摘要：为合成与 TF基因启动子区切应力反应元件 ( Shear stress responsive element,SSRE)形成三链 DNA的硫代磷酸酯寡核苷酸 ( Triple helix- forming phosphorothioate oligodeoxynucleotides,TFO- ps) ,探讨其对内皮细胞TF基因表达及 TF促凝活性的影响。我们设计反向 TFO ( T2 1GTa)序列 ,采用固相亚磷酰胺三酯固相法合成TFO。在 TFO的 3′末端进行硫代磷酸酯修饰。应用电泳迁移分析 ( Electrophoretic mobility shift assays,EMSA)观察寡核苷酸和硫代脱氧寡核苷酸的亲和性。在 ECV3 0 4内皮细胞株观察 γ- 32 P标记硫代磷酸酯 TFO的细胞摄取及其对 TF基因表达的影响。结果显示 ,TFO- ps( T2 1Gta- ps)与靶序列能形成三链 DNA,其 Kd值为 3 .6× 10 - 1 0 M。在内皮细胞株 ECV3 0 4细胞 ,TFO- ps( T2 1GTa- ps)的细胞吸收率为 11.65 % ,主要分布在核沉淀 ,约占吸收总量的77.2 5 % ,显著降低内皮细胞 TF基因 m RNA表达及 TF蛋白合成的平均光密度 ( AOD)值 ,显著降低 TF的促凝活性。以上结果表明 ,TFO- ps( T2 1GTa- ps)具有较好的抗凝活性 ,其机制与抑制

摘要：目的检测针对组织因子(TF)基因启动子区切应力反应元件(shear stress response elem ent,SSRE)设计的反向硫代形成三链DNA的寡核苷酸(antiparallel phosphoroth ioate trip lex-form ing oligonuc leotide,apsTFO)对大鼠颈总动脉狭窄处内皮细胞TF表达的影响。方法采用硅胶管套扎法建立SD大鼠颈总动脉中段重度狭窄模型。应用原位杂交和免疫组织化学方法结合图像分析系统测定狭窄段内膜TF,Egr-1和Sp1的mRNA表达及蛋白合成。术前0.5 h在尾静脉注射0.5 ***-1针对TF的SSRE结合位点设计合成的GT20-apsTFO,GT20-psTFO,GT21-apsTFO及部分绿色荧光素(FITC)标记的apsTFO,术后4 h检测血管内皮细胞内的TFO,术后6 h检测TFO对TF的抑制效果及对Egr-1和Sp1的影响。结果给予TFO后,在血管内皮细胞核中可见荧光分布。GT20-apsTFO和GT21-apsTFO对TF的mRNA表达和蛋白合成有显著性抑制(P0.05)。GT20-apsTFO,GT20-psTFO和GT21-apsTFO对Egr-1及Sp1的mRNA表达和蛋白合成无抑制作用。结论apsTFO能部分进入血管内皮细胞并在一定程度上抑制TF基因的表达,而不影响Egr-1和Sp1基因的表达。

摘要：背景:近年研究发现移植的骨髓间充质干细胞能向颅内创伤、脑卒中、炎症和变性疾病等病灶部位迁移,进而发挥治疗作用,但对于其向病灶定向迁移的具体机制还不十分清楚。目的:探讨基质细胞衍生因子1及其受体CXCR4在移植的骨髓间充质干细胞趋向缺血脑组织迁移中的作用。设计、时间及地点:细胞学体内实验,于2008-02/2009-02在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室进行。材料:骨髓标本取自解放军第三军医大学附属新桥医院血液科收治的15～40岁正常或原发病未累及骨髓患者,三四月龄健康雄性SD大鼠72只由解放军第三军医大学野战外科研究所实验动物中心提供。方法:密度梯度离心贴壁筛选法分离纯化、体外培养人骨髓间充质干细胞。54只大鼠参照Nagasawa线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,剩余18只作为假手术组,仅插入线栓10mm。模型组及假手术组大鼠各取9只,分别于造模后第2,4,8天,采用Real-timePCR和免疫组织化学法定量分析缺血脑组织基质细胞衍生因子1表达变化。剩余36只脑缺血再灌注模型鼠随机分为细胞移植组、溶液对照组,18只/组,于再灌注后24h分别从尾静脉缓慢注入1mL人骨髓间充质干细胞悬液(含2×109L-1个细胞)或1mLPBS。主要观察指标:人骨髓间充质干细胞CXCR4 mRNA和蛋白的表达,缺血再灌注后脑组织基质细胞衍生因子1mRNA和蛋白表达变化,免疫组织化学检测人骨髓间充质干细胞向缺血脑组织的迁移和分布。结果:RT-PCR结果发现人骨髓间充质干细胞表达CXCR4 mRNA,免疫细胞化学染色发现CXCR4主要表达于人骨髓间充质干细胞的胞膜和胞浆。脑缺血再灌注损伤后2,4,8d,趋化因子基质细胞衍生因子1mRNA水平呈上升趋势,与假手术组比较差异有显著性意义(P<0.05)。经静脉移植的人骨髓间充质干细胞定向迁移到脑损伤区域,并大量分布于基质细胞衍生因子1高表达的缺血半暗区,损伤侧大脑半球人骨髓间充质干细胞数量显著高于对侧半球(P<0.01)。结论:基质细胞衍生因子1及其受体CXCR4参与并促进人骨髓间充质干细胞向脑缺血再灌注损伤区的迁移。

