摘要：目的　建立半套式PCR和DNA探针技术由于检测Q热立克次体。方法　依据已知的Q热立克次体的 16S和 2 3SrRNA基因及其间区的序列 ,设计 3条引物 ,建立了扩增 16S 2 3SrRNA基因间区的半套式PCR方法 ,并将扩增片段制成探针 ,建立了斑点杂交技术。结果　 10株Q热立克次体分离株均可扩增出 5 72bp的PCR条带 ,而对照菌都为阴性 ,此半套式PCR方法的灵敏度高达 1pg ;用九里株扩增片段标记后制成的探针 ,与 10个Q热立克次体分离株的全DNA呈阳性杂交 ,对照菌为阴性 ,此杂交方法的灵敏度为 0 .5ng。结论　基于Q热立克次体 16S 2 3SrRNA基因间区的半套式PCR和DNA探针技术具有较好的特异性和灵敏度 ,可联合应用于Q热的病原学诊断。

摘要：目的 构建查菲埃立克体特异性表面抗原 Ｐ１２０基因的原核表达质粒，并使该基因在 Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达。方法 依据查菲埃立克体Ｐ１２０基因序列设计一对特异性引物，用ＰＣＲ从查菲埃立克体的基因组中扩增含有编码Ｐ１２０抗原决定簇的基因片段，而后将ＰＣＲ产物用Ｔ载体克隆。用酶将ＰＣＲ产物从Ｔ载体切下，将它定向插入原核表达质粒ＰＥＴ１１Ｃ构建ＰＥＴ１１Ｃ／ｐ１２０重组质粒；用重组质粒转化Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）。结果 从ＤＮＡ片断中扩增出一约１１１９ ｂｐ产物，经测序为查菲埃立克体ｐ１２０基因。ＰＥＴ１１Ｃ／ｐ１２０重组质粒转化的 Ｅ．ｃｏｌｉ在 ＩＰＴＧ的诱导下产生一分子量为４１０００的天然蛋白，它的产量占细菌蛋白总量的 ２８％，用免疫印迹分析证明它能特异地与查菲埃立克体感染病人血清反应。结论 查菲埃立克体特异性的Ｐ１２０抗原在原核表达系统被高效表达，该抗原的研制成功为制备人单核细胞埃立克体病诊断抗原和疫苗奠定了基础。

摘要：目的　通过设计一个承载蛋白分子高效表达肽抗生素hPAB β ,为大量制备hPAB β奠定基础。 方法　根据肽抗生素的特性 ,确立 4条设计原则 ,并据此设计一 489bp的承载蛋白编码序列 ,用化学合成法获得该序列并将之克隆到pQE 3 2中构建成表达载体 ,进一步将肽抗生素hPAB β基因插入上述表达载体 ,肽抗生素基因位于承载蛋白编码序列 3’ 端 ,两者构成融合基因。将含融合基因的表达载体转化大肠杆菌JM10 9,筛选阳性重组子 ,并用阳性重组子表达融合蛋白。结果　设计的承载蛋白为 163个氨基酸 ,分子量 17668.80 ,等电点 5 .62 1。用承载分子与肽抗生素hPAB β构建的融合蛋白表达载体转化细菌后 ,筛选到 4个阳性重组子 ,均能高效表达肽抗生素融合蛋白 ,融合蛋白的产量占细菌总蛋白的 40 %～ 45 %。结论　设计的承载蛋白分子能够实现肽抗生素的高效表达。

摘要：目的探讨补体活化在大鼠急性脑缺血再灌注中的作用及人补体受体1型SCR1-3蛋白(CR1-SCR1-3)的保护作用。方法健康雄性SD大鼠75只,采用完全随机设计分组法分为假手术组(n=15)、CI/R组(n=30)及CI/R+CR1-SCR1-3组(n=30)。线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型,缺血1 h,再灌注24 h,对大鼠进行行为学检测,记录神经功能缺陷评分;TTC染色法测定脑梗死体积;制作脑匀浆测定大脑皮层髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醇(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;制备切片观察大脑皮质区补体C4b沉积及病理改变。结果缺血再灌注24 h后,CR1-SCR1-3蛋白可明显改善CI/R+CR1-SCR1-3组大鼠神经功能(P<0.05);脑梗死体积亦明显减少(P<0.01);与CI/R组比较,CI/R+CR1-SCR1-3组MPO活力、MDA含量显著降低(P<0.01),而SOD活性显著增高(P<0.01);缺血脑组织皮质区原位补体C4b沉积显著减少(P<0.01),病理损伤亦明显减轻。结论补体活化参与了脑缺血再灌注损伤过程,CR1-SCR1-3蛋白对大鼠急性CI/R损伤具有保护作用。

摘要：高温变性是实验室常用的方法，如用煮沸法提取质粒DNA，用煮沸法变性DNA检测样品或DNA双链探针，以及在PCR中使用94 ℃变性模板等。这给我们留下一个强烈印象：即核苷酸链是耐高温以至可以接受煮沸处理的。基于这一事实，最近我们使用煮沸法来灭菌欲无菌保存的DNA样品，结果意外发现100 ℃加温处理可以不同程度地损害DNA分子，引起了我们对高温变性处理双链DNA分子的高度重视，特设计实验观察高温对DNA的损害的程度以及高温对不同来源DNA的损害是否有差异。现将结果报告如下。

摘要：阐述临床医学8年制专业开设生物信息学课程的必要性，论述教学实施过程中教材选择、教学内容安排、教学方法设计以及考核方法创新等方面的措施和经验，为该专业生物信息学课程建设提供参考。

摘要：目的构建针对转录因子FoxO1的siRNA腺病毒载体,并鉴定重组腺病毒在人肝癌细胞系HepG2中对内源性FoxO1基因表达的影响。方法设计并合成针对FoxO1的siRNA的靶DNA序列,克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,转染293细胞,包装得到含si-FoxO1的重组腺病毒,体外转染人肝癌细胞系HepG2,Westernblot检测FoxO1蛋白表达水平的变化。结果成功构建针对FoxO1的siRNA重组腺病毒载体,该重组腺病毒能显著抑制HepG2细胞中FoxO1蛋白的表达(P<0.01)。结论成功构建了针对FoxO1的siRNA重组腺病毒载体,能有效抑制HepG2细胞中FoxO1的表达。

摘要：目的　检测细胞培养中细菌类(包括支原体)微生物的污染情况。方法　用细胞培养中常见的培养物人为污染HeLa细胞,设计细菌类微生物16SrRNA基因序列通用引物,PCR扩增16SrRNA基因序列片断,建立PCR检测培养细胞污染的方法,并用该方法检测本室保存的细胞株的污染情况。结果　人为污染绿脓杆菌、大肠杆菌、白色葡萄球菌和支原体M .fermentans的Hela细胞的培养上清中均扩增出大小的片段,与目的片段相符。本室所收藏的15个细胞株有3株的培养上清中扩增出大小的片段。结论　本实验建立了16SrRNA基因序列通用引物PCR法,可用于快速检测培养细胞中细菌类微生物的污染。