摘要：生物传感器是能够检测生物学反应的一种分析仪器，通常能通过转换机制和生物学机制两方面研究进行拓展。SAW传感器是用压电效应转换机制来检测传感器表面生物学反应的。SAW最早被用在电子通讯中的滤波器和谐振器上，早期用于气体检测。20世纪80年代早期，液相检测并不很成功，原因在液相中受到声波能量衰减的困扰。为减低水环境的阻尼作用，科学家们设计出更适于液相检测的SH—SAW传感器、LSAW传感器和LW传感器等。

摘要：目的 以6种临床常见突变型为研究对象，建立一种快速检测β－地中海贫血的新方法。方法 收集重庆市大坪医院2015年1至12月正常野生型标本50份和6种临床常见突变型标本42份，PCR扩增外周血β－珠蛋白基因，扩增产物与独立设计的连接检测反应－制式连接探针（LDR－ULP）体系杂交后，荧光定量PCR检测突变类型，琼脂糖电泳验证检测结果，标本梯度稀释法分析LDR－ULP结合荧光定量PCR方法的灵敏度，Kappa检验分析与反向膜杂交法的检测一致性。结果 LDR－ULP杂交反应与多重连接探针扩增技术（MLPA）相比可提高杂交效率2.53倍，经荧光定量PCR扩增后，6种临床常见突变型均出现了明显的扩增曲线，而正常野生型则在40个循环内均无明显扩增曲线。本方法在DNA标本大于5 pg范围内均能得到明显的扩增曲线，对92份临床外周血标本DNA进行检测，本研究方法与反向膜杂交方法结果一致率为100%。结论 本研究通过LDR－ULP技术的特异性，结合荧光定量PCR方法的灵敏性和实时快速的特点，建立了一种操作简便、价格低廉、检测快速的β－地中海贫血的检测新方法。

摘要：目的建立一种检测甲型H1N1流感病毒耐药基因单碱基突变的滚环扩增技术(rolling cycle amplification,RCA)。方法以甲型H1N1流感病毒耐药基因M2基因和NA基因为研究对象,设计检测该基因突变位点的环化探针,环化探针通过与发生单碱基突变的基因特异性结合并被连接成闭合环状,进行滚环扩增后从而特异性地检测单碱基突变。讨论用于该检测的RCA技术的合适反应条件,通过对人工合成的野生型和突变型靶序列检测,确定该方法的特异性和灵敏度。最后通过对临床标本的检测及与测序结果比对,验证该方法的准确性。结果检测单碱基突变需要严格的反应条件,采用热循环连接法和提高连接温度(65℃),保证了检测特异性。通过对含有不同浓度突变靶序列标本的检测确定了该方法能检测出最低1%含量的突变株。RCA技术检测结果与测序方法结果一致。结论成功建立检测甲型H1N1流感病毒耐药基因单碱基突变的RCA技术。

摘要：目的建立一种基于重组酶介导扩增技术（RAA）与分子信标相结合的病原菌恒温快速检测方法。方法方法学的建立。通过金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）所对应的基因设计相应引物及分子信标探针，不断调整引物浓度比例以确定最佳引物浓度比来进行不对称扩增，利用不对称重组酶介导扩增并与分子信标探针杂交，通过琼脂糖凝胶电泳及荧光采集观测结果。将阳性质粒以10倍的梯度稀释，检测该方法的灵敏度。利用该RAA杂交法检测大坪医院检验科微生物室保存的2016年12月的72株包含金黄色葡萄球菌及葡萄球菌属其他种细菌的菌株，以检测该方法的特异性。在特异性实验基础上添加我室保存的2016年12月的39例其他菌株进行Kappa一致性检验及临床诊断效能评价。结果当限制性引物与非限制性引物的浓度比例在1∶20时，产生单链DNA（ssDNA）的效率最高。不对称RAA扩增与分子信标探针杂交的效率明显高于对称扩增。该方法的灵敏度为20拷贝/μl。RAA杂交法能够将金黄色葡萄球菌与葡萄球菌属其他菌株区分，与传统金标准相比Kappa为0.860，一致性良好。经过对111株菌株的检测，该方法敏感度为92.5%（37/40），特异度为97.2%（69/71），阳性预测值为94.9%（37/39），阴性预测值为95.8%（69/72），阳性似然比为33.04，阴性似然比为0.077，约登指数为0.897。与传统金标准相比，Kappa为0.902，两种方法一致性良好。结论通过对不对称RAA扩增条件的优化及与分子信标探针的结合，建立了RAA杂交技术检测细菌DNA的新方法，为恒温扩增应用于临床奠定基础。

