摘要：【目的】建立兔源支气管败血波氏杆菌(Bb)的快速检测方法,用于兔波氏杆菌病的诊断。【方法】以Bb的fimX基因为靶基因,设计特异性引物并构建质粒标准品。在此基础上建立检测兔源Bb的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评价,并将该方法初步应用于临床样品的检测。【结果】荧光定量PCR方法仅对兔源Bb的检测结果呈阳性,对其他常见兔源病原菌的检测结果均呈阴性;对质粒标准品的最低检测限为13.8拷贝·μL^(-1),敏感性是普通PCR方法的10倍;批内重复性试验的变异系数小于2%,批间重复性试验的变异系数小于3%;对68份临床样品进行检测,阳性检出率为39.71%,比普通PCR方法的高2.95%。【结论】建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,且对临床样品的阳性检出率比普通PCR方法高,为兔源Bb的快速检测和防控提供了技术支持。

摘要：本文从提升实验室管理水平的必要性、畜牧业实验室管理系统的设计路径、实验室管理系统的部署等方面探讨畜牧业实验室管理系统的建设及运行管理要点。

摘要：本文主要目的是探讨不同来源膳食纤维在怀孕及哺乳期间不同添加比例对母猪繁殖性能产生的影响,并以此作为基础来指导膳食纤维在母猪养殖过程中的运用。本研究采用单一因素试验的设计方法,选择48头健康且年龄和重量相近的长大二元母猪,将其分成3个试验组:A组(对照组,妊娠期配合饲料添加23%麦麸、哺乳期配合饲料添加5%麦麸)、B组(妊娠期配合饲料添加8%膳食纤维得易舒F10、哺乳期添加2%膳食纤维得易舒F10)和C组(妊娠期添加10%膳食纤维得易舒F10、哺乳期添加4%膳食纤维得易舒F10)。每组16个重复,每头母猪为1个重复。试验自母猪受精起至断乳后10 d内完成,持续152 d。试验结果表明,与对照组相比,B组和C组可提高妊娠母猪总产仔数、活产仔数和合格仔数,并且随着膳食纤维添加量的提高有上升的趋势;B组和C组显著降低妊娠母猪产程和粪便评分(P<0.05);C组显著提高仔猪初生重;B组和C组显著提高哺乳母猪采食量和仔猪断乳重、日增重(P<0.05),显著缩短发情间隔(P<0.05)。结论:在妊娠母猪和哺乳母猪日粮中添加膳食纤维得易舒F10,能够提高妊娠母猪总产仔数、合格仔数和仔猪初生重,缩短产程,改善便秘问题;提高哺乳母猪采食量和仔猪断乳重,缩短发情间隔。

摘要：本试验旨在研究饲粮中添加过瘤胃赖氨酸(RPLys)对福清山羊生长性能、养分表观消化率和氮代谢的影响。选择体况良好、体重[(12.06±1.65)kg]相近的4月龄福清山羊羯羊30只,采用单因素试验设计,随机分为5组,每组6只。对照组饲喂基础饲粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组在基础饲粮中每只羊添加2.5、5.0、7.5和10.0 g/d RPLys。预试期15 d,正试期60 d。结果表明:1)饲粮中添加RPLys对福清山羊干物质采食量(DMI)、总能采食量、初始体重、终末体重、总增重和平均日增重(ADG)均无显著影响(P>0.05),试验I组的DMI最高,试验Ⅱ组的总增重和ADG最高。2)饲粮中添加RPLys对福清山羊干物质、有机物、总能、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的表观消化率均无显著影响(P>0.05)。3)对照组的进食氮显著低于各试验组(P0.05)。由此可见,在本试验条件下,饲粮中添加RPLys对福清山羊生长性能无显著影响,饲粮中添加2.5~7.5 g/d RPLys显著提高了福清山羊的沉积氮。

