摘要：目的编制成年烧伤患者静脉血栓栓塞症风险评估量表,并检验其信效度。方法基于文献系统评价、Delphi法及层次分析法构建成年烧伤患者静脉血栓栓塞症风险评估初始量表。采用横断面研究设计,使用该量表和Caprini风险评估模型对陆军军医大学第一附属医院烧伤科2015年1月至2022年12月收治的300例成年烧伤患者进行调查,对量表进行信效度检验和风险分层。结果构建出包含烧伤伤情因素、导管置入情况、手术相关因素等5个维度,23个条目的“成年烧伤患者静脉血栓栓塞症风险评估量表”。探索性因子分析共提取5个公因子,累计方差贡献率为58.959%。量表各维度与总量表相关系数为0.572~0.868(P<0.01),维度间相关系数为0.186~0.545(P<0.01)。量表各条目的内容效度指数为0.857~1.00,全体一致的量表的内容效度指数为0.826,平均量表的内容效度指数为0.980。量表与Caprini风险评估模型的相关系数为0.683(P<0.001)。总量表的Cronbach’sα系数为0.839,ROC曲线下面积为0.840,大于Caprini风险评估模型的ROC曲线下面积0.762。结论构建出成年烧伤患者静脉血栓栓塞症风险评估量表,量表得分35~36分为低风险;37~43分为中风险;≥44分为高风险。

摘要：目的　在获得了辐射诱导小鼠肠上皮新基因RS1EST序列的基础上获得全长cDNA。方法　RT PCR方法对RS1基因进行表达谱分析 ,找到表达丰度较高的组织提取总RNA作为模板 ,应用增强RACE技术即结合生物素探针富集靶cDNA的方法克隆RS1的cDNA末端。结果　克隆到RS1片段 3′端约 2kb的序列。该序列 5′端包含已知的RS1片段 ,3′端具有明显的polyA加尾信号 ,有编码区的终止密码子。明确了RS1的正、负链及其蛋白编码方向 ,为RS15′端的克隆提供了必要信息。结论　结果与本实验的设计完全一致 ,说明这一方法对从表达丰度低 ,难以设计最佳基因特异性引物的EST序列克隆其对应的全长cDNA是可行的 ,同时为下一步研究RS1在小鼠肠上皮辐射应激反应中的作用和被辐射诱导表达的调控模式奠定了基础。

摘要：目的研究人生长激素(hGH)基因在原核中的高效表达、纯化及鉴定.方法设计带双酶切位点引物,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得hGH cDNA片段,并亚克隆入pUC19质粒中进行DNA序列测定.将hGH cDNA片段克隆入原核表达载体pBV220中进行表达.表达产物经7mol/L盐酸胍裂解变性、复性、层析等一系列纯化研究,纯化产物经SDS-PAGE电泳,高压液相色谱法(HPLC)纯度分析及活性测定,并通过N末端氨基酸序列测定鉴定表达产物.结果 RT-PCR扩增所得片段大小与预期值一致.pBV220-hGH表达产物经SDS-PAGE电泳显示,分子量为22×103与预计结果相符.rhGH表达量占菌体总蛋白量的40%.表达产物纯化后,纯度达97%以上,比活性大于3.0IU/mg.纯化产物经N末端15个氨基酸测定验证,为重组人生长激素.结论成功构建了pBV220-hGH原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达,表达产物经纯化得到纯度≥97%的rhGH,比活性大于3.0 IU/mg.该研究为rhGH的中试生产奠定了基础.

摘要：细胞生物学、分子生物学和免疫学等学科的飞速发展 ,以及新的实验体系和新的技术方法的不断涌现 ,促进了肿瘤递呈性免疫治疗的日新月异 ,树突状细胞作为体内功能最强的抗原递呈细胞在以 T细胞识别肿瘤抗原为核心的肿瘤生物治疗研究中展现了良好的应用前景。本文通过对树突状细胞在肿瘤疫苗中设计策略的综述 ,有助于更加准确地看待当今的肿瘤生物治疗。

摘要：对一组抑制肥大细胞脱颗粒的异喹啉类化合物的活性及毒性进行了3D-QSAR研究,采用距离比较法(DISCO)得到了它们的药效团模型,通过选择不同的叠合方式,建立了相关性很好的比较分子力场分析(CoMFA)模型,其交叉验证参数Rcv2分别为0.654和0.662,非交叉验证的相关系数分别为0.990与0.983,通过查阅统计量F表,表明活性及毒性模型的置信度都大于99%,显示模型具有较强的预测能力.并在此基础上进行了新活性先导化合物的设计,得到了预测活性高以及预测毒性低的新结构,合成实验正在进行之中.

