摘要：目的研究泛醇与谷氨酰胺对烧伤大鼠肠道损伤和运动功能的影响及其量效关系。方法（1）拆方实验。将90只SD大鼠按随机数字表法分为A—I组，每组lO只。将各组大鼠制成30％TBSAⅢ度烧伤模型，伤后4h开始灌胃泛醇和谷氨酰胺，剂量分别为1．00、4，0．50、4，0．25、4，1．00、2，0．50、2，0．25、2，1．00、I，0．50、I，0．25、lg·kg-1·d-1，每日剂量分2次灌胃，连续7d。停药当天采集大鼠血液及肠道组织，观测肠道推进指数、血清二胺氧化酶（DAO）活性、全血乙酰胆碱含量、肠黏膜蛋白含量，筛选泛醇和谷氨酰胺最佳配比。（2）药效学实验。将70只SD大鼠按照随机数字表法分为正常对照组（不进行任何处理）、烧伤组、烧伤＋泛醇组、烧伤＋谷氨酰胺组、烧伤＋低剂量泛醇．谷氨酰胺（简称“泛谷”）组、烧伤＋中剂量泛谷组、烧伤＋高剂量泛谷组，每组10只。将后6组大鼠按上述模型致伤，伤后4h开始灌胃药物，烧伤＋泛醇组给予泛醇1．00g·kg-1·d-1；烧伤＋谷氨酰胺组给予谷氨酰胺4g·kg-1·d-1；烧伤＋低、中、高剂量泛谷组给予泛醇和谷氨酰胺，剂量分别为0．50、2，1．00、4，2．00、8g·kg-1·d-1，每日剂量分2次灌胃，连续7d。检测指标及时问同拆方实验，另外增加各烧伤组大鼠肠道病理学观察；正常对照组行相同检测。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析及Fisher确切概率法检验，两两比较行LSD检验。结果（1）A、B组大鼠肠道推进指数、肠黏膜蛋白含量相近（P值均大于0．05），显著高于其余7组（P值均小于0．01）；A组大鼠乙酰胆碱含量显著高于其余8组（P值均小于0．01）；A、D、E组大鼠DAO活性相近（P值均大于0．05），低于其余6组（P值均小于0．01）。泛醇与谷氨酰胺最佳配比剂量为1．00、4g·kg-1·d-1。（2）与正常对照组比较，烧伤组大鼠肠道推进指数、乙酰胆碱和肠黏膜蛋白含量明显降低，DAO含量明显增高（P值均小于0．01）；烧伤＋泛醇组大鼠肠道推进指数明显降低（P〈0．01）；烧伤＋谷氨酰胺组大鼠肠道推进指数、乙酰胆碱含量明显降低（P值均小于0．01）；烧伤＋低剂量泛谷组大鼠肠道推进指数明显降低（P〈0．01）；烧伤＋中、高剂量泛谷组大鼠4项指标水平未见明显改变（P值均大于0．05）。与烧伤组[0．50±0．07、（69±10）IXg／mL、（26±l】）汕g／g、（0．672±0．145）U／mL]比较，烧伤＋泛醇组大鼠乙酰胆碱和肠黏膜蛋白含量显著升高，DAO活性显著降低（P值均小于0．01）；烧伤＋谷氨酰胺组肠黏膜蛋白含量显著升高，DAO活性显著降低（P值均小于0．01）；烧伤＋低剂量泛谷组乙酰胆碱、肠黏膜蛋白含量升高（P值均小于0．01）；烧伤＋中、高剂量泛谷组肠道推进指数、乙酰胆碱和肠黏膜蛋白含量升高，DAO活性降低[0．66±0．07、0．68±0．05，（163±24）、（168±15）μg／mL，（57±7）、（57±7）μg／g，（0．203±0．070）、（0．193±0．068）U／mL，P值均小于0．01]。烧伤＋中、高剂量泛谷组4项指标水平相近或相同（P值均大于0．05）。与烧伤组比较，烧伤＋泛醇组绒毛排列紊乱鼠数显著减少（P〈0．05）；烧伤＋谷氨酰胺组绒毛高度下降、排列紊乱和中性粒细胞浸润鼠数明显减少（P值均小于0．05）；烧伤＋低剂量泛谷组绒毛高度下降、排列紊乱及细胞变性坏死和中性粒细胞浸润鼠数显著减少（P值均小于0．05）；烧伤＋中、高剂量泛谷组绒毛高度下降、数量减少、排列紊乱及细胞变性坏死和中性粒细胞浸润鼠数显著减少（P值均小于0．05）。烧伤＋中、高剂量泛谷组各项指标鼠数接近（P值均大于0．05）。结论联合应用泛醇与谷氨酰胺能明显减轻烧伤大鼠肠黏膜损伤并促进胃肠运动，疗效优于单一用药，二者最佳配比剂量为1．00、4g·kg-1·d-1。

