摘要：目的初步探讨整合素β1基因在RAW264.7细胞摄脂过程中的作用。方法针对整合素β1基因的不同靶点设计并化学合成3条具有阳性转染率的siRNA,用脂质体法转染RAW264.7细胞,并根据转染的方式将实验分为空白对照组、转染siRNA阴性对照组、脂质体对照组和转染筛选出的阳性转染率最高的siRNA组。用Cy3标记siRNA荧光显微镜下检测转染效率,Real-time PCR筛选沉默效率最高的siRNA,细胞黏附性实验检测细胞黏附性的改变,脂质油红O化学染色法检测细胞的脂质摄取量的变化,上述检测均重复测定3次。结果成功将siRNA转染入RAW264.7细胞,并成功筛选出沉默效率最高(65%)的siRNA为siRNA1,转染后实验组整合素β1mRNA表达明显低于其他组,细胞的黏附性从其他组的70%以上降低到53%,泡沫细胞转化率由其他组的90%以上显著降低到17%,摄脂能力显著降低,与其他组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论整合素β1基因明显影响RAW264.7细胞的摄脂功能,进而影响RAW264.7细胞向泡沫细胞的转化。

摘要：目的研究纳米载体Ac-αCD携带的Bcl-xl反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASON)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary arterial smooth muscle cells,RPASMCs)增殖和凋亡作用。方法设计合成5'端标记Cy3的Bcl-xlASON,由纳米载体Ac-αCD携带。实验分3组:纳米载体携带的Bcl-xl ASON组(ASON-NPs组)、单纯纳米载体组(NPs组)和空白对照组,分别使用纳米载体Ac-αCD携带的Bcl-xl ASON、纳米载体Ac-αCD和培养液处理RPASMCs 48 h,激光共聚焦显微镜观察RPASMCs对纳米载体携带的Bcl-xl ASON的摄取情况;RT-PCR、Western blot检测Bcl-xl的mRNA和蛋白表达;MTT检测处理后细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果激光共聚焦显微镜下可见ASON-NPs组细胞质内大量呈颗粒状均匀分布的红色荧光物质,空白对照组和NPs组细胞细胞质内未见红色荧光物质;ASON-NPs组处理的RPASMCs的Bcl-xl mRNA和蛋白表达显著低于空白对照组和NPs组(P<0.05);ASODN-NPs组、NPs组、空白对照组细胞抑制率分别为:(53.61±3.02)%、(6.30±1.90)%、(1.40±0.62)%,凋亡率分别为:(53.04±2.09)%、(10.98±2.03)%、(2.19±0.11)%、ASON-NPs组和NPs组细胞抑制率、凋亡率均显著高于空白对照组(P<0.01),ASON-NPs组均显著高于NPs组(P<0.01)。结论纳米载体Ac-αCD携带的Bcl-xl反义寡核苷酸能被RPASMCs有效摄取,从而抑制其增殖,促进凋亡。

摘要：随着社会的进步与发展,人们对健康的需求越来越高。这就对我国新药的研究提出了更高的要求,由于我国新药研究水平的相对落后及人才匮乏,在大专院校开设《新药研究与评价》这门课程显得尤为重要。我校已开设《新药研究与评价》多年,本文从这门课程目前的教学现状分析入手,结合新药报批审评政策及相关法规的变化,和培养新药研发后备的人才需要,总结了我们在教学实践中的一些体会。包括教材的重新编写、教学目标的制定、讲授内容和形式的变化、新药案例的分析及自行设计实践活动的实现等多方面内容。教学过程中提高了学生的学习兴趣,也锻炼了学生的创新能力和实践能力,培养了学生的新药创新意识和新药研究的综合素质。