摘要：目的体外条件下模拟缺氧环境，探讨P311和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）相互作用及对小鼠表皮干细胞（ESC）迁移影响。方法取15只C57BL/6J野生型新生小鼠，5只同属来源P311基因敲除新生小鼠，分离培养2种小鼠ESC，取第1代细胞行形态学观察，采用流式细胞仪检测细胞表面标志物CD71、CD49f表达后行以下实验。（1）取2种小鼠ESC划痕处理后，立即按随机数字表法（下同）将P311基因敲除小鼠ESC分为常氧组（将细胞加入完全培养基置于常氧二氧化碳培养箱培养，常氧处理下同）和缺氧组（将细胞置于含体积分数1%氧气的缺氧二氧化碳培养箱培养，缺氧处理下同），每组12个插件；将野生型小鼠ESC分为常氧组、单纯缺氧组、二甲基亚砜（DMSO）对照组（用2 μL DMSO溶剂常氧处理1 h后行缺氧培养）、HIF-1α抑制剂组（加入11 μmol/L HIF-1抑制剂2 μL常氧培养1 h后行缺氧培养）、HIF-1α稳定剂组（加入2 μmol/L FG-4592 2 μL常氧处理1 h后行缺氧培养），每组12个插件。每组各时相点取3个插件分别于划痕后0（即刻）、12 、24、48 h在100倍倒置相差显微镜下测量划痕剩余宽度。（2）取野生型小鼠ESC行缺氧培养，蛋白质印迹法检测缺氧0（即刻）、12、24、48 h HIF-1α蛋白表达。（3）取野生型小鼠ESC同实验（1）分为单纯缺氧组、DMSO对照组、HIF-1α抑制剂组、HIF-1α稳定剂组并行相应处理，分别在缺氧0、12、24、48 h采用实时荧光定量RT-PCR法检测P311 mRNA表达，免疫细胞化学染色法观测P311表达（样本数均为12）。（4）取第2代人胚胎肾293（HEK-293）细胞分为空载缺氧组（转染空载质粒后进行缺氧培养）、P311常氧组（转染P311报告基因质粒后进行常氧培养）、P311缺氧组（转染P311报告基因质粒后进行缺氧培养）、P311缺氧＋HIF-1α抑制剂组（HIF-1抑制剂处理后转染P311报告基因质粒然后进行缺氧培养），分别于培养0、12 h检测荧光素酶活性，采用生物信息学方法预测HIF-1α对P311转录调节的结合位点并查找P311启动子序列。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD检验以及Bonferroni校正。结果（1）ESC结果。细胞呈现铺路石样改变，细胞由于增殖潜能不同而呈现不同克隆状态。CD71－CD49f＋细胞占85%左右，说明ESC的干性较强、纯度较高。与P311基因敲除小鼠常氧组比较，单纯缺氧组细胞划痕后12、24 h划痕剩余宽度较小（P值均小于0.05），缺氧组、野生型小鼠常氧组、DMSO对照组、HIF-1α抑制组、HIF-1α稳定剂组细胞划痕后12 h划痕剩余宽度较小（P值均小于0.05）。与野生型小鼠常氧组比较，缺氧组、单纯缺氧组、DMSO对照组细胞划痕后12、24 h划痕剩余宽度较小（P值均小于0.05），HIF-1α稳定剂组细胞划痕后12 h划痕剩余宽度较小（P〈0.05）。与单纯缺氧组比较，缺氧组细胞划痕后12、24 h划痕剩余宽度较大（P值均小于0.05），HIF-1α抑制剂组细胞划痕后12 h划痕剩余宽度较大（P〈0.05），HIF-1α稳定剂组细胞划痕后12、24 h划痕剩余宽度较小（P值均小于0.05）。7组小鼠细胞间划痕后48 h划痕剩余宽度总体比较差异不明显（F＝19.02，P〉0.05）。野生型小鼠ESC缺氧0、12、24、48 h的HIF-1α蛋白表达量分别为1.02±0.05、2.56±0.09、1.60±0.17、1.17±0.03。与缺氧0 h比较，HIF-1α蛋白表达量缺氧12 h明显增加（P〈0.01），缺氧24 h开始下降但仍高于缺氧0 h（P〈0.05），缺氧48 h后降至常氧水平（P〉0.05）。与单纯缺氧组比较，HIF-1α抑制剂组细胞缺氧各时相点P311 mRNA表达量均明显下降（P值均小于0.05），HIF-1α稳定剂组细胞P311 mRNA表达量则在缺氧12、24 h明显升高（P值均小于0.05）。与HIF-1α抑制剂组比较，DMSO对照组和HIF-1α稳定剂组细胞在缺氧0、12、24 h P311 mRNA表达量均明显升高（P值均小于0.05）。与单纯缺氧组比较，HIF-1α抑制剂组细胞缺氧各时相点P311表达量均明显下降（P值均小于0.05），而HIF-1α稳定剂组细胞P311表达量则在缺氧12、24 h明显升高（P值均小于0.05）。与HIF-1α抑制剂组比较，DMSO对照组和HIF-1α稳定剂组细胞P311表达量在缺氧12、24 h明显升高（P值均小于0.05）。（2）HEK-293细胞结果。培养0 h，空载缺氧组、P311常氧组、P311缺氧组、P311缺氧＋