摘要：目的筛选具有显著促进巨核细胞增殖、分化和血小板生成活性的血小板生成素模拟肽(TMP)二联体线性多肽,并观察其对血小板减少症的救治作用。方法设计合成系列TMP二联体线性多肽,其中两个头尾串联的TMP之间设置不同长度的连接肽,CCK-8法检测并筛选促巨核细胞增殖活性最强的TMP二联体多肽,Western blot分析TMP二联体多肽激活STAT5和ERK1/2磷酸化情况,流式细胞术分析小鼠骨髓来源Sca+-Ⅰ细胞经TMP二联体多肽处理后巨核细胞标志分子CD41、CD61的表达变化。BALB/c小鼠用5 Gyγ射线全身一次性照射后皮下注射TMP二联体多肽,每天1次,连续用药7 d,分析外周血血小板水平变化和骨髓造血组织病理改变。结果连接肽长度和氨基酸组成可显著影响TMP二联体多肽的促巨核细胞增殖活性,其中由1个脯氨酸(P)和8个甘氨酸(G8)连接的TMP二联体活性较为突出。TMP-PG8-TMP多肽处理能够显著促进巨核细胞中STAT5和ERK1/2的磷酸化,该多肽连续作用14 d能够较IL-3对照组显著上调Sca+-Ⅰ细胞CD41、CD61的双阳性表达率[(83.26±5.38)%vs(15.70±2.12)%,P<0.01]。此外,体内应用该多肽能够较辐照对照显著提高急性辐射损伤小鼠外周血血小板最低值水平(164.8×109/L vs 53.0×109/L),并使血小板水平提前4 d恢复。结论通过筛选连接肽最终获得具有显著促巨核细胞增殖和血小板生成活性的TMP二联体线性多肽。

摘要：目的构建大鼠转化生长因子β1(transforming growth factor,TGFβ1)基因RNA干扰慢病毒载体,并观测其对大鼠肝星状细胞HSC-T6的TGFβ1基因沉默效应与对Ⅰ型胶原α1(alpha-1 typeⅠcollagen,Col1α1)表达的影响。方法针对大鼠TGFβ1基因CDs序列,筛选3个干扰靶点,合成其3对小干扰RNA(siRNA),将各对siRNA分别转入HSC-T6细胞,采用RT-PCR法从3对siRNA中筛选出最佳siRNA,设计并合成针对最佳siRNA靶序列的shRNA,退火形成双链,与载体pGreenPuro连接,构建pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒载体,予以酶切与测序鉴定。pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒载体经293细胞包装,将包装产生的高感染力的慢病毒颗粒感染HSC-T6细胞,倒置显微镜观察经感染的HSC-T6细胞的GFP表达情况,在mRNA与蛋白水平检测重组慢病毒pGreenPuro/TGFβ1 shRNA对HSC-T6细胞的TGFβ1基因的沉默效应及对Col1α1表达的影响。结果筛选到TGFβ1基因的最佳干扰靶序列。酶切与测序结果证实,构建pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒载体成功。HSC-T6细胞经pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒感染48 h后,RT-PCR检测未见TGFβ1基因表达,Col1α1基因较弱表达;Western blot检测显示TGFβ1、Col1α1蛋白表达均非常弱。结论成功构建大鼠TGFβ1基因RNA干扰慢病毒载体,该载体能有效沉默HSC-T6细胞的TGFβ1基因,并抑制Col1α1的表达。

