摘要：目的 :利用生物靶标效应的原理 ,探索一种特异灭活病毒的光化学方法。方法 :将针对鸭乙肝病毒 (DHBV)设计并人工合成的两条三螺旋结构寡核苷酸 (TFO)分别标记 8-甲氧基补骨脂素 (8-MOP) ,并将这种复合物 (TFO -P)与长波紫外线 (UVA)共同作用于血液中的DHBV ,通过原代细胞感染、酶联免疫测定、DNA斑点杂交等试验 ,观察在一定作用条件下 ,TFO -P对DHBV-DNA的特异结合及其所产生的特异光敏效应对DHBV的灭活程度。结果 :DHBV -DNA样品斑点印迹随TFO -P含量的增加明显增强 ,而同时处理的血液中的白细胞DNA样品斑点印迹无明显增强 ;在TFO -P的加入量为 0 1nmol/ml,UVA照射强度为180 0 μW /cm2 时 ,5～ 2 0min的UV照射可灭活DHBV 1 90～ 6 4个对数级 ,灭活病毒的效率显著高于UVA和 8-MOP的单独作用时的效果。结论 :TFO -P与血液中DHBV -DNA能特异结合 ,在适宜的处理条件下 ,所产生的光敏效应能有效灭活血液中的DHBV ,灭活滴度可达

摘要：生物传感器是能够检测生物学反应的一种分析仪器，通常能通过转换机制和生物学机制两方面研究进行拓展。SAW传感器是用压电效应转换机制来检测传感器表面生物学反应的。SAW最早被用在电子通讯中的滤波器和谐振器上，早期用于气体检测。20世纪80年代早期，液相检测并不很成功，原因在液相中受到声波能量衰减的困扰。为减低水环境的阻尼作用，科学家们设计出更适于液相检测的SH—SAW传感器、LSAW传感器和LW传感器等。

摘要：目的 以6种临床常见突变型为研究对象，建立一种快速检测β－地中海贫血的新方法。方法 收集重庆市大坪医院2015年1至12月正常野生型标本50份和6种临床常见突变型标本42份，PCR扩增外周血β－珠蛋白基因，扩增产物与独立设计的连接检测反应－制式连接探针（LDR－ULP）体系杂交后，荧光定量PCR检测突变类型，琼脂糖电泳验证检测结果，标本梯度稀释法分析LDR－ULP结合荧光定量PCR方法的灵敏度，Kappa检验分析与反向膜杂交法的检测一致性。结果 LDR－ULP杂交反应与多重连接探针扩增技术（MLPA）相比可提高杂交效率2.53倍，经荧光定量PCR扩增后，6种临床常见突变型均出现了明显的扩增曲线，而正常野生型则在40个循环内均无明显扩增曲线。本方法在DNA标本大于5 pg范围内均能得到明显的扩增曲线，对92份临床外周血标本DNA进行检测，本研究方法与反向膜杂交方法结果一致率为100%。结论 本研究通过LDR－ULP技术的特异性，结合荧光定量PCR方法的灵敏性和实时快速的特点，建立了一种操作简便、价格低廉、检测快速的β－地中海贫血的检测新方法。

摘要：目的建立一种检测甲型H1N1流感病毒耐药基因单碱基突变的滚环扩增技术(rolling cycle amplification,RCA)。方法以甲型H1N1流感病毒耐药基因M2基因和NA基因为研究对象,设计检测该基因突变位点的环化探针,环化探针通过与发生单碱基突变的基因特异性结合并被连接成闭合环状,进行滚环扩增后从而特异性地检测单碱基突变。讨论用于该检测的RCA技术的合适反应条件,通过对人工合成的野生型和突变型靶序列检测,确定该方法的特异性和灵敏度。最后通过对临床标本的检测及与测序结果比对,验证该方法的准确性。结果检测单碱基突变需要严格的反应条件,采用热循环连接法和提高连接温度(65℃),保证了检测特异性。通过对含有不同浓度突变靶序列标本的检测确定了该方法能检测出最低1%含量的突变株。RCA技术检测结果与测序方法结果一致。结论成功建立检测甲型H1N1流感病毒耐药基因单碱基突变的RCA技术。

