摘要：目的:探讨应用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除PD-1基因对人T细胞增殖及分泌IFN-γ的影响。方法:设计靶向PD-1基因的sgRNA序列,应用T7 RNA聚合酶体外分别合成PD-1-sgRNA和Cas9mRNA。利用核转染技术将PD-1-sgRNA和Cas9 mRNA混合物转入激活的人T淋巴细胞,测序确认基因敲除的效率。应用流式细胞术分析基因敲除后T淋巴细胞表型和PD-1的表达情况,锥虫蓝活细胞计数法检测T细胞增殖活力,ELISA检测T细胞分泌IFN-γ情况。结果:体外成功合成PD-1-sgRNA和Cas9 mRNA。将PD-1-sgRNA和Cas9 m RNA核转染T淋巴细胞,测序证实PD-1基因序列编辑效率为58.3%。CRISPR/Cas9系统成功下调T淋巴细胞表面PD-1分子的表达水平[(9.6±1.85)%vs(16.2±2.05)%,P0.05);但PD-1-sgRNA组的效应T细胞分泌IFN-γ水平显著升高(P<0.01)。结论:CRISPR/Cas9基因编辑系统成功敲除人T淋巴细胞PD-1基因,降低PD-1分子表达可阻断PD-1/PD-L1负性调控从而增强T细胞的免疫活性,且促进效应T细胞分泌IFN-γ。

摘要：目的 了解胸段食管癌淋巴结转移规律，探讨胸段食管癌放疗临床靶区的设计。方法 对首程治疗行颈、胸、腹3个野根治术的胸段食管鳞癌患者621例，标记各部位清扫的淋巴结分别送检，进行临床病理资料分析，了解淋巴结转移规律，为食管癌放疗临床靶区的设计提供理论依据。结果 胸上、中、下段食管癌颈部淋巴结转移率分别为42．9％、27．9％和7．9％，上纵隔的分别为31．2％、24．0％和10．1％，中纵隔的分别为14．3％、29．7％和33．7％，下纵隔的分别为1．3％、4．0％和19．1％，腹部的分别为11．7％、25．1％和55．1％。胸部各段食管癌淋巴结转移部位比较差异有统计学意义（P〈0．05）。病变长度愈长、肿瘤分化越低、肿瘤浸润越深食管癌淋巴结转移率也愈高（P〈0．05）。结论 胸上段食管癌淋巴结转移以颈段食管旁、锁骨上、上中纵隔转移多见，胸中段食管癌淋巴结转移具有明显的上下双向转移和跳跃性转移特点，胸下段食管癌淋巴结转移以腹部、中下纵隔转移多见。建议胸上段食管癌临床靶区的范围上界包括颈段食管旁及锁骨上、下界包括隆突下的淋巴结引流区，胸下段食管癌临床靶区的范围上界至隆突水平、下界包括胃左血管旁的淋巴结引流区，胸中段食管癌临床靶区的范围应根据具体情况设定。

摘要：近年来,人工智能机器学习与深度学习技术有了飞跃的进步,利用临床决策支持系统进行辅助诊断与治疗是智慧医疗发展的必然趋势。临床医务工作者通常在追求模型高准确性的同时忽略模型的可解释性,导致使用者对系统缺乏信任感,阻碍临床决策支持系统的落地应用。笔者团队从可解释人工智能的角度出发,在构建肝病领域的临床决策支持系统上进行初步探索,在追求模型高准确性的同时,采用数据治理技术、内在可解释性模型、对复杂模型的事后可视化、设计人机交互和提供基于临床指南的知识图谱与数据来源等方法赋予系统可解释性。

摘要：目的比较4野和6野断层定野照射（TomoDirect）及断层螺旋照射（TomoHelical）技术在左侧乳腺癌保乳术后患者的放疗计划应用中的剂量学差异。方法作为回顾性研究，本文选取16例已行调强（IMRT）治疗的左侧乳腺癌保乳术后患者，在螺旋断层放疗（Tomotherapy）计划系统上分别进行4野和6野的TomoDirect及TomoHelical3种技术的模拟计划，比较3种技术设计的计划靶区和危及器官的剂量学差异及治疗参数。结果3种技术设计的乳腺癌计划，均能满足临床要求。其中，4野TomoDirect技术对危及器官和正常组织，尤其是脊髓、健侧乳腺最大剂量Dmax，肺的V5，心脏Dmean（F=595．60、129．24、60．44、65．37，P〈0．05）的保护优于TomoHelical技术，但在靶区剂量均匀性和适形度方面，以TomoHelical技术较优（F=2．78、60．93，P〈0．05）。6野TomoDirect技术，在保证较TomoHelical技术低的危及器官限量的条件下，提高了4野TomoDirect技术的靶区均匀性和适形度。此外，TomoDirect技术的机器跳数均优于TomoHelical技术，有效地减少了患者治疗时间（F=24．89、3．75，P〈0．05）。结论对于左侧乳腺癌保乳术后放疗，6野TomoDirect技术设计的计划具有一定优势，与TomoHelical技术相比，6野TomoDirect大大降低了危及器官受量；与4野TomoDirect技术相比，6野TomoDirect靶区均匀性和适形度较优，更适宜于早期乳腺癌患者。