摘要：鉴于药剂学是一门实践性很强的学科,实验课在其课程学习中有着重要的地位,如何提高学生对这门课程的兴趣、增加对知识的理解和掌握一定的实验技能是我们进行实验教学改革的方向。本文结合培养大学生创新能力和实践动手能力的需求,分析了目前药剂实验教学中存在的一些问题,在本科生实验教学中开展了自主创新设计实验尝试,增加了实验课程里的"综合性、设计性、自主性"的因素。本次实验由学生自主设计实验,在指导教师的协助下完成了实验方案的讨论及制定,最终采用了"维生素C泡腾片制备"和"阿魏酸漂浮片制备"两个方案。学生在实验实施过程中,通过不断调整处方和制备工艺,解决了粘冲、崩解时间、漂浮时间不达标等问题。达到了预期的实验目的,有效提高了学生的积极性和综合能力,培养了学生的创新意识和创新能力。同时锻炼了教员起到了教学相长的相互促进作用。

摘要：目的探讨整合素β1对泡沫细胞形成的影响并初步阐明其作用机制。方法针对整合素β1基因设计并化学合成siRNA。RAW264.7细胞与含0.1 g/L ox-LDL的培养基培养,分为空白对照组、转染siRNA阴性对照组(siRNANC)和siRNA组。应用油红O染色观察泡沫细胞形成,胆固醇氧化酶终点法测定细胞内总胆固醇的含量,原子力显微镜观察细胞膜上小凹结构的变化,Western blot和实时荧光定量PCR检测清道夫受体CD36蛋白和mRNA的表达。结果与空白对照组相比,siRNA组油红O染色阳性细胞数明显减少,细胞内总胆固醇/总蛋白显著降低(P<0.01)。原子力显微镜下,siRNA干扰整合素β1基因后细胞未见明显的小凹结构。Western blot及荧光定量PCR结果显示siRNA组CD36蛋白和mRNA表达均显著减少(P<0.01)。结论沉默整合素β1基因能有效减少RAW264.7细胞对ox-LDL的摄取,抑制泡沫细胞的形成,其机制可能与降低清道夫受体CD36的表达和减少细胞膜表面的小凹相关。

摘要：目的化学合成寡核苷酸片段克隆入pIVEX2.3质粒中,构建GCIP-27的原核表达载体并进行原核表达。方法化学合成GCIP-27的全基因序列,定向克隆到pIVEX2.3质粒中构建含有T7启动子的pIVEX2.3-GCIP27原核表达载体并酶切及测序鉴定;pIVEX2.3-GCIP27质粒转染E coli BL21(DE3)pLysE细菌,用IPTG诱导GCIP-27多肽的表达。结果成功构建了pIVEX2.3-GCIP27表达质粒,经测序鉴定结果与设计的完全相符;成功用BL21细菌表达了GCIP-27多肽,GCIP-27占细菌总蛋白的4.96%。结论本实验构建并表达了GCIP-27的重组质粒,为GCIP-27的大量原核表达奠定了基础。

摘要：目的为实现本科生培养目标以及学员创新性科研能力的培养,将PBL教学法应用于药学专业本科学员实习带教中。方法将PBL教学法贯穿于科研选题、文献检索、实验设计及结果分析、论文撰写等全过程中。结果学员思考问题、解决问题的能力得到培养,顺利通过毕业答辩。结论 PBL教学法可有效提高学生创新意识和独立科研工作能力。

摘要：目的:利用正交实验筛选出三七皂苷单体最佳组合并观察其对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)损伤血管内皮细胞的保护作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),加入100mg.L-1OX-LDL诱导单核-内皮细胞黏附,蛋白染料法测定黏附值,通过正交试验设计筛选出三七皂苷单体最佳组合;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放量;硝酸还原法和放射免疫法分别测定HU-VEC培养上清液中一氧化氮(NO)、内皮素(ET)含量。结果:获得最佳PNS单体组合为:Rg1:Rb1:R1为1:10:1(Rg110-5mol/L、Rb110-4mol/L、R110-5mol/L),最佳单体组合显著降低LDH及ET水平,提高NO含量(P<0.01)。结论:由正交实验设计筛选出的最佳单体组合对OX-LDL所致的血管内皮细胞损伤有显著的保护作用。

摘要：阐述了临床医学生药剂学教学的必要性,设计了临床医学生的药剂学教学内容,探讨了各种教学手段的综合运用。开展临床医学生的药剂学教学,对于增加临床医学生的药学知识,提高合理用药水平,具有重要意义。