摘要：目的　构建一个含 16个氨基酸的酵母双杂交随机肽库。方法　设计合成编码 16肽的随机DNA片段 ,PCR扩增随机DNA片段 ,经限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后克隆入酵母表达质粒pGADT7GH ,构建酵母双杂交随机肽库质粒pGADT7GH RP并检验其库容。结果　扩增获得编码 16肽的随机DNA片段 ,并成功将随机DNA片段克隆入酵母表达质粒pGADT7GH ,与GAL4AD形成融合蛋白 ,其库容为 1 2 8× 10 7。

摘要：目的设计并制备有效干扰细胞内锌指蛋白A20（简称A20）表达的基因沉默载体，初步用于观察A20基因沉默对细胞炎症应答的影响。方法人工设计并合成A20特异性RNA干扰寡核苷酸片段（ASRF），构建A20基因沉默载体pSUPER～EGFP—A20 siRNA。采用基因转染技术使人单核细胞株THP1感染pSUPER—EGFP—A20 siRNA，用适时荧光定量PCR技术鉴定转染细胞A20基因的沉默率；用ELISA测定细胞核内NF—κB活性及培养上清液中的TNF—α水平。结果在设计的2条ASRF中，以M59465—385R／F对细胞A20表达的抑制效果最佳，基因沉默率达83．86％。初步应用表明，A20基因沉默后THP1内NF—κB活性水平增加了78．13％，释放的TNF—α增加了49．30％。结论成功得到了高效A20基因沉默载体，初步应用研究提示A20表达的意义在于下调细胞炎症应答程度。

摘要：背景:清道夫受体(scavengerreceptor,SR)和CD14与内毒素性肺损伤密切相关,进一步揭示其表达变化规律及其与肺损伤的关系,有助于深入阐明创伤、感染后肺脏炎症反应失衡的受体机制。目的:探讨创伤及合并内毒素攻击时肺泡巨噬细胞CD14和SR的表达及其效应。设计:随机对照的实验研究。单位:解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室。材料:实验于2001-08/11在第三军医大学野战外科研究所(国家重点实验室)完成。选用63只昆明种小鼠及其肺泡巨噬细胞。方法:实验动物随机分为对照组、创伤组和创伤合并内毒素组。采用双侧股骨骨折合并内毒素攻击小鼠模型,内毒素(5mg/kg)于骨折后1h经小鼠尾静脉注入,检测创伤及合并内毒素攻击后小鼠肺泡巨噬细胞CD14和SR的表达变化。结果:创伤后6h,肺泡巨噬细胞CD14和SR分别呈上调和下调表达,合并内毒素攻击后CD14和SR进一步发生显著的上调和下调性改变。相关分析显示肺泡巨噬细胞CD14和SR呈负相关关系。结论:创伤及合并内毒素攻击后肺泡巨噬细胞CD14和SR的双向调变可能与肺脏炎症反应由“自控”向“失控”转化有关,有效拮抗CD14和SR的双向调变策略,有助于进一步认识肺损伤及其修复机制。

摘要：目的应用64层螺旋CT研究兔坠落式颅脑减速伤的伤情特点。方法实验用兔36只,包括对照组(6只)和致伤组(30只)。采用自行设计的减速伤致伤装置复制兔坠落式颅脑减速性损伤,致伤组根据不同致伤高度分为Ⅰ组(2.5m)、Ⅱ组(3.5m)和Ⅲ组(7m)。于致伤后3～4h行64层螺旋CT平扫,观察兔颅脑减速伤的CT表现,并与大体和显微解剖学观察结果、高速摄像系统所见进行对照。结果坠落高度越高,兔颅脑损伤越严重;蛛网膜下腔出血是最常见的颅内病灶;脑挫裂伤位于撞击处及对冲部位,以对冲部位更严重;颅底骨折均位于对冲部位。CT平扫可准确显示颅骨骨折,且与高速摄像系统所记录的兔颅脑撞击部位一致。对兔颅脑损伤严重的Ⅲ组,CT平扫基本上显示了所有颅脑损伤情况;Ⅱ组轻度损伤者CT扫描呈假阴性;Ⅰ组颅脑CT表现均为阴性。结论64层螺旋CT平扫可显示重度及部分中度兔坠落式颅脑减速伤的伤情特点,能为颅脑损伤机制的基础研究提供有价值的信息。

