摘要：目的　对丙型肝炎病毒 (HepatitisCvirus ,HCV) 5′ 非编码区 ( 5′ Noncodingregion ,5′ NCR)靶向性脱氧核酶 (De oxyribozymes ,DRz)在靶基因调控性荧光素酶表达HepG2细胞中的活性进行评价。方法　根据HCV 5′ NCR中符合 5′…Y↓R… 3′(Y =A/G ,R =U/C)特征的位点及 5′ NCR的二级结构选择靶位 ,采用 10 2 3DRz基序 ,设计并合成HCV靶向性脱氧核酶DRz 2 3 2、DRz 12 7、DRz 84、DRz1以及两端被硫代修饰的DRz(Phosphorothioatedeoxyribozymes ,TDRz)和活性中心区人工突变的硫代DRz(MutantphosphorothioateDRz ,MDRz)。直接将其加入体外培养的受HCV 5′ NCR调控的表达荧光素酶HepG2细胞 (HepG2 970 6细胞株 )中 ,或用脂质体转染法将其导入靶细胞。用化学发光法检测荧光素酶活性 ,计算抑制率。结果　转染终浓度为 0 5 μmol/L的药物 2 4h后 ,DRz 2 3 2 /TDRz 2 3 2、DRz 12 7/TDRz 12 7、DRz 84/TDRz 84和DRz1/TDRz1的抑制率分别约14 3 %/ 14 9%、5 3 2 %/ 5 0 6%、2 5 6%/ 2 3 8%和 44 7%/ 43 3 %,均高于对应的MRz ,其中DRz 12 7/TDRz 12 7与MRz 12 7( 4 1 2 %)相比抑制率有显著性差别 (P <0 0 5 )。直接将TDRz 12 7或MRz 12 7加入细胞培养体系中被动作用 5h和 2 4h ,抑制率无明显差别 ,?

摘要：背景:人工肝反应器性能的评价通常需要构建一个密闭实验装置模拟生物人工肝支持系统来对反应器内肝细胞的生物功能以及生物反应效率等进行综合评价,对聚砜膜中空纤维反应器的性能进行初步评价对优化生物人工肝支持治疗系统具有一定意义。目的:构建聚砜膜生物反应器实验系统,了解该系统对重型肝炎患者血浆的影响,观察聚砜膜中空纤维反应器作为生物人工肝反应器的可行性。设计:重复测量实验。单位:第三军医大学西南医院全军感染病研究所。材料:选用7只新生1～7d中国实验小型猪,雌雄不拘,由第三军医大学实验动物中心提供,许可证号码:F99017实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。肿瘤坏死因子α、转化生长因子β1试剂盒购自中国晶美生物工程公司;聚砜膜中空纤维反应器订制于中国上海德宏生物材料研究所;Cellco培养循环式人工毛细管培养系统购于美国Spectrum公司;7份重型肝炎患者血浆样本均取自住院慢性重型肝炎患者做血浆置换时分离的血浆。患者均对实验项目知情同意,实验经过医院伦理委员会批准。方法:实验于2004-01/2005-07在第三军医大学西南医院全军感染病研究所实验室完成。①实验过程:实验前12h对实验猪进行断乳,清洁皮毛后分离肝细胞。将聚砜膜中空纤维反应器的内腔通过氧和二氧化碳弥散管与培养液贮池和Cellco培养液循环式人工毛细管培养系统连接成为密闭系统,外腔接口用洁净橡胶塞封闭。用磁力搅动法将分离的肝细胞进行球形体培养,接种到本系统的聚砜膜中空纤维反应器外腔,然后加重型肝炎患者血浆样本200mL于贮液池中,以80mL/min的速度在反应器内腔及贮液池中循环。②实验评估:在循环的0,2,4,6h从反应器内腔各取出2mL循环液,用谷氨酸脱氢酶-紫外法检测上清中氨的水平,全自动生化分析仪上检测标本中总胆红素的含量,在全自动血凝仪上检测标本的凝血酶原时间,肿瘤坏死因子α、转化生长因子β1的检测参照试剂盒说明书进行。主要观察指标:聚砜膜生物反应器系统对重型肝炎患者血浆的血氨、胆红素、凝血酶原时间、肿瘤坏死因子α及转化生长因子β1的影响。结果:①血氨、总胆红素、凝血酶原时间检测结果:重型肝炎患者血氨水平持续降低,0～2h下降最明显,其后血氨水平下降趋势减缓;总胆红素水平持续降低,6h的总胆红素水平明显低于0h,差异有显著性意义(P<0.05);凝血酶原时间持续降低,6h的凝血酶原时间较0h降低,差异具显著性意义(P<0.05)。②肿瘤坏死因子α、转化生长因子β1检测结果:重型肝炎患者血浆的肿瘤坏死因子α及转化生长因子β1含量持续降低,其中6h均明显低于0h,差异具显著性意义(P<0.05)。结论:砜膜生物反应器实验系统能够清除重型肝炎患者血浆中的小分子有毒物质,补充有益成分,降低细胞因子水平,可作为生物人工肝反应器。

