选取体重相近[初始体重(16.68±1.05) kg]、健康无病公湖羊30只,随机分为3组,每组10只。预饲期7 d,正饲期60 d。结果表明:1)FM、FCM组干物质(DM)、粗蛋白(CP)含量分别为35.58%,36.60%;11.27%,12.09%;均显著高于CK组(33.20%,9.75%)(P<0.05),FCM组显著高于FM组(P<0.05);FM、FCM组中性洗涤纤维(NDF)(39.46%,37.09%)均显著低于CK组(44.16%)(P<0.05),FCM组显著低于FM组(P<0.05);FM、FCM组酸性洗涤纤维(ADF)(38.09%,37.49%)均显著低于CK组(41.62%)(P<0.05)。2)FCM组宰前活重、胴体重、净肉重、眼肌面积分别为:22.11 kg,10.41 kg,9.48 kg,14.41 cm^(2),均显著高于对照组(20.79 kg,9.74 kg,8.71 kg,11.62 cm^(2))(P<0.05)。3)FCM组肝脏、瘤胃、皱胃、脾脏、小肠、大肠重量以及瘤胃器官指数分别为:332.76g,475.32g,85.15g,32.55g,434.63g,303.48g,2.15%;显著高于FM(319.78 g,447.18 g,75.05 g,29.01 g,416.62 g,286.70 g, 2.04%)和CK组(297.88 g,418.76 g,60.09 g,26.05 g,399.01 g,279.36 g, 2.01%)(P<0.05);FM组肝脏和瘤胃重量显著高于CK组(P<0.05)。4)FM和FCM组超氧化物歧化酶(SOD)和高密度脂蛋白(HDL)含量分别为:27.16,30.96 U·L^(-1);1.72,1.77 mmol·L^(-1);显著高于CK组(20.69 U·L^(-1),1.12 mmol·L^(-1))(P<0.05);FM、FCM组丙二醛(MDA)含量(0.57、0.59 nmol·mL^(-1))显著低于CK组(1.17 nmol·mL^(-1))(P<0.05);FCM组谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)(328.39 U·mL^(-1))显著高于CK组(278.01 U·mL^(-1))(P<0.05)。5)FCM组背最长肌中缬氨酸(Val)、异亮氨酸(Ile)、苯丙氨酸(Phe)含量分别为:2.75,8.49,7.35 g·kg^(-1),显著高于FM(1.92,5.19,6.17 g·kg^(-1))和CK组(1.66,5.96,6.03 g·kg^(-1))(P<0.05);组氨酸(His)、丝氨酸(Ser)含量(3.87、6.70 g·kg^(-1))显著高于CK组(2.20、5.43 g·kg^(-1))(P<0.05)。综上所述,FCM组更能明显提升笋壳营养价值、改善笋壳青贮品质,饲喂湖羊效果最好。

摘要：【目的】微小RNA(microRNAs,miRNAs)在昆虫的繁殖、发育和免疫等重要生命活动的调控过程中扮演关键角色。本研究旨在探究在意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica幼虫个体水平过表达与敲减ame-miR-13b对其靶基因表达的影响,为深入探究ame-miR-13b调控意大利蜜蜂幼虫肠道发育的分子机理提供理论和实验依据。【方法】根据ame-miR-13b的核苷酸序列设计合成相应的模拟物mimic-ame-miR-13b和抑制物inhibitor-ame-miR-13b及其对照mimic-NC和inhibitor-NC,混入饲料后饲喂意大利蜜蜂3日龄幼虫,每12 h更换一次饲料,连续饲喂6次,以分别过表达和敲减ame-miR-13b;通过RT-qPCR检测过表达和敲减ame-miR-13b后意大利蜜蜂幼虫肠道中ame-miR-13b及其靶基因Ecr,Egfr和P45018a1的表达量。【结果】与mimic-NC饲喂组相比,mimic-ame-miR-13b饲喂组中ame-miR-13b在意大利蜜蜂4和6日龄幼虫肠道中均显著上调表达;与饲喂inhibitor-NC组相比,inhibitor-ame-miR-13b饲喂组中ame-miR-13b在4日龄幼虫肠道中下调表达,在5和6日龄幼虫肠道中显著下调表达。与mimic-NC饲喂组相比,过表达ame-miR-13b组中意大利蜜蜂6日龄幼虫肠道中Egfr的表达量显著降低,而Ecr和P45018a1的表达量均显著升高。与inhibitor-NC饲喂组相比,敲减ame-miR-13b组中意大利蜜蜂6日龄幼虫肠道中Egfr上调表达但不显著,Ecr显著上调表达,而P45018a1显著下调表达。【结论】通过饲喂法在意大利蜜蜂幼虫个体中成功实现了miRNA的过表达和敲减;ame-miR-13b与Egfr之间存在潜在的负调控关系。