摘要：目的建立一种基于重组酶介导扩增技术（RAA）与分子信标相结合的病原菌恒温快速检测方法。方法方法学的建立。通过金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）所对应的基因设计相应引物及分子信标探针，不断调整引物浓度比例以确定最佳引物浓度比来进行不对称扩增，利用不对称重组酶介导扩增并与分子信标探针杂交，通过琼脂糖凝胶电泳及荧光采集观测结果。将阳性质粒以10倍的梯度稀释，检测该方法的灵敏度。利用该RAA杂交法检测大坪医院检验科微生物室保存的2016年12月的72株包含金黄色葡萄球菌及葡萄球菌属其他种细菌的菌株，以检测该方法的特异性。在特异性实验基础上添加我室保存的2016年12月的39例其他菌株进行Kappa一致性检验及临床诊断效能评价。结果当限制性引物与非限制性引物的浓度比例在1∶20时，产生单链DNA（ssDNA）的效率最高。不对称RAA扩增与分子信标探针杂交的效率明显高于对称扩增。该方法的灵敏度为20拷贝/μl。RAA杂交法能够将金黄色葡萄球菌与葡萄球菌属其他菌株区分，与传统金标准相比Kappa为0.860，一致性良好。经过对111株菌株的检测，该方法敏感度为92.5%（37/40），特异度为97.2%（69/71），阳性预测值为94.9%（37/39），阴性预测值为95.8%（69/72），阳性似然比为33.04，阴性似然比为0.077，约登指数为0.897。与传统金标准相比，Kappa为0.902，两种方法一致性良好。结论通过对不对称RAA扩增条件的优化及与分子信标探针的结合，建立了RAA杂交技术检测细菌DNA的新方法，为恒温扩增应用于临床奠定基础。

摘要：目的探讨通用引物PCR扩增多种创伤感染细菌16S-23S rDNA间区的可行性,为开展常见创伤感染细菌基因诊断做好准备。方法以细菌16S-23S rDNA间区为靶序列,在16S rDNA3′端与23S rDNA5′端保守区自行设计通用引物,筛选5种常见创伤感染细菌,提取其基因组DNA并进行PCR扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳和测序。结果5种细菌基因组DNAPCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳图谱与预期一致,经测序比对后得到了证实。结论该通用引物可以实现对多种创伤感染细菌16S-23S rDNA间区进行PCR扩增,为下一步进行基因诊断打下了坚实的基础。

摘要：用自行设计的TaqMan双标探针和扩增引物建立检测鸟苷酸结合蛋白(G-protein)mRNA的实时荧光定量RT-PCR技术.用G蛋白纯品绘制定量标准曲线,实时荧光定量PCR仪检测ECV304细胞和小鼠G蛋白mRNA水平.10μmol/LGqαmRNA反义寡核苷酸(GqαODN)作用ECV304细胞24h后,Gqα的mRNA表达显著下降(3.18×108±1.75×108拷贝下降到1.44×106±4.82×105拷贝),48h和72h下降更明显;Gsα和Gi2α的mRNA表达变化不显著.10μmol/LGsαmRNA反义寡核苷酸(GsαODN)作用ECV304细胞24h后,Gsα的mRNA表达显著下降(2.97×108±2.68×107拷贝下降到4.16×106±2.00×106拷贝),48h和72h下降更明显;Gqα、Gi2α表达变化不显著.小白鼠油酸致伤后6h,GqαmRNA表达显著下降(1.16×108±8.73×106拷贝下降到3.30×106±1.68×106拷贝),24h下降更显著(9.32×107±1.47×107拷贝下降到4.14×106±1.67×106拷贝);Gsα和Gi2α表达变化的趋势同GqαmRNA.结果准确可靠,重现性好.说明建立的实时荧光定量RT-PCR方法成功地实现了对ECV304细胞和小白鼠肺组织G蛋白不同亚型不同丰度基因表达的检测.

摘要：介绍了一种新型声表面波氨气传感器的基本工作原理和设计方法,声表面波器件的振动模式为瑞利波模式,工作频率为500 MHz。聚苯胺作为敏感膜材料,电路结构采用参比-差分输出方式。通过优化声表面波器件设计、薄膜制备工艺和气路、电路设计,研制出声表面波氨气传感器,其具有灵敏度高,响应速度快和解吸附快的特点。

摘要：目的:建立并评价一种快速检测和鉴定丝状真菌的方法。方法:利用通用引物一次PCR法扩增待检丝状真菌核糖体基因内部间隔区2序列,扩增产物与基因芯片上特异性探针杂交,杂交信号通过纳米金标记和银染反应放大形成裸眼可见的显色信息来判读检测结果。结果:通用PCR扩增方法成功扩增出11种受试菌株的靶DNA,所设计选用的各探针特异性强、可靠性好。所有模拟样品均获得正确的鉴定。结论:该技术方法操作简单、快速、不需要特殊设备,能部分满足临床检测通量的基本要求,具有很好的临床应用前景。

摘要：本文综述近几年用多聚酶链反应(PCR)快速检出肺炎支原体的进展情况,包括特异性引物设计、模板DNA制备、标本收集与处理和PCR操作。介绍了实验及临床检出情况,证明PCR检出肺炎支原体具有特异、敏感、快速等特点。