摘要：为了提高青贮笋壳在肉羊中的利用效率,本研究测定分析了青贮笋壳的常规营养成分,并开展了其在湖羊、努比亚山羊和福清山羊3个肉羊品种上的体内消化代谢试验。试验采用两因素3×4随机区组设计,3个品种肉羊(湖羊、努比亚山羊和福清山羊)分别选取体况良好的7月龄左右生长期羯羊12只,体重分别为(22.18±1.13)kg、(30.32±1.17)kg和(17.09±0.91)kg;将每个品种的12只肉羊随机分为4个处理,分别饲喂基础饲粮(AC)以及以20%(A20)、40%(A40)或60%(A60)青贮笋壳替代基础饲粮的试验饲粮,每个处理3个重复,每个重复1只羊。全收粪、尿法测定饲粮中干物质(DM)、有机物(OM)、粗蛋白质(CP)、总能(GE)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的全肠道表观消化率,分析不同青贮笋壳替代比例对3个品种肉羊氮代谢和能量代谢的影响,并根据替代法原理计算不同青贮笋壳替代比例饲粮中青贮笋壳相应营养物质的全肠道表观消化率和有效能值。结果表明:1)青贮笋壳(DM基础)的GE、CP、粗脂肪(EE)、NDF、ADF、酸性洗涤木质素(ADL)、粗灰分(Ash)、钙(Ca)和磷(P)含量分别为16.99 MJ/kg、9.89%、11.00 g/kg、64.07%、36.01%、5.44%、6.10%、12.30 mg/kg和0.14%,在不同品种肉羊中的消化能(DE)和代谢能(ME)估测值分别为6.01~9.33 MJ/kg和4.93~7.65 MJ/kg。2)肉羊品种对饲粮中DM、OM、GE的全肠道表观消化率以及粪氮、沉积氮、氮沉积率和氮生物学价值具有极显著的影响(P0.05)。综上所述,青贮笋壳具有CP含量较高、NDF含量适中、ADF和ADL含量低的特点,是肉羊营养价值较高的植物性非常规饲料资源;不同肉羊品种对青贮笋壳的利用率存在差异,在不同品种肉羊生产中利用时,需要优化饲粮配比,提高利用效率。

摘要：为了研究莲蓬壳在肉羊中的饲料化利用,本试验测定分析了莲蓬壳的常规营养成分含量,并开展了莲蓬壳在不同品种肉羊体内的消化代谢试验。体内消化代谢试验采用两因素3×4随机区组设计,两因素分别为肉羊品种(湖羊、努比亚山羊和福清山羊)和莲蓬壳替代基础饲粮比例(0、20%、40%和60%)。每个肉羊品种选择体况良好、体重相近的7~8月龄羯羊12只,随机分为4组(每组3只,每只试验羊单独圈养于自制消化代谢笼),分别饲喂基础饲粮(精粗比3∶7)和3种试验饲粮(以20%、40%和60%莲蓬壳替代基础饲粮),采用全收粪尿法测定饲粮中各营养物质表观消化率,并计算3种试验饲粮中莲蓬壳的营养物质表观消化率和有效能值。结果显示:1)莲蓬壳的总能(GE)、消化能(DE)、代谢能(ME)以及粗蛋白质(CP)、粗脂肪(EE)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、木质素(ADL)、粗灰分(Ash)、钙(Ca)和磷(P)[干物质(DM)基础]含量分别为16.95 MJ/kg、7.86 MJ/kg、6.45 MJ/kg、8.00%、10.00 g/kg、73.25%、53.00%、24.72%、6.20%、0.41%和0.15%。2)肉羊品种对饲粮中DM、GE和ADF的表观消化率有极显著影响(P0.05)。3)除莲蓬壳替代比例对莲蓬壳中ADF的表观消化率具有极显著影响(P0.05)。4)肉羊品种对粪氮、沉积氮、氮沉积率和氮生物学价值具有极显著影响(P<0.01),努比亚山羊的沉积氮均显著高于湖羊和福清山羊(P<0.05);莲蓬壳替代比例对粪氮、沉积氮和氮沉积率存在极显著影响(P<0.01),对尿氮和氮生物学价值存在显著影响(P<0.05),以20%替代组的氮生物学价值最高,其次为40%替代组,两者均显著高于60%替代组(P<0.05);两因素的交互作用对尿氮存在显著影响(P<0.05)。5)莲蓬壳的粗饲料分级指数(GI)值为0.69,属于第5级。基于本研究结果,莲蓬壳可以作为肉羊粗饲料进行利用,但其ADL含量较高,粗饲料GI值偏低,在肉羊饲粮中配比不宜超过40%;肉羊对莲蓬壳中营养物质的消化利用率受肉羊品种及其替代饲粮比例的影响较小;在饲喂相同营养水平饲粮条件下,努比亚山羊对饲粮中各营养物质的消化利用率优于湖羊和福清山羊。

摘要：为同时快速检测绵羊肺炎支原体(Mo)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)和山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp),本研究根据Mo的P80基因,Mmc的MLC_1760和Mccp的arcA基因序列,设计合成了3对特异性引物,建立了同时检测Mo、Mmc和Mccp的多重PCR方法。该方法可以同时扩增出Mo、Mmc和Mccp的特异性片段,而对大肠杆菌、巴氏杆菌、羊传染性脓疱病毒等常见羊病病原无交叉反应,对Mo、Mmc和Mccp的最低检出量分别为3.62×10~4拷贝/μL、4.03×10~5拷贝/μL和6.78×10~5拷贝/μL。应用该方法对75份临床样品进行检测,结果与单一PCR检测结果一致。对32份临床样品同时用该多重PCR方法与分离鉴定法进行检测,结果显示,两种方法对Mo、Mmc、Mccp的检测符合率分别为87.5%、100%、100%。本研究建立的多重PCR方法特异性强、敏感性较高,适用于Mo、Mmc和Mccp临床快速检测及流行病学调查。