摘要：【目的】本研究旨在明确ace-miR-3720在中华蜜蜂Apis cerana cerana工蜂幼虫肠道发育中的功能,并为进一步探究ace-miR-3720调控肠道发育的分子机理提供理论和实验依据。【方法】根据ace-miR-3720的核苷酸序列设计合成相应的模拟物mimic-miR-3720和抑制物inhibitor-miR-3720,通过饲喂中华蜜蜂工蜂幼虫对ace-miR-3720分别进行过表达和敲减。采用RT-qPCR检测过表达和敲减ace-miR-3720后4-6日龄幼虫肠道内ace-miR-3720及其靶基因CKⅠ,MAPK1和βGBP1的相对表达量;使用分析天平称重过表达和敲减ace-miR-3720后的幼虫肠道重量。【结果】相较于无义模拟物(nonsense mimic,mimic-NC)组,mimic-miR-3720组中ace-miR-3720表达量在中华蜜蜂4和5日龄幼虫肠道中均极显著上调,在6日龄幼虫肠道中显著上调;相较于无义抑制物(nonsense inhibitor,inhibitor-NC)组,inhibitor-miR-3720组中ace-miR-3720表达量在4日龄幼虫肠道中极显著下调,在5和6日龄幼虫肠道中显著下调。ace-miR-3720与基因CKⅠ,MAPK1和βGBP1之间存在潜在靶向关系。与mimic-NC组相比,mimic-miR-3720组中CKⅠ表达量在4和5日龄幼虫肠道中皆极显著下调,在6日龄幼虫肠道中显著下调;MAPK1表达量在4日龄幼虫肠道中显著下调,在5和6日龄幼虫肠道中均极显著下调;βGBP1表达量在4日龄幼虫肠道中显著下调,在5和6日龄幼虫肠道中均极显著下调;此外,4和5日龄幼虫肠道重量均极显著降低,6日龄幼虫肠道重量显著降低。与inhibitor-NC组相比,inhibitor-miR-3720组中CKⅠ表达量在4-6日龄幼虫肠道中皆极显著上调;MAPK1表达量在4日龄幼虫肠道中显著上调,在5和6日龄幼虫肠道中极显著上调;βGBP1表达量在4和6日龄幼虫肠道中显著上调,在5日龄幼虫肠道中极显著上调;此外,4和6日龄幼虫肠道重量显著升高,5日龄幼虫肠道重量极显著升高。【结论】ace-miR-3720在中华蜜蜂工蜂幼虫肠道内真实存在;通过饲喂模拟物和抑制物可对中华蜜蜂工蜂幼虫肠道内分别实现miRNA的有效过表达和敲减;ace-miR-3720可能通过调控CKⅠ,MAPK1和βGBP1的表达影响中华蜜蜂工蜂幼虫肠道重量并参与幼虫肠道发育。

摘要：细菌病综合实习是提升动物医学专业预防兽医学实践教学质量的重要环节。针对传统预防兽医学中细菌学实验内容零碎、不系统的现状,本文提出融合细菌学相关实验技术,开展连续性好、综合性强的细菌病综合实习。该实习从混合细菌感染动物人工造病开始,通过一系列实验技术手段分离、纯化和鉴定细菌,进而确诊病因,实施后显著提升了学生的综合实践能力和科研创新水平,有利于新时代高素质动物医学专业人才的培养。

摘要：本研究旨在克隆鉴定西方蜜蜂Apis mellifera发育相关基因AmWnt1,分析其在不同发育时期和刚出房工蜂不同组织的表达特征,为进一步研究Wnt1基因功能提供理论参考。根据NCBI中AmWnt1基因序列信息,利用Primer 6.0设计引物,RT-PCR扩增AmWnt1基因完整的CDS序列,进行生物信息学预测,用推导的氨基酸序列构建系统进化树;利用荧光定量PCR检测该基因在卵(1日龄、2日龄和3日龄)、幼虫(1日龄、3日龄和5日龄)、预蛹(1日龄和3日龄)、蛹(0日龄、2日龄、4日龄、6日龄和8日龄)、刚出房工蜂、哺育蜂和采集蜂以及刚出房工蜂8个组织中相对表达量。克隆获得西方蜜蜂的Wnt1基因CDS序列,命名为AmWnt1,上传NCBI,获得GenBank登录号MT993937。全长1239 bp,编码412个氨基酸,预测等电点为9.48,相对分子质量为46.40313 kDa。序列比对和系统进化树结果表明:AmWnt1蛋白与其它膜翅目昆虫聚为一类,其中和东方蜜蜂Apis cerana亲缘关系最近,序列相似度为99.50%。时空表达谱结果表明:AmWnt1基因在各个时期中均有表达,且在胚胎后期表达量最高,预蛹期和蛹前期表达量相对较高,其它时期表达量相对较低;AmWnt1基因在刚出房工蜂头、胸、触角表达量高于其它组织。AmWnt1可能参与西方蜜蜂胚胎晚期的神经系统发育和化蛹过程中的四肢发育等关键历程,为进一步研究AmWnt1功能提供了理论参考。

摘要：【目的】建立牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)便捷检测方法,为福建省BRV的流行病学调查检测提供便捷技术支持。【方法】根据GenBank公布的BRV基因组序列,利用Oligo7.0软件设计并合成1对特异性引物,通过优化反应条件,建立了检测BRV的RT-PCR方法,同时开展了特异性、敏感性和重复性试验,并将建立的方法应用于22份临床样品的检测。【结果】建立的方法仅能够扩增出BRV的特异性片段,对其他畜禽常见病原体无特异性扩增;该方法的灵敏度为6.86×10^(5)copies·μL^(-1)。对22份临床样品进行检测,检测出12份阳性样品,阳性率为54.55%。【结论】本研究建立的BRV RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可应用于临床样本的检测,为福建省BRV的诊断和流行病学调查提供了技术支持。