摘要：为深入研究CXCR4在骨髓间质干细胞(MSCs)体内迁移中的作用,构建CXCR4基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并实现其在大鼠MSCs(rMSCs)中表达。根据大鼠CXCR4 mRNA序列,设计并合成包含各靶序列的互补DNA链,插入pSUPER载体的H1 RNA启动子后面,产生pRiCXCR4,将其中的CXCR4 shRNA表达结构酶切插入慢病毒载体质粒pNL-EGFP,产生pNL-RiCXCR4-EGFP。在脂质体介导下与包装质粒pHELPER和包膜质粒pVSVG共转染293T细胞,包装生产慢病毒,测定慢病毒功能滴度。慢病毒转导rMSCs后,用Real-time RT-PCR、Western blotting和流式细胞术检测RNAi组(CXCR4a、CXCR4b和CXCR4c)、空载体组(Mock)和对照组(Control)中CXCR4表达情况。结果显示,酶切和测序证实pRiCXCR4质粒构建正确,产生能同时表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和CXCR4 shRNA的慢病毒载体质粒pNL-RiCXCR4-EGFP,未浓缩和浓缩慢病毒悬液的功能滴度分别为6.4×104TU/mL和6.9×106TU/mL。慢病毒转导rMSCs 48 h后,与空载体组和空白组相比,3个RNAi组均不同程度抑制CXCR4表达,CXCR4b-MSC组在mRNA水平抑制了95.6%,抑制作用最明显。大鼠CXCR4基因RNAi慢病毒载体构建成功,为深入研究CXCR4在rMSCs向损伤组织定向迁移的作用奠定了基础。

摘要：背景:目前国内外对嗅鞘细胞培养条件的报道各不相同,个别方法重复性较差,不利于实际应用。目的:观察差速贴壁+化学药物+胰酶限时消化法纯化大鼠嗅鞘细胞的效果,并与化学药物法、差速贴壁法培养结果进行比较。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-06/2008-06在福建医科大学人体解剖与组织胚胎学系实验室完成。材料:新生2d的SD大鼠8只,由福建医科大学试验动物中心提供。方法:无菌条件下完整取出大鼠双侧嗅球,剥除嗅球表面的软脑膜及毛细血管网,剪成0.5mm3的小块进行胰蛋白酶消化,过筛后按4.0×108L-1密度种植于包被多聚左旋赖氨酸的培养瓶中进行原代培养。设立4组:①未经纯化的常规对照组。②化学药物组加入5μmol/L阿糖胞苷抑制成纤维细胞分裂。③差速贴壁组采用Nash差速贴壁法纯化嗅鞘细胞。④差速贴壁+化学药物+胰酶限时消化组首先采用Nash差速贴壁法去除大部分成纤维细胞,而后对于少量残留的成纤维细胞加入阿糖胞苷处理,培养6d贴壁细胞大部分融合后,加入1.25g/L胰蛋白酶消化1min,显微镜下见突起回缩、细胞变圆、少量细胞浮起时终止消化。主要观察指标:嗅鞘细胞的形态,NGFRp75免疫细胞荧光染色结果。结果:体外培养的新生大鼠嗅球嗅鞘细胞主要为双极或三极细胞,其突起细长;未经纯化的常规对照组培养7d时视野内成纤维细胞已达60%以上,至14d成纤维细胞完全长满;经过纯化处理的另外3组始终以嗅鞘细胞居多,嗅鞘细胞的形态与原代基本相同。存活的双极和3极嗅鞘细胞呈NGFRp75阳性反应,但化学药物组、差速贴壁组嗅鞘细胞纯度偏低,仅为75%;差速贴壁+化学药物+胰酶限时消化组嗅鞘细胞纯化效率明显增高,达85%以上。结论:实验结果证实了差速贴壁+化学药物+胰酶限时消化法的三合一操作技术,是一种高效率的纯化培养嗅球嗅鞘细胞的方法。

摘要：目的将siRNA技术应用于NgR(Nogo受体),构建出有效的NgR特异性siRNA慢病毒载体。方法按照E1bashir等设计原则和siRNA的要求,设计、合成4对siRNA,并将其与双酶切慢病毒载体pGCSIL-GFP连接,转化,挑取阳性克隆进行PCR鉴定,阳性克隆送测序。结果4对NgR特异性siRNA与双酶切慢病毒载体pGCSIL-GFP连接成功。结论4对NgR特异性siRNA慢病毒载体的构建成功,为进一步合成病毒载体及观察NgR特异性RNA干扰抑制大鼠NgR mRNA表达对脑白质损伤的修复作用奠定了基础。

摘要：近年来有研究发现一些miRNAs在子痫前期患者的胎盘与正常妊娠胎盘组织中的表达存在显著性差异,推测miRNAs可能在胎盘生长发育过程中发挥了一定的作用,其失衡表达可能参与了子痫前期的发病过程。血清或血浆等体液中稳定存在的miRNAs有望作为妊娠性疾病早期预警诊断的理想的、潜在分子标记,而针对miRNAs设计分子靶向药物的探索为揭示子痫前期发病的机理、制定有效的个体化治疗方案具有重要意义。本文即对有关miRNAs及其在子痫前期发病中的最新研究进展作一综述。

摘要：以加强对学生创新意识和创新能力的培养为核心,调整原有开设的实验项目,增加综合性设计性神经生物学实验,优化实验内容、实验方法和实验手段,改革考核制度、评价体系和实验管理制度,建立一种开放式、学生主动参与的教学模式,建立一支具有较高理论综合知识、较好科研素质和较高实验教学水平的新型教师队伍。构建神经生物学实验教学新体系,旨在提高学生综合素质,培养具有创新意识、创新精神和创新能力的高质量人才;在改革实践同时树立创新教学理念,进一步推动教学实践。

摘要：神经生物学是一门对神经系统进行生物学研究的综合性、实验性学科.合理开设综合性设计性神经生物学实验是提高学生综合素质,培养学生创新意识、创新精神和创新能力的重要手段.在过去的神经生物学教学实践中,由于经费、学时、仪器等多因素所限,存在着许多弊端,因此,改革神经生物学实验教学十分必要.?＃