摘要：目的　构建含有人survivin基因的重组腺病毒载体,为转染树突状细胞构建DC疫苗和基因治疗奠定基础。方法　自行设计一对分别含有KpnⅠ和XholⅠ酶切位点的survivin基因上下游引物,以质粒pCITE/survivin为模板,通过PCR扩增获得survivin基因全部序列。片段回收后经酶切,定向插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack CMV ,获得重组质粒pAdTrack CMV survivin。通过KpnⅠ和XholⅠ双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体pAdTrack survivin转化包含腺病毒骨架质粒pAdEasy 1的BJ5 183菌。同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒用脂质体介导转染2 93细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组的腺病毒。同时将病毒上清转染树突状细胞,通过观察绿色荧光蛋白的表达以及Westernblot分析观察survivin蛋白表达。结果　成功构建了含有人survivin基因的重组腺病毒,病毒滴度为1 65×10 8PFU/ml。在19×10 3 频段附近可见survivin蛋白表达为16 5×10 3 。结论　该重组腺病毒载体的构建及成功转染到树突状细胞内表达,为下一步研究人survivin作为靶抗原及基因治疗奠定了基础。

摘要：目的构建Neuropilins-2(NRP2)基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体。方法以NRP2为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构件重组体,根据GenBank数据库提供的NRP2基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析。重组pGenSil-NRP2载体转染LOVO细胞48 h,收获细胞,采用Western blotting检测其NRP2蛋白表达。结果经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体构建成功。重组体pGenSil-NRP2转染LOVO细胞48 h后NRP2蛋白表达显著降低。结论利用RNAi技术可成功构建抑制NRP2表达的小干扰RNA重组体。

摘要：应用73-Ⅱ及其改进型3.0-1.0mm5种不同口径钛制血管吻合轮分别进行了动物实验观察和临床应用。20条实验犬按术后活杀时间分为3组,通过血管吻合口造影和勒血管试验观察血管通畅情况,检查吻合轮抱合状况,测量血管吻合口的抗拉力、压力强度。临床应用51例,套接各种口径血管113条。结果表明,钛制吻合血管即刻通畅率为100％,1周后为98.89％;抗拉力强度1周时平均为200g,抗压力强度为40kPa。金属钛和人体组织相容性良好,且由于两半轮间根据血管口径设计有不同的空隙,避免了血管壁受压坏死。因此,钛制吻合轮吻合血管是可靠的,快速简便,易于推广应用。文中还对吻合轮与术后感染及放疗的关系进行了探讨。

摘要：目的应用组织芯片技术研究血管内皮生长因子-C(VEGF-C)在乳腺癌中的表达和在乳腺癌区域淋巴结转移中的意义。方法自行设计构建包含乳腺癌、乳腺良性病变和正常对照的组织芯片,结合免疫组化方法检测VEGF-C的表达,分析其与乳腺癌区域淋巴结转移的关系。结果VEGF-C在乳腺癌的肿瘤中心、肿瘤边缘和远处(距肿瘤边界>3cm)腺体的表达阳性率分别为69.4%(68/98)、69.1%(67/97)和52.9%(36/68);在乳腺良性病变和正常乳腺组织的腺上皮细胞则均为阴性表达。在有区域淋巴结转移组中肿瘤中心和肿瘤边缘癌细胞的VEGF-C表达阳性率75.0%(51/68),76.1%(51/67)均显著高于无转移组相应部位25.0%(17/68),23.9%(16/67),P0.05)。结论组织芯片用于多因素比较研究具有高效率、质控好的优点。VEGF-C在人乳腺癌中有高表达,并可能是乳腺癌易发生淋巴结转移的重要因素之一。

摘要：背景:胶质瘤侵袭能力的量化对于指导治疗或筛检肿瘤侵袭因子均有重要意义。在实验研究中有较为成熟的方法进行量化,但尚无很好的临床量化胶质瘤侵袭力的方法。目的:应用磁共振弥散张量成像量化分析脑胶质瘤的侵袭性。设计、时间及地点:量化分析,于2005-10/2007-01在重庆医科大学附属第一医院神经外科、放射科、病理科,解放军第三军医大学附属西南医院放射科完成。对象:选择幕上脑胶质瘤患者20例,男14例,女6例;年龄19～73岁,平均51.3岁。方法:全部患者均进行手术治疗,术中行内减压,获取瘤周水肿区的组织标本,病理检查作肿瘤细胞计数和细胞密度分析,建立肿瘤脑浸润程度的病理标准。主要观察指标:利用磁共振弥散张量成像测量肿瘤实体区、瘤周水肿区、水肿外区、相对正常白质区和对侧白质区5个兴趣区的分量各向异性值和表观平均弥散系数值;将不同兴趣区的分量各向异性值和表观平均弥散系数值与肿瘤病理脑浸润程度作相关分析。结果:①肿瘤分量各向异性值由瘤体区向外呈递增趋势,依次为0.055±0.017,0.107±0.037,0.255±0.064,0.376±0.070,0.396±0.099,其中最大增幅出现在瘤周水肿区和水肿外区之间。②瘤周水肿区的分量各向异性值与胶质瘤病理脑浸润程度呈负相关性,表观平均弥散系数值在瘤周水肿区明显增高,但在其他区域的增减变化无规律。结论:瘤周水肿区分量各向异性值可作为脑胶质瘤侵袭性的量化指标。