摘要：目的:建立并评价一种快速检测和鉴定丝状真菌的方法。方法:利用通用引物一次PCR法扩增待检丝状真菌核糖体基因内部间隔区2序列,扩增产物与基因芯片上特异性探针杂交,杂交信号通过纳米金标记和银染反应放大形成裸眼可见的显色信息来判读检测结果。结果:通用PCR扩增方法成功扩增出11种受试菌株的靶DNA,所设计选用的各探针特异性强、可靠性好。所有模拟样品均获得正确的鉴定。结论:该技术方法操作简单、快速、不需要特殊设备,能部分满足临床检测通量的基本要求,具有很好的临床应用前景。

摘要：用自行设计的TaqMan双标探针和扩增引物建立检测鸟苷酸结合蛋白(G-protein)mRNA的实时荧光定量RT-PCR技术.用G蛋白纯品绘制定量标准曲线,实时荧光定量PCR仪检测ECV304细胞和小鼠G蛋白mRNA水平.10μmol/LGqαmRNA反义寡核苷酸(GqαODN)作用ECV304细胞24h后,Gqα的mRNA表达显著下降(3.18×108±1.75×108拷贝下降到1.44×106±4.82×105拷贝),48h和72h下降更明显;Gsα和Gi2α的mRNA表达变化不显著.10μmol/LGsαmRNA反义寡核苷酸(GsαODN)作用ECV304细胞24h后,Gsα的mRNA表达显著下降(2.97×108±2.68×107拷贝下降到4.16×106±2.00×106拷贝),48h和72h下降更明显;Gqα、Gi2α表达变化不显著.小白鼠油酸致伤后6h,GqαmRNA表达显著下降(1.16×108±8.73×106拷贝下降到3.30×106±1.68×106拷贝),24h下降更显著(9.32×107±1.47×107拷贝下降到4.14×106±1.67×106拷贝);Gsα和Gi2α表达变化的趋势同GqαmRNA.结果准确可靠,重现性好.说明建立的实时荧光定量RT-PCR方法成功地实现了对ECV304细胞和小白鼠肺组织G蛋白不同亚型不同丰度基因表达的检测.

摘要：目的探讨通用引物PCR扩增多种创伤感染细菌16S-23S rDNA间区的可行性,为开展常见创伤感染细菌基因诊断做好准备。方法以细菌16S-23S rDNA间区为靶序列,在16S rDNA3′端与23S rDNA5′端保守区自行设计通用引物,筛选5种常见创伤感染细菌,提取其基因组DNA并进行PCR扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳和测序。结果5种细菌基因组DNAPCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳图谱与预期一致,经测序比对后得到了证实。结论该通用引物可以实现对多种创伤感染细菌16S-23S rDNA间区进行PCR扩增,为下一步进行基因诊断打下了坚实的基础。

