摘要：目的　构建副溶血弧菌不耐热性溶血毒素 (thermolabilehemolysin ,TLH)tlh基因重组质粒。方法　根据已知GenBank中的tlh基因序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从副溶血弧菌基因组DNA中扩增编码TLH的基因片段 ,克隆至pET32a+ 质粒 ,转化大肠杆菌DH5感受态细胞 ,经酶切及PCR鉴定 ,而后进行测序。结果　tlh基因体外扩增产物大小约1 30 0bp ,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子 ,测序结果与已知序列基本吻合。 结论　在国内首次克隆了副溶血弧菌tlh基因 。

摘要：目的　构建含副溶血弧菌 (vibrioparahaemolyticus,VP)tlh基因克隆载体和表达载体 ,检测并鉴定表达载体在转化菌的表达 ,为制备单抗、诊断试剂及进一步深入研究不耐热性溶血毒素 (TLH)的功能奠定基础。方法　根据Gen bank的tlh全基因序列 ,设计一对附加EcorⅤ和HindⅢ两个限制性内切酶酶切位点的特异性引物 ,以VP基因组DNA为模板 ,用高保真Taq酶扩增出tlh基因。连接pGEM -T载体构建克隆载体 ,测序鉴定后 ,再用EcorⅤ和HindⅢ酶切回收目的基因并克隆至表达载体 pET32a+,采用PCR和双酶切鉴定筛选阳性质粒 ,转化DE3 ,IPTG诱导 ,用SDS -PAGE检测tlh的表达。结果　扩增的目的基因与GenBank的tlh比较具有 99%的同源性 ,重组表达载体转化DE3 ,能表达融合蛋白。结论　本研究成功扩增出完整的tlh基因 ,构建了克隆载体和表达载体 ,获得融合表达的目的蛋白。

摘要：目的设计能同时检测人SARS冠状病毒、尼巴病毒、亨德拉病毒、狂犬病毒、登革病毒、乙脑病毒和西尼罗病毒的基因芯片探针,制备芯片用于对广州野生动物携带这7种病毒的流行病学筛查。方法利用生物学软件DNAStar对7种病毒所有序列进行比对,获得每种病毒有意义的特异序列,以此作为设计oligo探针的备选序列,利用生物软件Array Designer 2.0设计特异性好、长度均一、Tm值相近的探针。结果每种病毒设计优化选择出10条oligo探针,用来制备基因检测芯片。结论利用GenBank数据库和生物学软件Array Designer 2.0设计病毒基因芯片检测探针,是一种简便、快速、有效的方法。

摘要：目的　构建金黄色葡萄球菌肠素D(SED)毒力蛋白基因重组表达质粒。方法　根据SED已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从金黄色葡萄球菌毒力质粒上扩增出基因片段 ,克隆到原核表达质粒PET3 2中 ,转化大肠埃希菌JM 10 9感受态细胞 ,经酶切和PCR鉴定 ,然后进行测序。结果　PCR扩增产物大小为 3 17bp ;重组质粒经双酶切和PCR鉴定表明已正确重组 ;测序结果与己知序列基本吻合。结论　国内首次克隆了金黄色葡萄球菌肠毒素D产毒基因 。

摘要：目的　采用基因工程技术制备金黄色葡萄球菌B型肠毒素 (SEB)。方法　根据SEB已知序列 ,设计一对引物 ,用PCR方法从金黄色葡萄球菌染色体DNA上扩增出基因片段 ,克隆到原核表达质粒 pET32a上 ,转化大肠埃希菌JM10 9感受态细胞 ,经酶切和PCR鉴定 ,然后进行测序。结果　PCR扩增产物大小为 74 0bp ,重组质粒经双酶切PCR鉴定表明已正确重组 ,测序结果与已知序列基本吻合。结论　成功地克隆了金黄色葡萄球菌B型肠毒素 ,为下一步研究发病机制奠定基础。

摘要：目的　构建福氏志贺菌毒力蛋白基因 (ipaC)重组表达质粒。方法　根据ipaC已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从福氏志贺菌毒力质粒上扩增出ipaC基因片段 ,克隆到原核表达质粒pET3 2a中 ,转化大肠埃希菌TG1感受态细胞 ,经酶切和PCR鉴定 ,然后进行测序。结果　ipaC基因体外扩增产物大小约为 1112bp。重组质粒经双酶切和PCR鉴定表明为正确重组子 ,测序结果与已知序列基本吻合。结论　在国内首次克隆了福氏志贺菌ipaC基因 。

摘要：针对霍乱弧菌肠毒素Ａ亚单位（ｃｔｘＡ）基因设计两对引物，建立套式ＰＣＲ，可特异扩增霍乱弧菌Ｏ１群古典型、埃尔托型和Ｏ１３９群；针对霍乱弧菌毒力协调菌毛Ａ亚单位（ＴｃｐＡ）基因设计两对引物，外引物可特异扩增霍乱弧菌Ｏ１群古典型、埃尔托型和Ｏ１３９群，内引物只能特异扩增霍乱弧菌Ｏ１群埃尔托型和Ｏ１３９群；针对Ｏ１３９群特异基因设计两对引物，建立套式ＰＣＲ，可特异扩增Ｏ１３９群。先利用针对ｃｔｘＡ基因设计的套式ＰＣＲ进行初筛，再进一步用另外两组套式ＰＣＲ，可检测及区分霍乱弧菌Ｏ１群古典型、埃尔托型和Ｏ１３９群。对４８株ＥＶＣ，２株ＣＶＣ，６株Ｏ１３９群和３３株非Ｏ１非Ｏ１３９群进行检测，扩增结果与设计均一致。套式ＰＣＲ检测的敏感性可达到１～１０ＣＦＵ。本文建立的方法简单、快速、特异和敏感，有较大的应用价值。

摘要：目的　构建小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6重组自杀质粒 ,并应用其构建EAggEC上该基因的缺失株。方法　根据已知小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6基因序列 ,设计PCR引物 ,扩增并克隆了irp6结构基因 ,在体外进行精确突变后 ,插入氯霉素抗性基因。再将含氯霉素的irp6缺失基因亚克隆入自杀质粒 pKNG1 0 1中 ,构建成irp6基因重组自杀质粒 pKH6 ,并以肠粘附聚集性大肠杆菌EAggEC 1 7 2为出发菌株 ,通过体内同源重组 ,置换其irp6基因。结果　经接合转移和同源重组 ,利用蔗糖抗性筛选 ,pKH6上的同源序列有效的置换了EAggEC 1 7 2的irp6基因。结论　以小肠结肠炎耶尔森菌为靶构建的irp6基因重组自杀质粒成功的缺失了EAggEC 1 7 2的irp6基因 ,获得了携带耶尔森菌强毒力岛的EAggEC 1 7 2irp6基因缺失株EAG6 。

摘要：本文详细介绍了在ＶＢ环境下使用基于消息的ＭＣＩ指令进行多媒体软件设计的方法，并给出程序实例。

摘要：目的　以克隆小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛可变区首尾区域的双独立片段为例 ,探讨克隆入同一载体的基因数多于一个时可采取的构建策略。方法　在一个基因A正义引物与另一基因B负义引物的 5′端分别设计与克隆载体相匹配的酶切位点 ,在B基因正义引物与A基因负义引物的 5′端设计相同的酶切位点。分别进行PCR扩增 ,再通过引物的 5′端相同的酶切位点进行两PCR产物的酶切与连接 ,以连接产物为模板 ,应用A基因正义引物和B基因负义引物进行PCR扩增 ,将此次PCR产物经常规方法克隆入载体。