摘要：目的研究泛醇与谷氨酰胺对烧伤大鼠肠道损伤和运动功能的影响及其量效关系。方法（1）拆方实验。将90只SD大鼠按随机数字表法分为A—I组，每组lO只。将各组大鼠制成30％TBSAⅢ度烧伤模型，伤后4h开始灌胃泛醇和谷氨酰胺，剂量分别为1．00、4，0．50、4，0．25、4，1．00、2，0．50、2，0．25、2，1．00、I，0．50、I，0．25、lg·kg-1·d-1，每日剂量分2次灌胃，连续7d。停药当天采集大鼠血液及肠道组织，观测肠道推进指数、血清二胺氧化酶（DAO）活性、全血乙酰胆碱含量、肠黏膜蛋白含量，筛选泛醇和谷氨酰胺最佳配比。（2）药效学实验。将70只SD大鼠按照随机数字表法分为正常对照组（不进行任何处理）、烧伤组、烧伤＋泛醇组、烧伤＋谷氨酰胺组、烧伤＋低剂量泛醇．谷氨酰胺（简称“泛谷”）组、烧伤＋中剂量泛谷组、烧伤＋高剂量泛谷组，每组10只。将后6组大鼠按上述模型致伤，伤后4h开始灌胃药物，烧伤＋泛醇组给予泛醇1．00g·kg-1·d-1；烧伤＋谷氨酰胺组给予谷氨酰胺4g·kg-1·d-1；烧伤＋低、中、高剂量泛谷组给予泛醇和谷氨酰胺，剂量分别为0．50、2，1．00、4，2．00、8g·kg-1·d-1，每日剂量分2次灌胃，连续7d。检测指标及时问同拆方实验，另外增加各烧伤组大鼠肠道病理学观察；正常对照组行相同检测。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析及Fisher确切概率法检验，两两比较行LSD检验。结果（1）A、B组大鼠肠道推进指数、肠黏膜蛋白含量相近（P值均大于0．05），显著高于其余7组（P值均小于0．01）；A组大鼠乙酰胆碱含量显著高于其余8组（P值均小于0．01）；A、D、E组大鼠DAO活性相近（P值均大于0．05），低于其余6组（P值均小于0．01）。泛醇与谷氨酰胺最佳配比剂量为1．00、4g·kg-1·d-1。（2）与正常对照组比较，烧伤组大鼠肠道推进指数、乙酰胆碱和肠黏膜蛋白含量明显降低，DAO含量明显增高（P值均小于0．01）；烧伤＋泛醇组大鼠肠道推进指数明显降低（P〈0．01）；烧伤＋谷氨酰胺组大鼠肠道推进指数、乙酰胆碱含量明显降低（P值均小于0．01）；烧伤＋低剂量泛谷组大鼠肠道推进指数明显降低（P〈0．01）；烧伤＋中、高剂量泛谷组大鼠4项指标水平未见明显改变（P值均大于0．05）。与烧伤组[0．50±0．07、（69±10）IXg／mL、（26±l】）汕g／g、（0．672±0．145）U／mL]比较，烧伤＋泛醇组大鼠乙酰胆碱和肠黏膜蛋白含量显著升高，DAO活性显著降低（P值均小于0．01）；烧伤＋谷氨酰胺组肠黏膜蛋白含量显著升高，DAO活性显著降低（P值均小于0．01）；烧伤＋低剂量泛谷组乙酰胆碱、肠黏膜蛋白含量升高（P值均小于0．01）；烧伤＋中、高剂量泛谷组肠道推进指数、乙酰胆碱和肠黏膜蛋白含量升高，DAO活性降低[0．66±0．07、0．68±0．05，（163±24）、（168±15）μg／mL，（57±7）、（57±7）μg／g，（0．203±0．070）、（0．193±0．068）U／mL，P值均小于0．01]。烧伤＋中、高剂量泛谷组4项指标水平相近或相同（P值均大于0．05）。与烧伤组比较，烧伤＋泛醇组绒毛排列紊乱鼠数显著减少（P〈0．05）；烧伤＋谷氨酰胺组绒毛高度下降、排列紊乱和中性粒细胞浸润鼠数明显减少（P值均小于0．05）；烧伤＋低剂量泛谷组绒毛高度下降、排列紊乱及细胞变性坏死和中性粒细胞浸润鼠数显著减少（P值均小于0．05）；烧伤＋中、高剂量泛谷组绒毛高度下降、数量减少、排列紊乱及细胞变性坏死和中性粒细胞浸润鼠数显著减少（P值均小于0．05）。烧伤＋中、高剂量泛谷组各项指标鼠数接近（P值均大于0．05）。结论联合应用泛醇与谷氨酰胺能明显减轻烧伤大鼠肠黏膜损伤并促进胃肠运动，疗效优于单一用药，二者最佳配比剂量为1．00、4g·kg-1·d-1。

