摘要：临床见习课是临床医学教育的重要环节。在呼吸科临床见习中常遇到学生学习动机明显减弱,敷衍了事,回避临床操作等问题,笔者着重从如何激发学生学习动机着手,采用立志教育、帮助学生明确学习目标、改变教学模式,提高教学的艺术性和趣味性等方式,取得了良好的教学效果。

摘要：目的构建凋亡抑制蛋白Livin两种异构体(Livinα和β)真核细胞表达载体pcDNA3.1-Livinα和pcDNA3.1-Livinβ。方法利用分子克隆技术,首先设计合成扩增Livin基因异构体全长cDNA序列的特异性PCR引物,以肺腺癌SPC-A1细胞总RNA为模板,RT-PCR获得Livin基因异构体全长cDNA序列,TA克隆将Livin全长cDNA序列克隆到T载体上,用限制性内切酶HindⅢ和XbaⅠ双酶切取所需目的片段,然后将该片段插入真核表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,最后对产生的重组子进行双酶切、PCR鉴定,并经过测序证实后,构建成为Livin基因异构体表达载体(pcDNA3.1-Livin)。电穿孔法获得稳定表达Livinα和β的A549细胞克隆,Westernblot验证Livin蛋白在转染细胞中的表达情况。结果成功获得Livinα和Livinβ全长cDNA序列,并克隆到真核表达载体pcDNA3.1上;基因转染后,阳性细胞分别表达Livinα和β。结论Livin基因两种异构体真核表达载体的构建及在细胞中的表达鉴定,为进一步研究Livin异构体功能及在肺癌细胞中的抗凋亡效应奠定了基础。

摘要：目的介绍新型组合式腰椎间融合器的设计原理和构型,建立羊腰椎体间融合器融合模型,对其进行体内融合评价,并探讨模型建立的手术要点和评估方法。方法采用聚醚醚酮(polyetheretherketone,PEEK)材料研制1种具有组合式构型的腰椎间融合器,对16只羊建立侧前方手术入路的腰椎体间融合器融合模型,术中、术后分别进行生命监测、医疗管理、影像学评估。结果新型融合器构型独特,羊融合模型手术顺利,实验动物全部存活,术后影像评估融合效果良好,动物模型满足了实验要求。结论新型组合式腰椎间融合器显示有良好的融合效果,通过腰椎侧前方手术入路,能够建立实验动物安全、有效的腰椎融合器模型。

摘要：目的:介绍新型组合式腰椎间融合器的设计原理和构型,并对其进行生物力学评价。方法:采用聚醚醚酮材料研制一种具有组合式构型的腰椎椎间融合器,在新鲜小牛脊柱功能节段标本上测试正常组(完整状态)、椎间盘摘除组(不稳组)、自体植骨融合组、传统PEEK融合器组(与新型融合器材料大小形状相同)、新型PEEK融合器组合组(融合器在组合状态)、新型PEEK融合器分开组(融合器在分开状态)在前屈、后伸、左、右侧屈、左右旋转状态下的活动角度值(Range of Motion,ROM)和压缩载荷和拔出力(分别在装载植骨、未装载植骨时)。结果:(1)新型分开组与正常组、不稳组和植骨组在前屈、后伸、左右侧弯4种状态比较,P0.05,无统计学差异;(3)新型分开组左、右旋转状态与正常组和植骨组相比,P>0.05,无显著统计学意义,但与传统融合组、新型组合组相比,ROM数值增大,P<0.05,有统计学差异。(4)新型融合器分开组在未植骨和植骨时的压缩载荷值大于传统融合器组、新型融合器组合组,但无统计学差异;(5)新型融合器分开组拔出力在植骨和未植骨时均低于传统融合器组和新型融合器组合组,但无统计学差异。结论:新型组合式腰椎间融合器体外生物力学实验显示具有良好的植入运动稳定性和抗压缩载荷、抗拔出性能,能满足临床植入的生物力学要求,尤其是微创脊柱外科手术中。

摘要：目的采用纳米技术和分子信标(MB)技术,研究纳米壳聚糖(CS)作为miR-155 MB载体用于肺癌细胞成像的效果。方法设计并合成锁核酸修饰的miR-155 MB,采用自组装方法合成纳米壳聚糖分子信标复合物(CS-MB)并对其抗DNaseⅠ特性、粒径大小、zeta电位等理化性质进行检测。以CS作为载体转染miR-155 MB,激光共聚焦检测miR-155 MB对肺癌细胞中的miR-155的识别能力并进行成像,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)进行进一步验证,以随机序列分子信标(RS MB)作为阴性对照。结果按照7:1的质量比合成的CS-MB,其包封率高,能抵抗DNaseⅠ的降解,粒径小,带正电荷,适合基因转染。CS转染miR-155 MB后可在肺癌细胞中看到较强的红色荧光,RS MB组未检测到荧光信号(P<0.05),且荧光信号强弱趋势与实时荧光定量PCR检测的miR-155表达趋势较一致。结论 CS可作为miR-155 MB载体检测肺癌细胞中miR-155的表达并进行肺癌细胞成像,为肺癌的诊断提供了新思路和新技术。