摘要：【目的】建立一种可快速检测副猪嗜血杆菌的环介导等温扩增(LAMP)方法。【方法】根据GenBank中副猪嗜血杆菌肽聚糖相关脂蛋白(PalA)基因序列,在其保守区域设计外引物、内引物和环引物用于LAMP检测。优化副猪嗜血杆菌LAMP检测的反应体系,在反应产物中加入SYBR GreenⅠ,对检测结果进行肉眼判定,建立副猪嗜血杆菌可视化LAMP检测方法,评价该检测方法的特异性、敏感性。用建立的副猪嗜血杆菌可视化LAMP检测方法对临床分离的8株不同血清型副猪嗜血杆菌进行检测。从疑似患副猪嗜血杆菌病的猪体内采集10种体液,用所建立的可视化LAMP检测方法进行检测。【结果】建立了副猪嗜血杆菌可视化LAMP检测方法,该法在55℃水浴1h即可对副猪嗜血杆菌核酸进行高效扩增,反应结束后加入SYBR GreenⅠ即可通过肉眼观察对结果进行判断。该方法具有很强的特异性,其对DNA核酸的最低检测限为40fg,是常规PCR检测最低限的100倍,显示出较高的敏感性;用建立的LAMP方法对8株不同血清型副猪嗜血杆菌进行检测,结果均为阳性。用建立的LAMP方法对10种体液进行检测,结果鼻液、气管液、胸腔渗出物、心脏血、脑膜液、腹腔液和关节囊液呈阳性,唾液、心包液和尿液呈阴性。【结论】建立了一种可对副猪嗜血杆菌进行快速检测并可凭肉眼判定结果的可视化LAMP方法,该法操作简便、反应快速、敏感性强、特异性高,适合在兽医基层进行推广应用。

摘要：为深入研究副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)肽聚糖相关脂蛋白(Peptidoglycan-associated lipo-protein,palA)的生物学特性,设计了一对特异性引物,应用PCR方法来扩增Hps palA的全基因序列,进行克隆和测序。采用生物信息学方法,对Hps的palA基因核苷酸及其编码氨基酸序列进行比对,选取其中的血清学5型分离株,对其PalA蛋白的分子结构、理化性质及结构功能域、蛋白质二级结构等重要参数进行了预测和分析,并对PalA蛋白的三级结构进行了同源建模。结果显示,PCR扩增出462bp的目的片段;测序结果显示出不同血清型Hps之间palA基因核苷酸序列相似性有一定的差异,而所对应的氨基酸序列却差异很小;密码子偏爱性分析表明palA基因主要偏好GCA和AAA;PalA蛋白的理论等电点为6.28,偏弱酸性;PalA蛋白的二级结构以α螺旋、不规则卷曲和延伸链为主要构件;Hps的PalA蛋白的氨基酸序列与流感嗜血杆菌Pal蛋白的相似性为71.97%,以Pal蛋白结构为模板成功构建了Hps的PalA蛋白三维结构分子模型,该PalA蛋白三维结构与Pal蛋白相似,也含有肽聚糖结合口袋区,主要由第80位的酪氨酸(Tyr)、第39位的苯丙氨酸(Phe)和第84位的亮氨酸(Leu)组成。Hps的PalA蛋白的成功建模为PalA蛋白功能的深入研究提供了参考依据。

摘要：【目的】建立一种快速简便检测绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)的方法。【方法】根据Mo膜蛋白P80基因序列,利用Oligo 7软件设计并筛选出特异性扩增引物,通过条件优化建立检测Mo的RPA方法。【结果】该方法可特异性扩增Mo,对其他羊常见病原无特异性扩增,对Mo核酸的检测灵敏度为70fg·μL^-1,与常规PCR敏感性一致。批内和批间结果显示Mo阳性样品均能扩增条带,而阴性对照均无扩增,表明重复性好。对186份临床样品应用建立的RPA方法和常规PCR方法同时进行检测,并对其中40份肺脏样品进行支原体的分离鉴定,结果显示分离鉴定出的13份Mo阳性样品及常规PCR法检测出的95份阳性样品经RPA检测,结果均为阳性。【结论】建立的Mo RPA方法特异性强、重复性好,可作为Mo的快速检测和流行病学调查的一项候选技术。