摘要：目的基于重叠体积直方图(OVH)和优质宫颈癌IMRT计划数据库,研究并评估宫颈癌IMRT自动计划的可行性。方法选取200例宫颈癌患者的优质IMRT计划和OVH,建立OVH和优质计划数据库。另选取26例宫颈癌病例作为测试病例,自编程序实现OVH数据至图像转化及图像相似度计算。选取图像相似度最高的数据库病例的计划优化函数,结合Pinnacle3计划系统脚本实现自动计划设计。比较自动计划和手工计划的剂量学参数、计划质量和设计时间。结果与手工计划相比,自动计划的靶区覆盖、适形性、均匀性相当(P>0.05);直肠V40、V45和平均剂量分别下降了6.1%、1.3%和50.7 cGy(P0.05)。自动计划降低了71%的计划设计时间。结论基于OVH和优质宫颈癌IMRT计划数据库所设计的宫颈癌自动调强计划,不仅大大减少了计划设计时间,而且能够在不降低靶区覆盖度、适形性的同时降低正常组织的受照剂量。

摘要：目前鼻咽癌中下颈淋巴引流区预防照射普遍采用单一切线野,中央挡铅3 cm宽度保护颈段脊髓,剂量计算采用点剂量计算方法,通常是按照输出量（MU）250 cGy/次,给予总剂量6250 cGy.由于颈部外轮廓接近椭圆形,第Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组淋巴引流区深度不同,单纯前野照射无法使各淋巴引流区得到均匀足量照射.笔者通过设计不同的放疗方式,分析比较中下颈部各淋巴引流区的剂量分布,期望找到合理的中下颈淋巴引流区的预防照射方法.

摘要：背景:移植后造血干细胞的顺利归巢是单倍相合骨髓移植成功的关键。目的:构建小鼠白血病模型,进行单倍型相合的骨髓移植,动态观察受体小鼠体内移植细胞归巢率及不同时间点的归巢规律。设计、时间及地点:随机对照观察实验,于2005-11/2007-10在福建医科大学实验动物中心清洁级动物实验室进行。材料:供鼠为清洁级近交系C57BL/6小鼠和C57BL/6小鼠与BALB/c小鼠杂交的雄性F1小鼠,受鼠为清洁级近交系雌性BALB/c小鼠,用于构建白血病小鼠模型。方法:将48只造模小鼠随机分为2组,对照组供鼠为C57BL/6小鼠,实验组供鼠为F1小鼠。实验组进行主要组织相容性复合物单倍型相合的同种异基因骨髓移植,对照组进行主要组织相容性复合物完全不相合的骨髓移植。主要观察指标:移植后1,2,3,4d动态观察小鼠外周血、骨髓和脾中有核细胞计数,以流式细胞仪检测可与FITC标记的抗鼠H-2Kb单抗结合的供鼠阳性细胞并计算骨髓和脾归巢率。结果:对照组外周血中供鼠来源的细胞数持续下降,脾和骨髓的归巢率均为先升后降,提示供者来源的骨髓细胞在受鼠体内为先归巢再出巢;实验组外周血中供鼠来源的细胞数先下降,再持续上升,骨髓归巢率为下降后上升,脾归巢率为上升后下降,提示供鼠来源骨髓细胞在骨髓中表现为出巢后再归巢,脾中有延迟,与对照组比较,实验组第4天外周血中供鼠细胞数量及骨髓和脾归巢率均增高(P<0.05)。结论:主要组织相容性复合物单倍体相合的骨髓移植的归巢规律是先出巢再归巢,归巢的细胞数量和归巢率高于主要组织相容性复合物完全不相合骨髓移植。

