摘要：目的构建HPV16 E7(E7)真核表达载体,观察E7过表达对A431细胞增殖和侵袭的影响。方法从Caski细胞中抽提总RNA,针对E7序列设计特异引物,进行逆转录和聚合酶链式反应扩增得到E7cDNA。应用基因工程方法将得到的PCR片段克隆至真核表达载体pEGFP-N1的多克隆位点。重组质粒经双酶切鉴定和测序后,使用LipofectamineTM 2000转染A431细胞。Western blot检测E7在细胞中的表达。WST-1和Transwell系统分别检测细胞增殖和侵袭能力。流式细胞术检测转染前后细胞周期的变化。ELISA检测TGF-β分泌情况。结果经酶切、测序鉴定,E7基因正确插入到pEGFP-N1多克隆位点,获得pEGFP-E7;Western blot检测结果显示:与未转染组相比,转染组E7蛋白高表达。过表达E7的A431细胞增殖和侵袭能力均显著增强,细胞周期中S期细胞数量增多,G1期细胞数量相对减少。TGF-β分泌增多。结论E7过表达可改变细胞周期,提高皮肤鳞癌细胞的增殖和侵袭能力,而分泌增多的TGF-β并不能抑制肿瘤的增殖和侵袭。

摘要：目的建立2个快速、同步检测脲原体***和***的分子信标PCR反应体系。方法依据脲原体尿素酶B基因序列,设计分别针对***和***的特异性分子信标探针及引物,建立2个分子信标PCR反应体系。通过对脲原体标准株扩增后荧光强度的检测、分子信标S/B值测定以及进行特异性和敏感性实验,对2个体系进行评价并设定2个分子信标PCR反应体系的cutoff值。结果***和***的分子信标S/B值均>20。2个分子信标PCR体系能够检测***、***标准株DNA,与其他14株细菌(包括5株有尿素酶细菌)无交叉反应,检测限度均为10拷贝/μl的重组质粒DNA。***分子信标PCR反应体系的cutoff值为3.89,***分子信标PCR反应体系的cutoff为5.32。结论2个分子信标PCR反应体系能够快速、同步进行脲原体的分种鉴别,具有高度特异性和灵敏性。