摘要：目的筛选靶向沉默大鼠星形胶质细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的短链干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)。方法建立大鼠星形胶质细胞培养模型,根据siRNA原理设计、构建、合成、纯化和定量4种靶向大鼠VEGF的siRNA(T1,T2,T3,T4),应用琼脂糖凝胶电泳观察其纯度。将合成的4种siRNA转染至星形胶质细胞,应用实时荧光定量RT-PCR检测星形胶质细胞VEGF mRNA含量,应用免疫细胞化学及Western蛋白印迹法半定量星形胶质细胞VEGF的表达。结果合成的4种siRNA纯度高。转染T1、T2、T3后,培养的星形胶质细胞VEGF mRNA含量、VEGF表达与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。而转染T4 siRNA的星形胶质细胞其VEGF mRNA、VEGF的表达与对照组相比显著下降(P<0.01)。结论筛选出的T4 siRNA对培养的星形胶质细胞VEGF的表达起特异性抑制作用,其机制与T4siRNA使VEGFmRNA的含量减少有关。

摘要：背景：移植的骨髓间充质干细胞能向损伤病灶部位定向迁移，进而发挥治疗作用，但关于其向病灶定向迁移的具体机制还不十分清楚。目的：观察低氧对人骨髓间充质干细胞趋化因子受体CXCR4和CX3CIR1表达的影响。设计、时间和地点：细胞学体外观察，于2008-02／2009-02在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室进行。材料：骨髓标本取自解放军第三军医大学附属新桥医院血液科收治的15-40岁正常或原发病未累及骨髓患者。方法：穿刺采集骨髓，密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化入骨髓间充质干细胞。取生长良好的第3代细胞接种于25cm。培养瓶中，培养至70％-80％融合后，置于37℃、体积分数分别为3％O2、5％CO2，92％N2的饱和湿度孵育箱内培养48h，以常氧培养作为对照。主要观察指标：相差显微镜下观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞表面标记物，Realtime荧光定量PCR法检测CXCR4和CX3CR1 mRNA的表达，免疫细胞化学和Westernblot法检测CXCR4和CX3CR1蛋白的表达。结果：体外分离纯化的人骨髓间充质干细胞呈成纤维细胞样，培养12-14d达90％汇合，呈极性排列，集落呈漩涡状：CD105和CD29阳性率分别为99．38％和99．13％，而CD14，CD45均呈阴性表达。在体积分数为3％的02培养条件下，人骨髓间充质干细胞CXCR4和CX3CR1mRNA的表达分别是常规培养条件下的2．130倍和2．361倍，CXCR4和CX3CR1蛋白的表达分别是常规培养条件下的1．69倍和1．93倍，CXCR4和CX3CR1主要表达于人骨髓间充质干细胞的胞膜和胞浆。结论：体积分数为3％的02低氧条件能够促进人骨髓间充质干细胞趋化因子受体CXCR4和CX3CR1mRNA及蛋白的表达，这可能是体内移植的骨髓间充质干细胞向损伤病灶定向迁移的机制之一。

摘要：背景:机体炎性反应与抑郁性神经症的发病有十分密切的联系,机体炎症的早期反应蛋白血清C-反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP)水平变化对氟哌噻吨美利曲辛(商品名黛力新,丹麦***公司)治疗抑郁性神经症是否有影响?目的:探讨血清CRP含量对氟哌噻吨美利曲辛治疗抑郁性神经症的影响。设计:以诊断为依据的半随机病例对照研究。地点和对象:资料收集地点为新桥医院神经内科门诊和病房。确诊为抑郁性神经症的患者89例,男34例,女55例,年龄19～65岁,平均45.2岁,病程6月～1年。对照组50例为同期正常健康志愿者。干预:患者在确诊后,应用氟哌噻吨美利曲辛,每天早晨、中午各1片。应用TurboxR特定蛋白分析系统(芬兰)以散射比浊法测定治疗前空腹血清CRP水平;并采用汉密尔顿抑郁(HAMD)量表,分别于治疗前及治疗后2周、2月进行评定。主要观察指标:血清CRP水平;HAMD评分。结果:抑郁性神经症组CRP异常率为36%(32/89),其平均血清CRP水平犤(10.32±6.38)mg/L犦高于对照组犤(6.24±1.74)mg/L犦(t=5.121,P=0.000),其中CRP正常组与对照组相比差异无显著意义(P>0.05),而CRP增高组与对照组相比,其差异有极显著意义(t=18.275,P=0.000)。对照组HAMD评分均在17分以下。黛力新治疗前,CRP正常组与CRP增高组HAMD评分无显著差异。

