摘要：目的观察非诺贝特对严重烧伤大鼠肝脏脂肪变性的疗效。方法将27只雄性sD大鼠按照随机数字表法分为假伤组、单纯烧伤组、烧伤＋非诺贝特组，每组9只。假伤组大鼠将背部浸入37℃温水中15s模拟致伤，之后不予处理。其余2组大鼠将背部浸入98℃热水中15s造成30％TBSAm度烫伤（以下称烧伤），伤后1h腹腔注射乳酸钠林格液。伤后24h起，烧伤＋非诺贝特组大鼠给予生理盐水稀释的非诺贝特（药物剂量为80mg·kg-1·d-1），连续给药7d，单纯烧伤组大鼠则给予等体积生理盐水。（1）于伤后4、6、8d，各组分别选取3只大鼠采集下腔静脉血，采用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、游离脂肪酸（FFA）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）含量；取血后称取大鼠体质量，随即处死大鼠取肝脏称取湿质量，计算后者与前者比值即肝脏指数，同时行肝脏组织大体观察。（2）各时相点下每只大鼠留取1块肝脏组织样本，HE染色观察组织病理学变化；各时相点下每只大鼠选取1张HE染色切片，评估肝脏脂肪变性程度，并统计各组各级肝脏脂肪变性鼠数。对计量资料行析因设计方差分析及SNK检验，对计数资料行Kruskal-Wallis检验和Nemenyi检验。结果（1）伤后4d，单纯烧伤组大鼠TC、TG、FFA、HDL含量与假伤组比较，差异明显（P值均小于0．05）；烧伤＋非诺贝特组大鼠TC、TG、FFA含量均明显低于单纯烧伤组（P值均小于0．05），HDL含量与单纯烧伤组相近（P〉0．05）；3组大鼠LDL含量相近（P值均大于0．05）。伤后6d，单纯烧伤组大鼠TC、TG、HDL含量与假伤组比较，差异明显（P每均小于0．05）；烧伤＋非诺贝特组大鼠TC、TG含量均明显低于单纯烧伤组（P值均小于0．05），HDL含量明显高于单纯烧伤组（P〈0．05）；3组大鼠FFA、LDL含量相近（P值均大于0．05）。伤后8d，单纯烧伤组大鼠TC、HDL含量与假伤组比较，差异明显（P值均小于0．05）；烧伤＋非诺见特组大鼠TC含量明显低于单纯烧伤组（P〈0．05），HDL含量与单纯烧伤组相近（P〉0．05）。3组大鼠TG、FFA和LDL含量相近（P值均大于0．05）。（2）假伤组大鼠伤后各时相点肝脏组织大体情况与烧伤＋非诺贝特组相似，质地柔嫩，切面无油脂沾染。单纯烧伤组大鼠伤后各时相点肝脏组织表面散在暗黄色斑块，切面有油脂沾染，以伤后6d最为明显。伤后4d，假伤组、单纯烧伤组、烧伤＋非诺贝特组大鼠肝脏指数相近（F=1．63，P〉0．05）。伤后6、8d，假伤组、单纯烧伤组、烧伤＋非诺见特组大鼠肝脏指数分别为0．0416±0．0016、0．0533±0．0054、0．0370±0．0069及0．0423±0．0034、0．0624±0．0005、0．0444±0．0042，其中单纯烧伤组大鼠肝脏指数明显高于其余2组（P值均小于0．05），假伤组、烧伤＋非诺贝特组大鼠肝脏指数相近（P值均大于0．05）。（3）假伤组大鼠伤后各时相点肝脏组织结构正常；单纯烧伤组大鼠伤后各时相点存在弥散小泡性肝细胞脂肪变性，以伤后6d最为明显；烧伤＋非诺贝特组大鼠伤后4d肝脏有轻度脂肪变性，伤后6d起肝脏组织结构逐渐恢复正常。假伤组大鼠肝脏脂肪变性程度均为0级；单纯烧伤组大鼠肝脏脂肪变性程度为Ⅰ级1只、Ⅱ级1只、Ⅲ级7只；烧伤＋非诺贝特组大鼠肝脏脂肪变性程度为0级3只、Ⅰ级4只、Ⅱ级2只。单纯烧伤组大鼠肝脏脂肪变性程度重于其余2组（x2值分别为56．25、162．44，P值均小于0．05），烧伤＋非诺贝特组大鼠肝脏脂肪变性程度重于假伤组（x2=27．51，P〈0．05）。结论非诺贝特能纠正严重烧伤大鼠血脂代谢异常，在一定程度上减轻肝脏脂肪变性程度。