摘要：目的 探讨短链脂肪酸（SCFA）对内毒素/脂多糖（LPS）引起的人肠上皮细胞屏障功能损害的作用及相关机制。方法 建立人肠上皮细胞株Caco-2单层细胞培养模型。取细胞按随机数字表法分为对照组、LPS组及SCFA＋LPS组。对照组细胞仅采用DMEM培养液常规培养，LPS组细胞在DMEM培养液中另加入终质量浓度为10 μg/mL的LPS，SCFA＋LPS组细胞在DMEM培养液中另加入终质量浓度为10 μg/mL的LPS和SCFA（由0.5 mmol/L乙酸、0.01 mmol/L丙酸、0.01 mmol/L丁酸组成）的混合液培养。于培养0、1、2、6、12、24 h，取细胞采用电阻测定仪测定细胞的跨上皮电阻（TER），样本数为72。另取细胞同前分组及处理后，采用蛋白质印迹法于培养24 h后检测带状闭合蛋白1（ZO-1）、咬合蛋白及闭合蛋白1表达，样本数为6。另取细胞同前分组及处理后，采用免疫荧光法检测细胞形态及ZO-1的分布。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD检验及Bonferroni校正。结果 （1）与对照组相比，LPS组细胞培养1-24 h的TER均明显降低（P〈0.01），SCFA＋LPS组细胞培养1-24 h的TER无明显变化（P〉0.05）。SCFA＋LPS组细胞培养1-24 h的TER均较LPS组明显升高（P〈0.01）。（2）与对照组的1.25±0.10、1.17±0.04、1.24±0.20相比，LPS组细胞培养24 h ZO-1、咬合蛋白及闭合蛋白1的表达量（0.74±0.23、0.76±0.11、0.77±0.11）均明显降低（P〈0.05），而SCFA＋LPS组细胞培养24 h ZO-1、咬合蛋白及闭合蛋白1的表达量（1.23±0.46、1.05±0.09、1.01±0.13）均与之相近（P〉0.05）。与LPS组相比，SCFA＋LPS组细胞培养24 h的咬合蛋白和闭合蛋白1表达量均明显增加（P〈0.05），ZO-1表达量增加但差异无统计学意义（P〉0.05）。（3）培养24 h对照组细胞排列紧密，近似鹅卵石样外观；ZO-1沿细胞膜呈连续、规则排列。LPS组细胞排列稀疏且形态改变；ZO-1沿细胞膜不规则排列，且偶有断裂和卷曲。SCFA＋LPS组细胞形态和ZO-1排列均较LPS组明显改善。结论 SCFA可通过阻断LPS引起的TER下降、紧密连接蛋白表达下降和ZO-1分布异常，从而减轻LPS对人肠上皮细胞屏障的损害。

