摘要：目的　合成两个新设计的具有环氧胆烷酸甲酯结构的化合物 :3β 羟基 5α ,6α 环氧胆烷酸甲酯、3β 羟基 5 β ,6 β 环氧胆烷酸甲酯 ,以期从中发现新的LXRs亚型选择性配体。方法　用我国丰富的甾体资源———猪去氧胆酸为原料 ,分别经三步和四步化学反应合成。结果　以 76 %和 42 %的总收率合成了两个目标化合物 ,并经波谱分析证实。结论　用高立体选择性高收率地成功合成了目标化合物。为研制治疗动脉粥样硬化等心脑血管疾病的新药打下了基础。

摘要：目的　构建6种人可溶性增殖诱导配体(solubleaproliferation inducingligand ,sAPRIL)cDNA突变体。方法　采用PCR将可溶性增殖诱导配体(sAPRIL)cDNA进行突变,并分别在其N端和C端连接TELTh表位序列,插入到pQE80表达载体上,最后转化至DH5α感受态细胞。重组质粒经酶切鉴定后进行测序。结果　经PCR扩增分别得到了对应于6种突变体的sAPRIL序列,酶切和测序证实成功构建了含HELTh表位的sAPRILcDNA突变体表达质粒。结论　成功构建了6种sAPRILcDNA突变体的表达质粒,为进一步进行sAPRIL突变体cDNA的表达和活性鉴定奠定了基础。

摘要：为分析富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1(PNRC1)选择性剪接,及比较PNRC1剪接变异体在辅激活核受体介导基因转录功能上的差异,在生物信息学方法分析PNRC1剪接变异体的基础上,设计一定的特异性引物,采用RT-PCR结合克隆测序的方法对这些剪接变异体进行验证.利用酵母双杂交和荧光素酶报告系统实验,分析它们与核受体的相互作用及比较它们在辅激活核受体介导基因转录功能上的差异.结果显示,生物信息学预测的几个剪接变异体真实存在于人的组织和细胞系中,这些剪接变异体在与雌激素受体α(ERα)、类固醇衍生因子1(SF1)等核受体的相互作用的强度及辅激活核受体介导基因转录功能上存在较大的差异.研究提示,PNRC1这些剪接变异体在体内可能发挥不同的功能.

摘要：DNA甲基化是哺乳类动物一个重要的基因外遗传信号。有研究表明,DNA甲基化与大多数肿瘤的发生相关,抑癌基因启动子CpG岛的高甲基化可引起抑癌基因表达沉默,细胞出现无节制生长,导致肿瘤的发生。目前,甲基化特异性PCR(methylation·specific PCR,MS-PCR)是研究DNA甲基化最为常用且准确度较高的方法之一,[第一段]

摘要：目的构建凋亡抑制蛋白Livin两种异构体(Livinα和β)真核细胞表达载体pcDNA3.1-Livinα和pcDNA3.1-Livinβ。方法利用分子克隆技术,首先设计合成扩增Livin基因异构体全长cDNA序列的特异性PCR引物,以肺腺癌SPC-A1细胞总RNA为模板,RT-PCR获得Livin基因异构体全长cDNA序列,TA克隆将Livin全长cDNA序列克隆到T载体上,用限制性内切酶HindⅢ和XbaⅠ双酶切取所需目的片段,然后将该片段插入真核表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,最后对产生的重组子进行双酶切、PCR鉴定,并经过测序证实后,构建成为Livin基因异构体表达载体(pcDNA3.1-Livin)。电穿孔法获得稳定表达Livinα和β的A549细胞克隆,Westernblot验证Livin蛋白在转染细胞中的表达情况。结果成功获得Livinα和Livinβ全长cDNA序列,并克隆到真核表达载体pcDNA3.1上;基因转染后,阳性细胞分别表达Livinα和β。结论Livin基因两种异构体真核表达载体的构建及在细胞中的表达鉴定,为进一步研究Livin异构体功能及在肺癌细胞中的抗凋亡效应奠定了基础。

摘要：目的制作哺乳动物micro RNAs(miRNAs)检测微阵列,筛选乳腺癌miRNAs表达谱并进行初步分析。方法利用已知的人及小鼠的miRNAs序列,设计了496条探针,制作miRNAs微阵列并验证其可靠性;培养乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A,分别抽提细胞总RNA,分离小分子RNA,经T4RNA连接酶荧光标记后与微阵列杂交,通过芯片扫描和数据分析,获得乳腺癌miRNAs表达谱。结果成功制作哺乳动物miRNAs微阵列,筛选获得57个乳腺癌相关miRNAs,其中,29个为低表达,28个为高表达。结论建立了哺乳动物miRNAs检测微阵列的技术平台,并筛选到乳腺癌miRNAs表达谱,为进一步研究其在乳腺癌发病机制中的作用打下基础。

摘要：目的构建针对转录因子FoxO1的siRNA腺病毒载体,并鉴定重组腺病毒在人肝癌细胞系HepG2中对内源性FoxO1基因表达的影响。方法设计并合成针对FoxO1的siRNA的靶DNA序列,克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,转染293细胞,包装得到含si-FoxO1的重组腺病毒,体外转染人肝癌细胞系HepG2,Westernblot检测FoxO1蛋白表达水平的变化。结果成功构建针对FoxO1的siRNA重组腺病毒载体,该重组腺病毒能显著抑制HepG2细胞中FoxO1蛋白的表达(P<0.01)。结论成功构建了针对FoxO1的siRNA重组腺病毒载体,能有效抑制HepG2细胞中FoxO1的表达。

摘要：核受体(nuclear eceptor,NR)是一类在生物体内广泛分布的,配体依赖的转录因子,其成员众多,构成了一个大家族,可分为三大类:类固醇激素受体、非类固醇激素受体和孤儿核受体。核受体与相应的配体及其辅调节因子相互作用,调控基因的协调表达,从而在机体的生长发育、新陈代谢、细胞分化及体内许多生理过程中发挥重要作用。核受体的功能障碍将导致一系列疾病如癌症、不育、肥胖、糖尿病。核受体能结合经药物设计而被修饰的小分子,从而调控相关疾病如癌、骨质疏松、糖尿病等。它们是有希望的药物设计靶标。因此,寻找孤儿受体的配体和信号通路成为非常有意义的研究领域。[第一段]

摘要：化学是一门实验科学。实验是化学的灵魂,是化学魅力和激发学生学习兴趣的源泉之一。更是培养和发展学生思维能力和创新能力、实践能力的重要方法和手段。传统化学实验教学多以教师为中心,着重强调教师的“教”。学生虽然也参与了实验教学活动。但实质上多处于被动接受的状态。古人云“授人以鱼,不如授人以渔”。而以问题为中心的实验课教学强调了教师的主导作用和学生的主体地位。通过教师在化学实验课中精心设计的问题和问题的层层深入来引导学生发现问题和思考问题,培养学生分析问题、解决问题的能力。[第一段]