摘要：目的筛选靶向铜绿假单胞菌lasR基因的反义肽核酸序列,探讨其对铜绿假单胞菌的生物被膜形成能力的影响。方法针对铜绿假单胞菌lasR基因设计4条反义寡核苷酸序列,利用斑点杂交筛选出与lasR基因结合最佳的反义寡核苷酸序列,以此合成与穿膜肽连接的肽-肽核酸序列。分别用不同浓度的肽-肽核酸导入铜绿假单胞菌生物被膜模式菌PAO1中,测定不同时相点细菌生长光密度[D(600)]值并进行菌落计数,观察肽-肽核酸对其生长的抑制作用。利用光学显微镜和扫描电镜观察生物被膜形成情况。q PCR方法检测lasR mRNA表达。结果斑点杂交实验结果显示:4条反义寡核苷酸序列中3条有杂交信号产生,其中第1条序列信号最强,以此为基础合成反义肽核酸。不同浓度的肽-肽核酸对铜绿假单胞菌表现出不同程度的体外抗菌活性,且随着浓度增加,抗菌活性增强。结论有效筛选出高效反义核苷酸序列,经筛选出的靶向铜绿假单胞菌lasR基因的反义肽核酸对铜绿假单胞菌的生长及生物被膜形成能力有明显抑制作用,同时抑制lasR mRNA的表达。

摘要：目的设计并制备有效干扰细胞内锌指蛋白A20（简称A20）表达的基因沉默载体，初步用于观察A20基因沉默对细胞炎症应答的影响。方法人工设计并合成A20特异性RNA干扰寡核苷酸片段（ASRF），构建A20基因沉默载体pSUPER～EGFP—A20 siRNA。采用基因转染技术使人单核细胞株THP1感染pSUPER—EGFP—A20 siRNA，用适时荧光定量PCR技术鉴定转染细胞A20基因的沉默率；用ELISA测定细胞核内NF—κB活性及培养上清液中的TNF—α水平。结果在设计的2条ASRF中，以M59465—385R／F对细胞A20表达的抑制效果最佳，基因沉默率达83．86％。初步应用表明，A20基因沉默后THP1内NF—κB活性水平增加了78．13％，释放的TNF—α增加了49．30％。结论成功得到了高效A20基因沉默载体，初步应用研究提示A20表达的意义在于下调细胞炎症应答程度。

摘要：背景:脑创伤后脑组织水肿与缺氧再灌注后氧自由基的产生有关。高压氧能减轻脑水肿,改善组织缺氧。目的:观察大鼠颅脑创伤后高压氧对脑水肿和脂质过氧化物的影响。设计:随机对照实验。单位:第三军医大学大坪医院野战外科研究所。材料:实验于2004-03／06在第三军医大学大坪医院野战外科研究所高压氧科、四室完成。选取3个月龄Wistat大鼠58只,体质量(2.56±2.3)g, 清洁级。方法:将58只大鼠随机分为对照组17只,脑创伤组22只和高压氧组 19只。对照组不进行撞击试验。脑创伤组和高压氧组麻醉后均采用 BIM-Ⅲ型撞击机撞击大鼠右侧颅顶,复制闭合性颅脑损伤。高压氧组致伤后置于2个绝对大气压的高压氧舱2 h,大鼠于伤后24 h心脏取血处死。主要观察指标:观察大鼠颅脑创伤后脑组织含水率、伊文斯蓝含量及脑组织、血浆脂质过氧化物丙二醛含量。结果:实验致伤动物41只,伤后24 h死亡7只。其中高压氧组2只, 脑创伤组5 只。进入结果分析34只。①脑组织含水率:右脑脑创伤组明显高于高压氧组和对照组[(79．06±0．52,78．38±0．37,78．21±0．25)％, t=3．022-3．285,P<0．01]。脑创伤组右脑明显高于左脑[(79．06±0．52, 78．57±0．14)%,t=2．651,P<0．05]。②脑组织丙二醛含量:右脑脑创伤组明显高于高压氧组和对照组[(197．28±31．49,167．65±25．88,145．07±30．45)nmol/g． t=2．231-3．347,P<0．01-0．05]。脑创伤组右脑明显高于左脑[(197．28 ±31．49,161．01±22．05)nmo]／g,t=2．443,P<0．05]。③血浆中丙二醛含量:脑创伤组明显高于对照组[(2．69±0．54,1．94±0．40)μmol／L,t=2．473, P<0．05]。结论:脑创伤后行高压氧治疗,大鼠伤侧脑组织含水率、丙二醛及血浆丙二醛含量明显低于非治疗组,提示高压氧对颅脑创伤有治疗作用。