摘要：目的　探讨PCR结合寡核苷酸阵列杂交快速诊断常见新生儿感染病原细菌方法。方法　通过对 4 0多种常见病原菌的 16SrDNA序列比较分析 ,在中间找到一段两端高度保守中间相对变异的序列。依据其保守序列设计一对通用引物 ,用于扩增细菌 16SrDNA目的基因。同时依据相对变异区域的序列设计常见的 8种病原细菌的探针 ,阵列于带正电的尼龙膜上 ,与通用引物的PCR产物杂交 ,在一个反应体系中 1次可检测出标本中可能存在的常见致病菌。结果　设计的通用引物能有效扩增出常见的细菌目的序列。实验结果表明寡核苷酸阵列均能特异地与其检测细菌的通用引物PCR产物杂交 ,而不与其它所试细菌通用引物PCR产物杂交 ,说明探针具有很强的特异性。进一步采用寡核苷酸阵列对临床分离的菌株进行鉴定 ,以细菌自动鉴定仪做对比 ,结果表明寡核苷酸阵列能检出常见的 8种病原菌。

摘要：目的建立超临界CO2流体提纯猪肺表面活性物质的方法。方法通过四因素———四水平正交试验设计对超临界CO2流体提纯猪肺表面活性物质萃取过程中的主要影响因素进行考察,以优化萃取工艺。结果在超临界流体萃取中最佳萃取条件:压力30 MPa,温度50 ℃,动态萃取时间4 h,无水乙醇为夹带剂,剂量0.2 ml。结论与传统方法相比,超临界流体萃取大大减少了有机溶剂用量;建立了一种提纯猪肺表面活性物质的简便、高效、可行的新方法。

摘要：背景:由于神经干细胞分化的多向性和不确定性给临床应用造成巨大困难,因此,探讨神经干细胞增殖分化条件已成为解决这一问题的关键。目的:观察表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子对人胎脑神经干细胞增殖分化的影响。设计:以培养的人胚神经干细胞为观察对象,随机对照实验。单位:解放军第一军医大学珠江医院儿科。材料:实验于2004-01/05在全军儿科中心实验室进行。随机在广州市某三级甲等医院产科选取自愿水囊引产的16周胎儿2例(胎儿父母签署同意书),取其脑室下区组织分别在无血清培养基和血清培养基进行细胞培养。方法:采用含有表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子以及表皮生长因子+碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养基对人胎脑室下区组织进行原代细胞培养;两种生长因子的浓度均为20μg/L,采用血清培养基对原代培养的细胞克隆球进行分化实验;并采用免疫组化技术对分化细胞进行检测。主要观察指标:各组克隆球数量及其分化为神经元和星形胶质细胞的变化。结果:①碱性成纤维细胞生长因子组、表皮生长因子+碱性成纤维细胞生长因子组形成的原代克隆球数量无显著差异犤(150.3±14.9),(173.6±26.4)个/孔,P>0.05犦,但均明显多于表皮生长因子组犤(99.5±14.9)个/孔,P<0.01犦。②碱性成纤维细胞生长因子组以及表皮生长因子+碱性成纤维细胞生长因子组克隆球分化为神经元的数量明显多于表皮生长因子组,而表皮生长因子组产生较多的星形胶质细胞。结论:①碱性成纤维细胞生长因子能促进人胎脑室下区神经干细胞增殖,所形成的细胞克隆球能分化出较多的神经元。②两种因子合用并没有获得明显的优于单用碱性成纤维细胞生长因子的结果,提示不存在协同作用。

摘要：目的　建立缺口 连接酶链反应 (gapligasechainreaction ,G LCR)诊断新生儿沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis)感染。方法　根据沙眼衣原体主要外膜蛋白基因设计两对探针 ,应用LCR技术扩增衣原体标准株DNA ,并用于检测 32 8例新生儿肺炎鼻咽拭子标本中的沙眼衣原体 ,在敏感性、特异性方面与传统的细胞培养法进行比较。结果　G LCR可检测出两个衣原体原体 ;可扩增 5种沙眼衣原体标准株DNA ,不扩增鹦鹉热衣原体及其他细菌DNA ,显示出很高的特异性。 32 8例鼻咽拭子标本中 ,G LCR扩增检出 6 7例阳性 ,培养检出 6 0例。经结果不一致分析后 ,共检出 6 9例阳性 ,阳性率为2 1%。以扩大标准为金标准判断 ,G LCR的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为 98 6 %、10 0 %、10 0 %和 99 6 % ,而培养则分别为 86 9%、10 0 %、10 0 %和 96 6 %。结论　G LCR检测新生儿沙眼衣原体感染具有较高的敏感性和特异性。G LCR是一种有应用前景的核酸扩增方法。

摘要：目的:用超临界CO_2流体萃取技术提纯猪肺表面活性物质,并对萃取工艺条件进行优化。方法:通过单因素对比实验以及正交试验设计对其萃取过程中的主要影响因素进行了考察,以优化萃取工艺。结果:确定最佳萃取条件为:压力30MPa,温度50℃,动态萃取时间5h,0.3mL 无水乙醇为夹带剂。结论:该提纯方法简便、高效、有机溶剂污染少。