摘要：目的制备利多卡因载药微球,研究制备工艺参数对微球包封率和粒径的影响。方法采用均匀试验设计法,以利多卡因(lidocaine,LID)为模型药物,以药物包封率、微球粒径为评价指标,基材及其用量为因素和水平进行U8(85)的实验,得出最佳制备工艺参数。结果制备LID-PLGA-Ns的优选条件为:主药与包材基质的质量比为1∶6、内水相的体积比为8∶2、分散剂浓度PVA为3.0%、超声乳化时间为6min、搅拌速度为2200(r/min),此时能得到包封率高、平均粒径小的载药微球。结论应用均匀试验设计建立的多元二次模型可以较好地预测药微球的基本特性。

摘要：背景：人羊膜含胶原、糖蛋白、蛋白多糖和整合素等多种成分,它表达多种生长因子mRNA及其相关蛋白,有利于细胞的生长繁殖,能负载猪骨髓间充质干细胞与角朊细胞良好生长。目的：拟验证人羊膜负载骨髓间充质干细胞与角朊细胞对放创性全厚皮肤缺损创面胶原合成的影响。设计、时间及地点：同体对比观察。实验于2007-06/12在解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成。材料：贵州小香猪8只,3-6月龄;雌雄不限,体质量7-16kg。方法：贵州小香猪8只,每只背部脊柱两侧均有放创性全层皮肤缺损圆形创面（Ф3.67cm）各3个,共48个创面。将经处理的人羊膜分别负载自体骨髓骨髓间充质干细胞和角朊细胞,移植到其左侧24个创面作为实验组（人羊膜负载两种细胞移植组）;右侧前16个创面用单纯无种植细胞的人羊膜敷盖;后8个创面用单纯油纱布敷盖。单纯人羊膜处理组和油纱布敷盖组作为对照组。主要观察指标：用图像分析法测算7-21d各组创面活检组织胶原含量。结果：移植15-21d,3组创面胶原均增加,以人羊膜负载两种细胞移植组创面胶原沉积明显,与单纯人羊膜处理组和油纱布敷盖组创面相比,差异均有显著性意义（P〈0.01）。结论：人羊膜负载自体骨髓间充质干细胞和角朊细胞植入可明显促进放创性全厚皮肤缺损创面愈合过程中胶原的合成。

摘要：背景:人羊膜为半透明的薄膜,含有多种促进细胞增殖的营养成分,是一种较好的负载角朊细胞的生物材料。目的:将人羊膜负载培养猪角朊细胞构建皮肤表皮替代物,并观察猪角朊细胞在人羊膜上生长增殖的形态特点。设计:以细胞为研究对象,单一样本研究,重复测量观察。单位:解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所。材料:实验于2001-01/11在创伤、烧伤和复合伤国家重点实验室,第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所完成。猪角朊细胞取自3月龄贵州小香猪。方法:将贵州小香猪的角朊细胞原代培养,传代扩增后,将角朊细胞以1.63×105/cm2的密度接种于人羊膜基质面,逐日于倒置显微镜下观察角朊细胞的生长增殖变化情况,并于培养3d与15d进行光镜、电镜观察,检测角朊细胞在人羊膜上的生长情况。主要观察指标:角朊细胞在人羊膜上的生长情况。结果:倒置显微镜下观察接种后30min内明显见到角朊细胞在人羊膜上黏附,24h内大部分黏附生长,3d形成单层完全覆盖人羊膜。光镜下人羊膜负载角朊细胞3d,可见角朊细胞在人羊膜基质面黏附呈单层生长,细胞扁平紧密排列。扫描电镜下可见胞体呈多边形,多见胞膜突起。透射电镜下可见角朊细胞与人羊膜黏附良好,生长在人羊膜上的角朊细胞内有许多角质丝。生长至15d,在倒置显微镜和扫描电镜下均可见,细胞因过于拥挤而隆起,因老化而形成较多碎片,部分细胞有空洞形成。结论:人羊膜是角朊细胞在体外培养的良好载体,对角朊细胞有明显的促增殖作用。但人羊膜负载角朊细胞生长至15d,因老化部分细胞有空洞形成。

