摘要：背景:近年来,有观点认为原发性肝癌的发生机制可能为肝干细胞分化不全或分化异常所致。目前,肝干细胞研究正处于起步阶段,对人原发性肝癌的"干细胞起源"学说尚需进一步验证。目的:观察原发性肝癌不同病理组织类型中肝干细胞的活化、分布、来源和免疫表达特征。设计:观察对比实验。单位:解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心。对象:实验于2003-09/2004-07在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心完成,选用94例肝细胞癌和12例肝内胆管细胞癌和10例混合型肝癌石蜡包埋组织,同时选用5例肝硬化和4例正常肝组织作为实验对照,均取自病理科存档资料。肝癌组织均为患者首次肝癌切除手术时采取,包括肿瘤组织和癌旁组织,患者均无化疗和放射治疗史,并对受检项目知情同意。实验主要抗体均购自SantaCruz公司。方法:采用苏木精-伊红染色、免疫组织化学SP方法(检测的免疫标志有鼠抗人细胞角蛋白19单克隆抗体、鼠抗人细胞角蛋白7单克隆抗体、鼠抗人细胞角蛋白8&18单克隆抗体、鼠抗人c-kit单克隆抗体、鼠抗人Thy-1单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体)观察各病变类型肝干细胞免疫标志表达情况。主要观察指标:各病变类型肝干细胞免疫标志表达情况。结果:在原发性肝癌不同病理组织类型中干细胞免疫标志均有不同程度的表达,均可观察到肝干细胞向肝癌细胞的转化,以混合型肝细胞癌中肝干细胞免疫表型表达率最高(P<0.05)。正常组和肝硬化组干细胞免疫表型特征为阴性。结论:不同病理组织类型的肝癌组织中均存在不同分化状态和不同来源的肝干细胞。

摘要：目的:构建小鼠CDC6基因的RNAi真核表达载体PGCsilencer TM u6/Neo/GFP/RNAi,观察其转染小鼠肝细胞前后CDC6的表达变化。方法:根据GenBank中CDC6的序列,设计特异性siRNA序列,将模板序列克隆至PGCsilencer U6/Neo/GFP质粒中,通过测序鉴定后,用脂质体将重组子转染至正常小鼠肝细胞中,用RT-PCR检测CDC6的mRNA的表达及用Western blot方法检测CDC6蛋白水平的表达,并比较转染前后其表达水平的变化。结果:经测序,模板序列与设计序列完全正确,经过RT-PCR及Western blot方法检测,转染干扰质粒后,小鼠肝细胞中CDC6表达在mRNA及蛋白水平都有明显的下降。结论:成功构建了CDC6基因的RNAi真核表达载体并转染至小鼠肝细胞中,为下一步探讨CDC6在肝再生的作用奠定了基础。

摘要：目的观察高含量支链氨基酸对接受肝部分切除术患者早、中、后期营养状态改善的作用。方法该实验采用前瞻、随机、单盲、对照实验设计,筛选患者共43例,随机分为2组,实验组(n=21)使用高含量支链氨基酸氨基酸制剂,术后早期采用全静脉营养,待肠道功能恢复后逐步改为高含量支链氨基酸肠内营养治疗,后期每天口服定量高含量支链氨基酸作营养增补剂;对照组(n=22)使用普通氨基酸氨基酸,营养方式、热卡、含氮量计算与实验组相同。同时也保证术后两组间的其余治疗相同。两组共使用营养制剂60d。在手术后第7天、第14天、第21天、第30天、第60天测量体质量、营养指标,并对比分析两组指标的变化。结果实验组和对照组的各项指标均呈现先下降后上升的趋势,且两组指标变化趋势大体一致(自身对照),但是实验组的结果总是优于对照组。其中清蛋白、总胆红素、凝血酶原时间、转铁蛋白在术后第7天两组间差异有显著统计学意义;而体质量、前清蛋白、血红蛋白、淋巴细胞计数则在术后第14天差异才开始表现出显著统计学意义。体质量、白蛋白、前白蛋白、血红蛋白、转铁蛋白的组间统计学差异一直持续到术后第30天;淋巴细胞计数的组间差异持续到术后第21天;总胆红素、凝血酶原时间的组间差异持续到术后第14天。术后60天各项检测指标均显示实验组结果均优于对照组,但差异已无显著的统计学意义。结论高支链氨基酸在肝切除术后早、中期能显著地改善术后患者的营养状况和肝功能,有利于患者康复。