摘要：背景:细胞凋亡是缺血再灌注损害的重要形式之一,白细胞介素1β转化酶是细胞凋亡关键调节因子,其激活可导致蛋白降解引起细胞凋亡。目的:观察在脑缺血再灌注过程中白细胞介素1β转化酶基因的表达及其与细胞凋亡的关系,探讨其在调控脑缺血后细胞凋亡中的作用。设计:随机对照试验。材料:实验于1996-03/2000-12在解放军第三军医大学神经科学中心完成。选择成年W istar大鼠64只,随机分为2组,脑缺血再灌注组:采用四血管阻塞全脑缺血模型,缺血30m in 后再灌注,根据处死时间分为再灌注3,6,12,24,48,72h 和7d 共7个时间点,每个时间点8只。假手术组8只,仅分离,未夹闭双侧颈总动脉。方法:假手术组和脑缺血再灌注组再灌注后每个时间点随机选取4只大鼠采用免疫组化和原位杂交检测。其余4只用于原位末端标记检测。主要观察指标:①各组大鼠脑组织白细胞介素1β转化酶蛋白和m RNA的表达。②各组大鼠脑组织神经细胞凋亡情况。结果:64只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠脑组织白细胞介素1β转化酶m RNA 和蛋白的表达:假手术组脑组织多数脑区白细胞介素1β转化酶mRNA 和蛋白有少量表达,脑缺血组白细胞介素1β转化酶m RNA 和蛋白在神经元内及小胶质细胞均有表达,分布在大脑皮质、小脑蒲肯野细胞、海马及皮质下白质。在缺血再灌注12h 后白细胞介素1β转化酶基因表达增加,48～72h 为表达高峰,第7天表达下降。②各组大鼠脑组织神经细胞凋亡情况:细胞凋亡在缺血再灌注12h 出现犤(49.4±6.8)个/切片犦,高峰时间在72h犤(228.6±29.8)个/切片犦,且白细胞介素1β转化酶蛋白和m RNA 的表达在分布上与神经细胞凋亡的发生有显著相关性(r=0.89,0.68,P <0.05)。结论:①白细胞介素1β转化酶蛋白和m RNA 的表达增加,与缺血后细胞凋亡有显著相关性,从时间上支持白细胞介素1β转化酶表达是导致细胞凋亡的重要因素。②在脑缺血再灌注过程中大脑皮质、海马及基底节区是凋亡细胞的多发部位,而这些部位也是白细胞介素1β转化酶表达增高的区域,进一步证明缺血后白细胞介素1β转化酶的表达参与神经细胞凋亡的调节。

摘要：背景:紧张、焦虑、抑郁是偏头痛的重要诱发因素,而紧张、焦虑、抑郁与患者不合理信念、不正确的应付策略密切相关。药物疗法是目前治疗偏头痛的主要方法,但其不能改变患者的不合理信念,从而减少头痛诱发因素的产生。目的:观察药物疗法和合理情绪行为疗法对偏头痛的近远期疗效,以期为偏头痛患者提供更为安全有效的干预措施,从而改善其远期生活质量。设计:以偏头痛患者为研究对象,健康人群为对照组的观察对比研究。单位:一所市级医院的心理咨询门诊(现已撤消)。对象:研究对象为289医院心理咨询门诊1999-03/2001-10的偏头痛患者,共86例,其中男34例,女52例,年龄16～48岁,平均35岁,病程2～11年。采用查表法将86例患者随机分为合理情绪行为疗法组和药物组各43例,两组患者年龄、性别、病程、病情、文化程度差异无显著性意义。另设30例健康体检者作为对照组,其中男12例,女18例,平均36岁。方法:合理情绪行为疗法组采用合理情绪行为疗法;药物组给予阿米替林50～100mg/d,尼莫地平60mg/d,口服,治疗12周,观察24周。比较两组患者偏头痛效疗评分及治疗前后事件相关电位P300,90项症状自评量表评分。主要观察指标:两组患者偏头痛疗评分及治疗前后P300,90项症状自评量表评分比较。

摘要：医学生实习教学档案管理是实习质量控制的重要环节,有助于教学管理,提高实习教学质量。实习档案的设计要全面、细化,专人负责,及时归档,教学档案的整理和归档要制度化。教学档案的信息化管理是将来的发展方向。

摘要：提高医学生实习教学质量是亟待解决的重要问题。通过计算机和网络技术建立实习质量控制平台,实现网络实习信息登记、提交批改作业、出科客观量化考核,有助于实现对实习教学的实时管控,对实习教学质量的客观量化评估,实现教学档案的信息化管理。