摘要：目的为从细胞水平直接观察应力、应变作用后细胞形态和功能的改变,研制计算机控制的培养细胞牵张损伤装置和相应的测试系统。方法应用空气动力学原理,采用微型空气压缩机、电磁阀、压力传感器、程控放大器和模数转换多功能卡研制了体外培养细胞牵张损伤装置,用于实验研究。其致伤参数由计算机精确控制,并采用压力法获取细胞在致伤过程中的应变规律。对培养的新生大鼠大脑皮层星型胶质细胞应用本致伤装置采用不同的条件致伤,检测乳酸脱清酶(LDH)活性和台盼蓝含量,并观察其形态学的改变。结果采用不同的致伤参数可复制出轻、中、重度的细胞损伤模型。结论培养细胞牵张损伤装置及测试系统的各项性能指标均达到设计要求,致伤过程简便、重复性好、结果稳定。新的乳胶膜变形规律检测方法和装置,明显优于国外文献报道的图像处理检测法,满足实验研究的需要。

摘要：目的观察鱼精蛋白对寡核甘酸复合物的缩合效果。方法用不同浓度鱼精蛋白对寡核甘酸进行缩合,凝胶电泳和扫描电镜观测其缩合结果。将设计的双功能肽与鱼精蛋白和寡核甘酸缩合物进行不同浓度配比后转染脐静脉内皮细胞,激光共聚焦显微镜下观察寡核甘酸入胞效果。结果在鱼精蛋白与寡核甘酸质量比达到1.6∶1以上时能够明显促使寡核甘酸缩合,扫描电镜下观察发现优于脂质体LipofetamineTM2000对该寡核甘酸的缩合。当功能肽与鱼精蛋白和寡核甘酸缩合物以质量比1∶5-1∶10配比复合时能够促使寡核甘酸进入脐静脉内皮细胞且转染率较高。结论优化的双功能肽-鱼精蛋白-寡核苷酸复合法,能够有效地缩合寡核苷酸,并促进寡核甘酸向脐静脉内皮细胞胞内转移。

摘要：目的研制一套适用于人体站姿、坐姿平衡功能测量的便携式人体平衡功能测量系统。方法人体姿态发生变化后,运用光电技术和图像处理技术将固定在被试者头部中央视标移动轨迹转化为人体重心移动轨迹,通过对该轨迹的分析,定量测量出人体平衡功能。结果和结论设计出该系统。利用该系统对一志愿者饮酒前后的平衡功能进行测量比较,表明测量结果可靠。

摘要：目的研究兔坠落式颅脑减速伤模型及探讨其损伤机制。方法用自行设计的减速伤致伤装置复制兔坠落式颅脑减速性损伤。致伤装置由滑动导轨、动物固定台车、基座、撞砧及支架等部分组成。55只家兔分为对照组(10只)和致伤组(45只),致伤组又根据坠落的高度不同随机平均分为3组,Ⅰ组2.5m,Ⅱ组3.5m,Ⅲ组7.0m。将兔仰卧固定于动物固定台车上从不同高度坠落,其颅顶部撞击基座上的撞砧,用高速摄像观察兔颅脑减速伤致伤过程。从动物伤后行为、CT影像、大体解剖观察和病理变化等四方面对兔颅脑损伤进行研究。结果Ⅰ、Ⅱ组动物伤后4小时存活9只和6只,Ⅲ组动物致伤后即刻死亡。Ⅰ组CT影像观察和解剖未见颅脑损伤;Ⅱ组致伤后出现颅骨骨折、脑挫伤、硬膜下出血、对冲伤和轻微脑实质出血;Ⅲ组均出现了颅骨骨折、脑挫伤、硬膜下出血、脑实质出血和对冲伤。颅脑减速伤的病理改变主要为出血性脑挫伤。结论坠落高度(减速度)对颅脑损伤的程度有影响,对冲伤在严重颅脑减速伤中尤为明显。

摘要：目的:构建小鼠XBP1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,筛选具有较好干扰效率的小鼠XBP1 siRNA靶序列。方法:针对小鼠XBP1基因特异性序列,设计4个RNAi靶序列及1个阴性对照序列,合成含有正义和反义OligoDNA的互补DNA序列,退火形成双链DNA,并克隆到经AgeⅠ和EcoRⅠ酶切后的pGCL-GFP载体连接产生短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,DNA测序鉴定。由病毒包装系统进行包装,经滴度测定后感染NIH3T3细胞,应用Real-timePCR鉴定干扰效率。结果:PCR鉴定与DNA测序证实合成的寡核苷酸链插入正确,293T细胞测定病毒滴度为1×108TU/ml。Real-timePCR证实XBP1-siRNA-3靶点的干扰效率最高,其干扰效率达到95%以上。结论:成功构建并筛选了小鼠XBP1基因RNAi慢病毒载体,为研究XBP1在巨噬细胞免疫功能调控中的作用奠定了基础。