摘要：目前 ,生物人工肝系统正在成为急性肝衰竭患者体外有效的肝支持治疗手段,在该系统中 ,生物反应器起着重要作用。迄今为止 ,设计和研究的生物反应器已有多种 ,如平板式反应器、中空纤维型反应器、灌流床式/支架型反应器、肝细胞包裹与悬浮型反应器等。本文介绍了生物反应器的基本作用、功能、条件和要求 ,并对4类主要生物反应器的研究进展予以综述。

摘要：目的　探讨丁型肝炎病毒 (HepatitisDvirus ,HDV)核酶用于抗丙型肝炎病毒 (HepatitisCvirus ,HCV)基因治疗的可能性。方法　以HDV基因组核酶的假结样结构为基础 ,优化其茎Ⅳ区 ,改建其底物结合区 ,获得 3种针对HCVRNA的HDV核酶RzC1、RzC2 和RzC3 。体外转录获取含HCVRNA 5’ 非编码区 ( 5’ noncodingregion ,5’ NCR)及部分C区在内的底物RNA(HCVRNA 5’ NCR C) ,并进行 5’端放射性标记。在pH 7.5、37℃、Mg2 + 2 0mmol/L和去离子甲酰胺 2 .5mol/L等条件下 ,将核酶和底物按摩尔比 1 0 0∶1混合 ,在不同的时间点观察剪切百分率。结果　RzC1、RzC2 对底物的剪切百分率随时间延长而递增 ,90min时分别达 2 4.9%、2 0 .3% ;未观察到RzC3 有剪切活性。

摘要：目的观察替比夫定、拉米夫定治疗24周时对HBV的抑制程度,与治疗1年疗效的相关性,探讨临床实用的疗效预测指标。方法Ⅲ期临床研究,采用随机、对照、双盲、双模拟、多中心设计。共入组慢性乙型肝炎患者332例,其中替比夫定组167例,拉米夫定组165例。根据治疗24周时血清HBV DNA的水平,将患者分为4组：PCR低于检测下限（QL）组（〈300拷贝／ml）、QL-〈10^3拷贝／ml组、10^3-〈10^4拷贝／ml组和≥104拷贝／ml组。结果治疗52周时,替比夫定组血清HBV DNA自基线下降6．2log10,拉米夫定组下降5．4log10,t=3．6,P〈0．01,差异有统计学意义。HBV DNA低于检测下限的比例分别为69．6％和43．4％,χ^2=6．5,P〈0．01,差异有统计学意义。不论替比夫定组还是拉米夫定组治疗24周时HBV DNA水平越低,在52周HBV DNA达到PCR检测不到的水平、HBeAg血清转换和ALT复常的比率越高,48周病毒耐药的发生率越低。24周时替比夫定组HBV DNA低于检测下限的患者在52周时达到HBeAg血清转换的比率为43．3％,≥300拷贝／ml患者为8．8％,χ^2=21．6,P〈0．01,差异有统计学意义。结论替比夫定或拉米夫定治疗24周时,PCR检测不到HBV DNA,提示在52周可达到较佳疗效;24周时病毒水平下降不理想提示发生耐药的可能性增加。24周对HBV DNA的抑制程度可作为1年疗效的预测指标。