摘要：目的 :比较细菌DNA4种提取方法的优缺点。方法 :采用水煮法、传统法、GenmictionDNAKit法、E .ZNA法分别制备 18种细菌DNA ,比较 4种方法提取DNA纯度及量的差异。结果 :4种方法制备的DNA均可成功应用于PCR扩增 ,水煮法与E .ZNA法提取DNA量都较大 ,但前者纯度低于后者 ;GenmictionDNAKit法提取DNA纯度高 ,但量较低 ;传统法提取的DNA量及纯度均较低 ,但经济、可靠。结论 :4种方法各具特点 ,应根据实验目的选用。

摘要：背景:神经干细胞在神经系统退行性疾病中的疗效日益得到肯定,但人不同胚龄神经干细胞的发育规律评估较少。目的:探讨不同胎龄人纹状体神经干细胞的发育规律,为拓展神经干细胞在儿科领域的应用打下基础。设计:非随机对照的实验研究。地点、材料和干预:本研究在全军儿科中心实验室进行。30例水囊引产的胎儿经家属及胎儿母亲同意后由广州市某三级甲等医院妇产科提供,并按胎龄24,26,28,30,32周分为5组,每组6例。采用免疫组织化学和光镜观察技术进行实验。主要观测指标:人不同胎脑纹状体神经干细胞的形态及其生长方式。结果:不同胎龄纹状体组织均存在神经干细胞,细胞呈圆形、椭圆形及三角形,以圆形和椭圆形多见,三角形细胞仅出现在30,24周的胎脑纹状体。各型细胞有大有小,0～3个突起,核呈圆形及椭圆形,大部分细胞染色质疏松,少部分细胞染色质致密,1～4个核仁不等。5个胎龄的大多数神经干细胞以单个细胞形式生长;30周神经干细胞偶见对称性分裂的集落样生长方式;28周神经干细胞可见对称分裂双细胞、多个细胞集落等生长方式。同胎龄纹状体神经干细胞的形态、大小及生长方式基本相同。结论:人胎脑纹状体存在神经干细胞,且不同胎龄纹状体的神经干细胞在形态及生长方式上存在一定的差异。

摘要：慢性粒细胞白血病(CML)的免疫治疗是清除白血病微小残留病并最终根治CML的方向之一,包含BCR-ABL融合区的多肽具有良好的免疫原性,在体内、外可诱发BCR-ABL特异的T细胞克隆.以BCR-ABL融合肽瘤苗激发特异性T细胞应答抗CML免疫治疗有希望成为根治CML残留白血病的有效手段.本实验通过基因工程技术,设计一个280 bp的融合抗原基因片段,包含HLA-A2,HLA-A3,HLA-DR11等3个限制性BCR-ABL抗原表位,以及破伤风类毒素和霍乱毒素B亚单位的外源T细胞刺激表位.该融合抗原基因已在大肠杆菌中获得高效表达,所纯化的融合蛋白具有良好的活性及抗原性,为进一步实验奠定了基础.

摘要：围产期窒息所致缺氧缺血脑损伤(HIBD)为新生儿期危害最大的常见病，常导致新生儿死亡和幸存者严重的后遗症。近来报道非竞争性N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂1-氨基-3，5二甲基金刚烷盐酸(商品名美金胺)（Memantine）对HIBD具有脑保护作用［1］。本研究拟对缺氧缺血（HI）新生大鼠对照应用美金胺，通过观察热休克蛋白（HSP）70基因表达的变化，进一步从分子水平评估美金胺对脑的保护效果。　　材料和方法　　1.实验对象：7日龄SD鼠，无性别选择，体重10～14 g，分成正常对照（NORM）组、HI组以及HI后给药组，每组15只。　　***模型的建立：结扎7日龄新生鼠的右颈总动脉，置于自行研制的缺氧房［2］内，在37 ℃、8％氧浓度下缺氧2 h，返回母鼠身边喂养。　　***70基因的检测方法：(1) 制备标本：新生鼠分别于HI后2、24、48、72 h及7 d断头处死。正常鼠亦在相应时段断头处死。无菌操作下分别取右脑皮质约50 mg和海马组织约25 mg，冻存于－80 ℃冰箱内备用。(2) HSP70基因的检测：采用柱离心式组织/细胞RNA抽提试剂盒（上海华舜生物工程公司产品），进行两组脑总RNA的抽提。应用PE Lamda 10紫外/可见光分光光度计进行RNA吸光度A260值(曾称光密度OD260值)的测定，得出标本总RNA浓度（g/L）。根据HSP70基因cDNA序列，应用Oligo 5.0软件设计长度为19个碱基序列的上游、下游和下游竞争引物(美国赛百胜生物工程公司合成)。竞争性内参照（internal standard，IS）制备过程参照文献［3］，浓度为2fg。依据逆转录试剂盒进行总RNA逆转录，生成RT产物cDNA，然后进行PCR扩增，2％琼脂糖对PCR产物进行凝胶电泳，应用BIO-RAD图象分析系统软件（美国BIO-RAD公司）分析电泳结果，用PCR产物目的条带和竞争条带的容积比值作为HSP70基因的相对表达量。