摘要：目的　研究人 0 3kb的AFP启动子序列对EGFP在人肝癌细胞中表达的影响。方法　通过设计含有特定酶切位点的引物 ,选择性地从人基因组中扩增出人甲胎蛋白启动子 (AFPpromoter)序列 ,分别构建含有AFP启动子序列和增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)及AFP启动子序列和DTA基因的真核表达载体pAF EGFP、pAF DTA ;将pAF EGFP转染HepG2、SMMC 772 1及NIH3T3后进行荧光强度检测。结果　转染pAF EGFP质粒细胞的EGFP表达量在HepG2细胞中明显高于SMMC 772 1、NIH3T3细胞 ,组间差异显著 (P <0 0 1)。结论　AFP启动子可以特异性地启动它后面的目的基因在AFP阳性的细胞中高效表达。

摘要：目的制作哺乳动物micro RNAs(miRNAs)检测微阵列,筛选乳腺癌miRNAs表达谱并进行初步分析。方法利用已知的人及小鼠的miRNAs序列,设计了496条探针,制作miRNAs微阵列并验证其可靠性;培养乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A,分别抽提细胞总RNA,分离小分子RNA,经T4RNA连接酶荧光标记后与微阵列杂交,通过芯片扫描和数据分析,获得乳腺癌miRNAs表达谱。结果成功制作哺乳动物miRNAs微阵列,筛选获得57个乳腺癌相关miRNAs,其中,29个为低表达,28个为高表达。结论建立了哺乳动物miRNAs检测微阵列的技术平台,并筛选到乳腺癌miRNAs表达谱,为进一步研究其在乳腺癌发病机制中的作用打下基础。

摘要：目的 观察从出生至50天的大鼠视皮层中N-甲基-D-天门冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor, NMDAR)功能亚单位NR2B的表达变化,为研究视觉刺激对视皮层NR2B的表达调控机制作准备。设计 实验性研究。研究对 象 30只新生正常健康纯种Wistar大鼠。方法 30只大鼠随机分为10组,每组3只,正常饲养,分别于出生后第0、5、10、15、 20、25、30、35、40、50天处死,大鼠脑视皮层行30μm厚冠状冰冻切片,应用免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合 物(streptomycin-avidin-biotin-peroxidase complex,SABC)法显色,显微镜观察NR2B的表达情况并进行图像分析。主要指标 平均光密度(average optical density,AOD)与综合光密度(integrated optical density,IOD)。结果 NR2B在出生时的视皮层中 即已存在,之后呈逐渐上升趋势,至出生后第15天达到峰值,继而逐渐下降,至第50天趋于平稳。结论 在大鼠出生后0-15 天,NR2B水平呈逐渐上升状态,提示NR2B对出生后大鼠的视觉发育有着重要的生理作用。自第15天大鼠睁眼起,NR2B水平 逐渐下降,表明NR2B的弱化表达与视觉刺激密切相关。

摘要：研制人线粒体DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)表达谱芯片,鉴定芯片的特异性和稳定性,完善芯片的制备和使用程序,优化实验参数,为线粒体功能研究提供物质基础及技术保障。以人mt DNA剑桥序列为标准,设计mt DNA编码的13种mRNA、2种rRNA和9种tRNA基因及蛋白产物定位于线粒体的核DNA(n DNA)编码的5种凋亡相关基因寡核苷酸探针。芯片点样仪点制芯片,进行荧光显示和洗脱,用其检测人宫颈癌上皮Hela细胞和人肾小管上皮Hc1细胞c DNA文库mt DNA编码基因及n DNA编码凋亡相关基因的差异表达情况。所点制的芯片扫描结果显示,样点分布均匀、清晰,规整度好,无漏点、连点。c DNA文库杂交鉴定结果显示,整张芯片荧光信号均匀一致,背景清晰,各基因重复样点杂交结果一致,各质控点能正常显示。成功制备了人mt DNA基因表达谱芯片,完善了该芯片的制备和使用程序,通过初步应用,证明所研制的人mt DNA基因表达谱芯片具有特异性高、稳定性好等优点,可用于不同组织或细胞样本c DNA文库mt DNA基因的差异表达分析。

摘要：目的探讨激光共聚焦检测miR-155 MB对肺癌活细胞中miR-155的识别成像功能。方法设计锁核酸修饰的miR-155分子信标(MB),同时设计不和任何序列结合的随机序列分子信标(RS MB)作为阴性对照;采用液相分子杂交试验验证其灵敏性和特异性,并进一步在肺肿瘤组织水平上验证。以纳米壳聚糖(CS)作为载体转染miR-155 MB,检测miR-155 MB对肺癌细胞中miR-155识别成像功能;同时采用miR-155抑制剂antagomir抑制miR-155的表达后检测miR-155 MB对肺癌细胞中miR-155的识别成像功能。结果液相分子杂交实验中miR-155+miR-155 MB组荧光强度为miR-155 MB组的58倍,RS+RS MB组荧光强度为RS MB组的43倍(P<0.05)。在肺鳞癌、腺癌组织中,激光共聚焦可检测到较强的荧光信号,阴性对照组未检测到明显荧光信号。纳米壳聚糖转染miR-155 MB后,可在肺癌活细胞中检测到较强的荧光信号,antagomir抑制miR-155的表达后,发现荧光信号明显降低(P<0.05)。结论利用分子信标技术可以实现通过识别肺癌活细胞中的miR-155并成像肺癌细胞,从而为发现肺癌细胞并用于肺癌诊断提供了新的理论基础。