摘要：目的建立基于微流控芯片式数字PCR(cdPCR)的乙型肝炎病毒(HBV)RNA检测方法,并评估其在慢性HBV感染者中的应用。方法选取福建医科大学附属第一医院的135例慢性HBV感染者,根据HBV DNA含量分为HBV DNA>100 IU/ml组(85例)和HBV DNA≤100 IU/ml组(50例),同时选取健康体检者及其他病毒感染者作为对照组(15例)。设计HBV前C/C区特异性引物和探针,优化微流控cdPCR检测方法,并评估其线性范围、检出限、特异性及精密度。使用自建方法和2种市售试剂盒分别检测患者血清HBV RNA含量。采用Pearson相关性分析对HBV RNA与其他HBV标志物的关系进行评估。结果优化后自建微流控cdPCR方法的变性时间为10 s,退火/延伸温度为62℃,引物和探针浓度分别为0.3和0.2μmol/L。其线性范围为10^(3)~10^(7)拷贝/ml,检出限为10^(2)拷贝/ml,10^(4)和10^(7)拷贝/ml质粒标准品的批内变异系数(CV)分别为1.06%和0.82%,批间CV分别为0.75%和0.44%。特异性实验显示,其他病原体感染者和健康体检者的血清中均未检出阳性信号。自建微流控cdPCR方法在HBV DNA>100 IU/ml组的检出率为81.18%(69/85),高于市售试剂盒B的64.71%(55/85)(P0.05)。HBV RNA与HBV DNA、乙型肝炎表面抗原及乙型肝炎e抗原均呈正相关(r=0.67、0.53、0.44,P均<0.001)。结论成功建立了微流控cdPCR定量检测HBV RNA的方法,该方法灵敏、特异,且在低浓度病毒载量样本中也具有良好的检测能力。