摘要：目的观察雌激素在小鼠表皮发育和Kc（人表皮细胞株HaCaT）增殖中的作用并探讨其机制。方法（1）通过阴道脱落细胞检查法选取5只处于动情期成年C57BL／6小鼠设为动情期组，另将性发育前行卵巢切除的5只成年C57BL／6小鼠设为卵巢切除组。取2组小鼠尾根部全层皮肤，HE染色观测表皮厚度，免疫组织化学染色观察表皮中增殖细胞核抗原（PCNA）阳性细胞分布并计数。（2）取对数生长期HaCaT细胞，用含体积分数10％FBS的RPMI1640培养液培养，按随机数字表法分为阴性对照组、单纯雌二醇组、蛋白激酶B（Akt）抑制剂组、细胞外信号调节激酶（ERK）抑制剂组，每组20孔。各组培养液中，阴性对照组加入1nL二甲基亚砜；单纯雌二醇组加入100nmol／L17 β-雌二醇1 μL；Akt抑制剂组和ERK抑制剂组均加入同前剂量与体积17 β-雌二醇，另分别加入10 μmol／L LY294002和30 μmol／LPD98059各1 μL。分别于培养0（即刻）、24、48、72h，每组取5孔细胞，用细胞计数试制盒8与酶标仪检测细胞增殖活性。（3）取对数生长期HaCaT细胞，同前分组处理，每组3孔。培养72h，用流式细胞仪检测细胞周期分布，计算细胞增殖指数（PI）。（4）取对数生长期HaCaT细胞，同前分组处理，每组3皿。培养72h，蛋白质印迹法检测细胞中磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化ERK（p-ERK）和PCNA蛋白水平。细胞实验均重复3次。对数据行t检验、单因素方差分析、析因设计方差分析、LSD检验。结果（1）卵巢切除组小鼠表皮厚度为（33．5±3．0） μm，明显薄于动情期组的（51．4±3．1） μm（t=20．7，P〈0．01）。2组小鼠PCNA阳性细胞主要集中于表皮基底层；卵巢切除组小鼠表皮中PCNA阳性细胞数为每200倍视野下（37±12）个，明显少于动情期组的每200倍视野下（96±15）个（t：15．3，P〈0．01）。（2）培养0～48h，单纯雌二醇组与阴性对照组细胞增殖活性差异不明显（P值均大于0．05）。培养72h，与阴性对照组比较，单纯雌二醇组细胞增殖活性明显增高（P〈0．01）；Akt抑制剂组、ERK抑制剂组细胞增殖活性均明显低于前2组（P值均小于0．01）。（3）与阴性对照组的（51．6±1．1）％比较，单纯雌二醇组细胞PI明显升高[（58．5±0．8）％，P〈0．05]；Akt抑制剂组、ERK抑制剂组细胞P1分别为（34．9±0．8）％、（48．2±0．4）％，均明显低于前2组（P值均小于0．01）。（4）与阴性对照组的0．566±0．034比较，单纯雌二醇组细胞p-Akt蛋白水平明显升高（1．048±0．077，P〈0．01）；Akt抑制剂组和ERK抑制剂组细胞p-Akt蛋白水平分别为0．682±0．095、0．672±0．019，明显低于单纯雌二醇组（P值均小于0．01）。与阴性对照组的0．469±0．013比较，单纯雌二醇组、Akt抑制剂组、ERK抑制刊组细胞p-ERK蛋白水平均明显升高（1．064±0．089、1．010±0．038、0．778±0．065，P值均小于0．01）。与单纯雌二醇组比较，ERK抑制剂组细胞p-ERK蛋白水平明显降低（P〈0．01）。与阴性对照组的0．386±0．053比较，单纯雌二醇组细胞的PCNA蛋白水平明显升高（0．743±0．043，P〈0．01）；Akt抑制剂组和ERK抑制剂组细胞PCNA蛋白水平分别为0．264±0．019、0．223±0．065，明显低于前2组（P值均小于0．01）。结论雌激素缺乏时，小鼠表皮发育能力减弱。雌激素（17β-雌二醇）可通过激活ERK／Akt信号通路上调PCNA表达，以促进HaCaT细胞的增殖。

摘要：目的 根据毕赤酵母密码子偏好,设计并改造人CTLA4胞外区cDNA,构建毕赤酵母分泌型表达载体,以实现人CTLA4胞外区蛋白在毕赤酵母中的高效表达。方法利用PCR定点突变技术,将人CTLA4胞外区cDNA中的毕赤酵母低频使用密码子突变成高频使用密码子而不改变其氨基酸序列;经DNA序列测定证实后插入毕赤酵母高拷贝表达载体pPIC9K a分泌信号下游,SacⅠ线性化后电转GS115;G418梯度筛选转化菌;PCR鉴定目的基因整合;甲醇诱导表达,SDS-PAGE、Western blotting、肽质量指纹等鉴定表达蛋白。结果成功地对人CTLA4胞外区cDNA进行了定点突变,该突变体在毕赤酵母中能成功表达CTLA4胞外区蛋白。结论 为高效表达人CTLA4胞外区蛋白及其功能研究和临床应用奠定了基础。

摘要：体液支持、静脉营养支持、静脉内持续给药在临床上心肺复苏、严重创伤、多脏器功能障碍等病人救治中是非常重要和有效的措施［１，２］，但尚难以在大鼠等小动物顺利开展有关此领域的系列研究，原因是缺乏能确保鼠在自由活动情况下能给鼠持续输液或给药的途径和输液设备，...