摘要：目的:探讨胸段食管癌的淋巴结转移规律及其放疗靶区外淋巴结转移的概率。方法:对首程行颈、胸、腹三野淋巴结清除根治术的胸段食管鳞癌患者652例,进行临床病理资料分析。分析各段食管癌放疗靶区外淋巴结转移的概率。结果:胸上、中、下段食管癌淋巴结转移率颈部分别为43.2%(35/81)、27.2%(129/474)和7.2%(7/97),上纵隔分别为30.9%(25/81)、23.4%(111/474)和9.3%(9/97),中纵隔分别为13.6%(11/81)、29.1%(138/474)和30.9%(30/97),下纵隔分别为1.2%(1/81)、3.8%(18/474)和17.5%(17/97);腹部分别为11.1%(9/81)、24.5%(116/474)和52.6%(51/97)。胸上、中、下段食管癌总放疗靶区外淋巴结转移率分别为27.2%(22/81)、40.7%(193/474)和40.2%(39/97)。食管癌放疗靶区外淋巴结转移率与病变长度(χ2=7.093,P=0.029)、T分期(χ2=17.330,P=0.001)呈正相关;与肿瘤分化程度呈负相关,χ2=14.969,P=0.001;与病变部位无相关性,χ2=5.421,P=0.066。结论:胸段食管鳞癌淋巴结转移具有上下双向转移和跳跃性转移特点。以病变上下两端各扩大5cm为放疗靶区,靶区外有较高的淋巴结转移率,值得今后设计食管癌放疗靶区的注意。

摘要：目的:构建针对人γ-synuclein基因的shRNA真核表达载体,观察γ-synuclein基因对人结肠癌细胞系体外生物学行为的影响。方法:根据人γ-synuclein序列设计并构建γ-synuclein基因的shRNA真核表达载体,以脂质体转染的方法将γ-synuclein干扰质粒转染至人结肠癌细胞株HCT116,经G418筛选出稳定转染的细胞株。应用CCK8法检测γ-synuclein干扰对HCT116细胞增殖的影响,软琼脂克隆形成实验检测细胞体外克隆形成能力,细胞划痕实验检测细胞体外迁移能力,Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力。结果:经测序证明γ-synuclein的shRNA序列已成功插入pGCsi-U6/neo/GFP质粒中,构建的干扰质粒能够显著抑制γ-synuclein mRNA及蛋白的表达。γ-synuclein受抑制后,HCT116细胞增殖数目从48h后开始减少,持续72h,与空质粒组及未转染组相比,差异均有统计学意义,P<0.05。siRNA组细胞克隆形成率为(9.6±2.9)%,显著低于未转染组的(29.4±4.5)%和空质粒组的(32.1±5.8)%,差异均具有统计学意义,P<0.05。在细胞划痕实验中,γ-synuclein被抑制后细胞划痕损伤愈合的速度明显减慢。在侵袭实验中,穿过Matrigel胶及Transwell小室膜的siRNA组侵袭细胞数为20.1±5.26,显著低于未转染组的100和空质粒组的105.4±12.5,差异均有统计学意义,P<0.05。结论:干扰γ-synuclein的表达可显著抑制结肠癌细胞体外增殖、克隆形成和迁移侵袭能力。

摘要：目的分析胸段食管鳞癌根治术后腹腔淋巴结复发区域，探讨术后辅助放疗靶区的设计。方法对2005--2013年间我院收治的胸段食管鳞癌R。根治术后经影像学检查证实术后有腹腔淋巴结转移患者，按第7版AJCC胃癌分组标准对腹腔淋巴结转移具体部位分组并进行回顾分析。组间差异行爿。检验。结果1593例中术后腹腔淋巴结转移148例，总转移率为9．3％，其中食管胸上、中、下段腹腔淋巴结转移率分别为2．3％、7．8％、26．6％（P=0．000），术后病理为T1＋T2、T3＋T4期的分别为8．7％、9．5％（P=0．601），术后病理淋巴结转移为0—2、≥3个的分别为4．8％、20．1％（P=0．000）。腹腔淋巴结转移率从高到低依次为腹主动脉旁的16a2、16a1、腹腔干、胰头后及肝总动脉转移率分别为64．9％、41．2％、37．8％、32．4％、20．9％，其总转移率为91．9％。结论食管癌根治术后腹腔淋巴结转移主要部位是腹主动脉旁16a2和16a1、腹腔干、胰头后以及肝总动脉淋巴结引流区，是术后辅助放疗的腹腔靶区。