摘要：目的 评价保护性毛刷盲取技术(BPSB)结合细菌定量培养(QC)在呼吸机相关性肺炎(VAP)病原学诊断中的价值。方法 采用前瞻性、自身对照临床研究设计,研究时间自1999年6月-2002年6月,研究人群为54例机械通气患者的125例次临床拟诊VAP发作,同步对照评价了BPSB-QC和纤维支气管镜引导保护性毛刷(FOB-PSB)-QC两种技术在106例次(48例)确诊VAP发作中的诊断准确度及一致性,两种技术分离细菌的诊断阳性截断点设定为≥103cfu/ml。结果 106例次(48例)临床拟诊VAP发作被确诊(84.8％),BPSB-QC和FOB-PSB-QC诊断技术的准确度分别为80.8％(101/125例次)和83.2％(104/1 25例次),二者完全一致为75.2％(94/125例次),以分布于阳性截断点103cfu/ml上下来比较,诊断一致率为84.8％(106/125例次),不同病变分布的诊断阳性率和两种诊断技术在不同病变分布的诊断阳性率比较均无显著的统计学差异。结论 BPSB-QC和FOB-PSB-QC诊断技术有相似的诊断准确度和同等的可行性,且BPSB操作简单、安全性高和费用低,可作为首选的QC取材技术。

摘要：目的探讨微小RNA(micro RNA,miRNA)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)发生风险的关系。方法通过生物信息学方法筛选出13个位于miRNA基因序列上的潜在功能性的SNPs位点。采用病例-对照研究设计,纳入新发NSCLC患者626例,对照为736例同期门诊体检人群。提取研究对象外周血细胞基因组DNA,采用SNPscan^(TM)对筛选的13个SNPs位点进行基因分型,多因素Logistic回归分析SNPs与肺癌发生风险的关联性和关联强度。结果发现3个SNPs,即rs62085660(位于miRNA AC145343.1)、rs11597888(位于miRNA AL391839.1)和rs16867808(位于miRNA AL021918.2)与NSCLC发生风险显著相关,但此种关联只限于特定的亚组人群。rs62085660(C/G)位点与肺鳞癌的发生风险相关(加性模型,校正OR=0.79,95%CI=0.62~1.00,P=0.049;显性模型,校正OR=0.72,95%CI=0.53~0.98,P=0.035)。rs11597888(G/A)和rs16867808(T/C)位点只在吸烟人群中与肺癌易感性相关(rs11597888:显性模型,校正OR=1.42,95%CI=1.03~1.96,P=0.033;rs16867808:加性模型,校正OR=0.58,95%CI=0.40~0.84,P=0.004,显性模型,校正OR=0.53,95%CI=0.35~0.81,P=0.004)。结论 rs62085660位点与肺鳞癌发生风险相关,rs11597888位点和rs16867808位点与吸烟相关性肺癌发生风险相关。

摘要：目的研究纳米载体Ac-αCD携带的Bcl-xl反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASON)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary arterial smooth muscle cells,RPASMCs)增殖和凋亡作用。方法设计合成5'端标记Cy3的Bcl-xlASON,由纳米载体Ac-αCD携带。实验分3组:纳米载体携带的Bcl-xl ASON组(ASON-NPs组)、单纯纳米载体组(NPs组)和空白对照组,分别使用纳米载体Ac-αCD携带的Bcl-xl ASON、纳米载体Ac-αCD和培养液处理RPASMCs 48 h,激光共聚焦显微镜观察RPASMCs对纳米载体携带的Bcl-xl ASON的摄取情况;RT-PCR、Western blot检测Bcl-xl的mRNA和蛋白表达;MTT检测处理后细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果激光共聚焦显微镜下可见ASON-NPs组细胞质内大量呈颗粒状均匀分布的红色荧光物质,空白对照组和NPs组细胞细胞质内未见红色荧光物质;ASON-NPs组处理的RPASMCs的Bcl-xl mRNA和蛋白表达显著低于空白对照组和NPs组(P<0.05);ASODN-NPs组、NPs组、空白对照组细胞抑制率分别为:(53.61±3.02)%、(6.30±1.90)%、(1.40±0.62)%,凋亡率分别为:(53.04±2.09)%、(10.98±2.03)%、(2.19±0.11)%、ASON-NPs组和NPs组细胞抑制率、凋亡率均显著高于空白对照组(P<0.01),ASON-NPs组均显著高于NPs组(P<0.01)。结论纳米载体Ac-αCD携带的Bcl-xl反义寡核苷酸能被RPASMCs有效摄取,从而抑制其增殖,促进凋亡。

摘要：目的探索如何抑制嗜酸性粒细胞的趋化作用,选择β-趋化因子巨噬细胞炎性蛋白4(MIP4)的突变体(Met-MIP4)作为趋化因子受体3的拮抗剂,将Met-MIP4基因在原核细胞中进行非融合表达。方法设计MIP4基因的PCR引物并进行氨基酸突变,将MIP4N末端的丙氨酸突变为蛋氨酸。以正常人肺cDNA文库为模板,PCR方法获取Met-MIP4基因。克隆入载体pUC19,测序验证序列已得到突变。将正确的基因插入到非融合表达载体pBV220中进行表达。结果PCR产物为220bp左右的片段,连接入pUC19质粒后测序验证获得正确突变。构建的pBV220非融合表达载体在大肠杆菌DH5-α中表达,经Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳显示有大小约8×103的非融合蛋白表达。结论成功突变并克隆了β-趋化因子MIP4基因。Tricine-SDS-PAGE表明,非融合的Met-MIP4突变体已得到表达,为进一步研究其对哮喘的生物治疗奠定了基础。

摘要：目的研究针对结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞株(humanrenaltubularepithelialcell,HKC)合成胶原的抑制作用。方法设计和构建带有U6启动子的能产生针对CTGF的shRNA的RNA干扰表达质粒,转染至受TGFβ1刺激的HKC,以RT-PCR和Westernblot检测HKC转染前后CTGF表达,以3H脯氨酸掺入法检测总胶原合成量。结果和仅受TGFβ1刺激组相比,转染了RNA干扰表达质粒的受TGFβ1刺激的HKCCTGFmRNA和蛋白表达明显减弱,总胶原合成量下降(P<0.01)。结论针对CTGF的短发夹RNA能明显抑制TGFβ1诱导HKC合成胶原。