摘要：目的　筛选经辐射诱导后小鼠肠上皮细胞的差异或特异表达基因。方法　通过基因库检索和计算机分析 ,设计出较通用的 5’端武断引物在基因库中其呈现几率要高出数倍到数十倍的 4条 5′端高同源mRNA差示引物 ,应用DDRT PCR ,测序凝胶电泳 ,放射自显影 ,分子杂交等方法 ,分析并筛选小鼠受 12Gyγ射线全身照射后 3h(R1组 )和 96h(R2组 )肠上皮细胞差异或特异表达基因。结果　 5′端高同源性引物mRNA差异结果显示 ,与正常比较 ,小鼠全身 12Gy照射后不同时相的肠上皮细胞基因表达存在差异 ,从近 80 0 0条PCR扩增产物中 ,比较筛选出 12个差异表达基因片段。RNA blot杂交对 11个辐射损伤情况下差异表达基因片段进行了鉴定。R1S1和R1S2差异基因片段在辐射损伤后 3h的肠上皮细胞中呈特异性表达 ;R2S2和R2S5基因片段在辐射损伤后 96h的肠上皮细胞中呈特异性表达 ;R2S1、R2S6和R2S8基因片段是假阳性差异表达基因片段 ;而R2S1、R2S4及R2S8用RNA blot法检测不到表达。序列分析结果显示R1S1和R2S2在基因库中未见高同源的基因序列 ,与R1S1同源性最高 (60 0 0 % )的是一个源于大鼠输卵管特异性糖蛋白基因 ,R2S5与一种小鼠肌细胞钙离子信号传导分子有 67 2 1%的同源性 ;R2S2高度同源于鼠源性肿瘤诱导蛋白p3 2 (91 5 2 % )

摘要：目的构建大鼠转化生长因子β1(transforming growth factor,TGFβ1)基因RNA干扰慢病毒载体,并观测其对大鼠肝星状细胞HSC-T6的TGFβ1基因沉默效应与对Ⅰ型胶原α1(alpha-1 typeⅠcollagen,Col1α1)表达的影响。方法针对大鼠TGFβ1基因CDs序列,筛选3个干扰靶点,合成其3对小干扰RNA(siRNA),将各对siRNA分别转入HSC-T6细胞,采用RT-PCR法从3对siRNA中筛选出最佳siRNA,设计并合成针对最佳siRNA靶序列的shRNA,退火形成双链,与载体pGreenPuro连接,构建pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒载体,予以酶切与测序鉴定。pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒载体经293细胞包装,将包装产生的高感染力的慢病毒颗粒感染HSC-T6细胞,倒置显微镜观察经感染的HSC-T6细胞的GFP表达情况,在mRNA与蛋白水平检测重组慢病毒pGreenPuro/TGFβ1 shRNA对HSC-T6细胞的TGFβ1基因的沉默效应及对Col1α1表达的影响。结果筛选到TGFβ1基因的最佳干扰靶序列。酶切与测序结果证实,构建pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒载体成功。HSC-T6细胞经pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒感染48 h后,RT-PCR检测未见TGFβ1基因表达,Col1α1基因较弱表达;Western blot检测显示TGFβ1、Col1α1蛋白表达均非常弱。结论成功构建大鼠TGFβ1基因RNA干扰慢病毒载体,该载体能有效沉默HSC-T6细胞的TGFβ1基因,并抑制Col1α1的表达。