摘要：目的探讨pH值对人真皮微血管内皮细胞(HDMEC)成管的影响并研究其分子机制,为促进创面愈合过程中血管新生的研究提供理论依据。方法采用实验研究方法。取第4、5代对数生长期HDMEC进行实验,制备pH值分别为6.4、6.6、6.8、7.0、7.2、7.4、7.6、7.8的培养液,用其适应性培养细胞(培养方式下同)24 h后进行后续实验。另培养36 h,采用流式细胞仪测定胞质pH值的相对荧光值并对胞质pH值的相对荧光值与培养液pH值进行相关分析。另培养1.5、2.5、3.5、4.5、5.5 d,采用细胞计数试剂盒8检测细胞增殖活性。采用Oris^(TM)细胞迁移检测试剂盒检测去掉播种塞后0(即刻)、24、48 h细胞迁移剩余面积。进行三维基质胶细胞成管实验,检测另培养48 h细胞成管的管腔直径。另培养48 h,采用蛋白质印迹法检测细胞中蛋白激酶B(Akt)磷酸化位点473、308的蛋白表达。样本数均为3。对数据行Pearson相关性分析、单因素方差分析、析因设计方差分析、重复测量方差分析与Bonferroni校正。结果另培养36 h,与pH值6.4培养液相比,pH值6.8~7.8培养液培养细胞胞质pH值的相对荧光值均显著升高(P0.05)。另培养2.5 d,与pH值7.6培养液相比,pH值6.4~6.8培养液培养细胞增殖活性均显著下降(P0.05)。去掉播种塞后24 h,与pH值6.4培养液相比,pH值6.6~7.8培养液培养细胞迁移剩余面积均显著缩小(P<0.05);与pH值6.6、6.8培养液相比,pH值7.0~7.6培养液培养细胞迁移剩余面积均显著缩小(P<0.05)。去掉播种塞后48 h,与pH值6.4、6.6培养液相比,pH值7.0~7.8培养液培养细胞迁移剩余面积均显著缩小(P<0.05);pH值7.2、7.4培养液培养细胞迁移剩余面积均显著小于pH值6.8、7.0、7.8培养液(P<0.05),均显著大于pH值7.6培养液(P<0.05);pH值7.6培养液培养细胞迁移剩余面积显著小于pH值6.8、7.8培养液(P值均<0.05)。另培养48 h,pH值7.0、7.2、7.4、7.6、7.8培养液培养细胞成管的管腔直径分别为(5.0±0.5)、(7.6±0.9)、(8.5±0.7)、(11.0±0.8)、(5.3±0.8)μm,均显著长于pH值6.4培养液的(2.8±0.8)μm(P<0.05);pH值6.6[(4.2±0.3)μm]、6.8[(4.5±0.6)μm]、7.0、7.8培养液培养细胞成管的管腔直径均显著短于pH值7.6培养液(P<0.05)。另培养48 h,与pH值6.4、6.6培养液相比,pH值6.8~7.8培养液培养细胞中Akt磷酸化位点473、308蛋白表达均明显升高(P<0.05),且pH值6.6培养液培养细胞中Akt磷酸化位点308蛋白表达明显高于pH值6.4培养液(P<0.05);与pH值6.8培养液相比,pH值7.0、7.4~7.8培养液培养细胞中Akt磷酸化位点473蛋白表达均明显升高(P<0.05);与pH值7.6培养液相比,