摘要：本研究旨在建立一种妊娠早期、简便、快速且无创伤性的检测胎儿常见地中海贫血突变的导流杂交技术,用于地中海贫血的产前诊断。采用PCR技术与低密度基因芯片导流杂交技术相结合,设计6组PCR引物单管多重PCR体系及29种DNA探针,快速检测60例妊娠5-17周贫血孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血及β-地中海贫血。结果表明:60例贫血孕妇血浆的游离胎儿DNA中,检出缺失型α-地中海贫血胎儿4例,β-地中海贫血胎儿3例,α及β混合型-地中海贫血胎儿1例。结论:采用本检测方法能快速准确地检测出3种常见的缺失型α-地中海贫血及17种常见β-地中海贫血的突变。

摘要：目的构建DNA电化学传感器用于快速检测结核杆菌的新方法。方法根据互补序列一段设计捕获探针，另一段设计信号探针，两段探针与互补链结合构建“三明治”电化学传感模式，结合酶的催化作用放大电化学信号，实现对靶序列的高灵敏检测。结果在优化条件下目标链浓度（10nmol／L）检测结果的相对标准偏差（RSD）=5.0％（n=5）；目标DNA在浓度为50-200pmol／L范围内与电流值呈线性相关，回归方程：电流（I）=720．4＋93．6x浓度（c），r=0．9982，检出限为1．6×10^12mol／L。结论此方法构建的传感器具有较高的检测灵敏度与良好的特异性。

摘要：目的建立实时荧光定量PCR法检测mi R-499并探讨其在诊断急性心肌梗死中的应用价值。方法设计mi R-499的颈环结构反转录引物和PCR扩增引物,通过Taq Man探针时荧光定量PCR法检测急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)、不稳定心绞痛(unstableanginapectoris,UA)和健康对照各40例血清标本中mi R-499的拷贝量,分析mi R-499的对诊断急性心肌梗死的作用。结果实验的扩增效率为0.94,相关系数为0.992915。AMI组mi R-499的表达水平明显升高,UA组及健康对照组mi R-499的表达水平未见明显升高。结论成功建立了Taq Man探针荧光定量PCR法检测人血清中mi R-499含量的平台,mi R-499有可能成为一种新型且敏感的诊断急性心肌梗死的生物标志物。

摘要：目的设计特异性扩增引物,建立荧光短片段多重PCR技术检测SMN1基因拷贝数变异的方法,验证方法的检测性能并初步应用于基因拷贝数检测。方法选取107例来自神经系统疾病生物样本库的人外周血DNA样品(包括SMN1基因0拷贝30例、1拷贝47例、2拷贝30例),设计5’端带有FAM荧光基团的SMN1基因7号外显子引物以及三对内参基因引物,利用荧光短片段多重PCR技术,使用基因分析仪片段分析多重PCR的产物,并与相应的MLPA检测结果进行比较。结果特异性扩增SMN1基因7号外显子及内参基因的引物可实现目的片段的扩增,通过计算可得到0拷贝、1拷贝、2拷贝的样本结果。对107例DNA样本的SMN1基因拷贝数荧光短片段多重PCR的检测结果进行分析,实验结果均与MLPA检测结果相一致。结论使用荧光标记多重PCR反应检测SMN1拷贝数可重复性好,精确度高,与MLPA得到的结果高度一致,具有便捷、准确、成本低的优势,可满足临床高准确性的检测要求,可用于SMA新生儿携带者的大规模筛查。

摘要：目的:建立一种快速检测结核分枝杆菌复合群(MTBC)和非结核分枝杆菌(NTM)的分子交叉引物恒温扩增技术(CPA)检测系统。方法:针对分枝杆菌高度保守的16S rRNA基因序列设计6套CPA引物和3个探针。以含16S rRNA基因序列质粒(浓度为1000拷贝/μl)为阳性模板,筛选确立最佳引物探针组合,并对建立的最佳反应体系进行敏感度、特异度和包容性分析。收集福建省龙岩市第二医院2022年2月8日至2023年3月14日具有肺结核症状或体征的125例疑似肺结核患者的标本,采用分枝杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)和建立的CPA法对收集到的标本进行检测,并对两种方法间的检测结果一致性进行统计分析,采用Kappa值评估。Kappa值≥0.75,说明一致性好。结果:筛选出MTBC/NTM-16S-6引物和MTBC/NTM-16S-LR-FAM-3为分枝杆菌检测系统最佳引物探针组合,检测体系最低检测限为100拷贝/μl,检测时间为40 min,能检出MTBC和临床常见NTM,且与常见呼吸道细菌无交叉反应。与实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测方法相比,阳性预测值为95.65%(66/69),阴性预测值为85.71%(48/56),符合率为91.20%(114/125),Kappa值为0.82。结论:成功建立了一种基于CPA技术的快速检测MTBC和NTM的检测系统,能够为基层医院结核病疫情防控提供一种新的检测方法。