摘要：背景:颈交感神经阻滞促进机体神经-内分泌-免疫系统等稳态的恢复,其能否抑制创伤后应激紊乱导致的内稳态失衡仍不明确。目的:观察颈交感神经阻滞对放烧复合伤小鼠死亡率的影响,探讨颈交感神经阻滞可否成为严重创伤后续损害简单有效的治疗手段。设计:随机分组设计,动物对照实验。单位:解放军广州军区广州总医院麻醉科。材料:实验于2004-02/2005-07在解放军第三军医大学复合伤研究所完成。选择昆明小鼠160只,随机抽签法分为对照组80只(仅对动物给予放烧复合伤,颈部注射生理盐水0.3mL)和颈交感神经阻滞组80只(对动物给予放烧复合伤,伤后给予颈交感神经阻滞,1次/d,连续14d)。方法:动物致伤方法:①放射损伤:60Coγ射线5Gy,照射距离1.5m,吸收剂量率(5.17～5.33)mGy/s,全身一次均匀照射。②烧伤:放射损伤后给予20g/L凝固汽油涂于背部燃烧8s造成15%总体表面积Ⅲ度烧伤(病理切片证实)。颈交感神经阻滞方法:对大鼠进行双侧颈交感神经阻滞,注射5g/L利多卡因0.2mL,注射后5min观察小鼠是否出现类似于霍纳综合征症状。主要观察指标:观察两组动物伤后2,5,7,10,15,20,30d死亡率及伤后7,14,21d外周血红细胞、白细胞、血小板计数的变化,另观察颈交感神经阻滞对放烧复合伤后3,6,14d血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6的影响。结果:纳入动物160只,均进入结果分析。①与对照组比较,颈交感神经阻滞治疗使放烧复合伤后5,7,10,15,20,30d的死亡率显著降低犤对照组各时相点累计死亡率分别为8%,22%,32%,54%,74%,82%,90%;颈交感神经阻滞组分别为8%,14%,16%,22%,28%,34%,56%犦。②颈交感神经阻滞组伤后7,14,21d的血红细胞计数、血小板计数及白细胞计数与对照组比较显著增加犤以21d为例,血红细胞计数分别为23.21×1012L-1,14.58×1012L-1;血小板计数分别为16.87×1011L-1,12.57×1011L-1;白细胞计数分别为20.65×109L-1,14.58×109L-1犦。③颈交感神经阻滞组伤后3,6,14d的血清炎性细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6水平与对照组比较显著下降犤以14d为例,肿瘤坏死因子α分别为189,365ng/L;白细胞介素1β分别为14,23ng/L;白细胞介素6分别为70,132ng/L犦。结论:颈交感神经阻滞显著降低放烧复合伤动物的死亡率,是治疗严重创伤简单而有效的手段;颈交感神经阻滞降低放烧复合伤动物死亡率的机制可能是通过促进造血功能的恢复、抑制过度的炎性反应而实现的。

摘要：目的:构建去除凝血功能,但保留TF亲和力的rmFⅦ-pPIC9K表达载体并用毕赤酵母表达目的蛋白。方法:通过RT-PCR自小鼠肝脏获得FⅦcDNA,对其进行定点突变后连入pPIC9K质粒,电击转化Gs115酵母细胞,经G418筛选、BMGY/BMMY小量摇瓶培养表达目的蛋白,并进行初步的凝血、结合活性鉴定。结果:成功构建了3种rmFⅦ-pPIC9K表达载体(M1:LCmFⅦ-pHC9K;M2:K341AmFⅦ-pPIC9K;M3:QEAmFⅦ-pPIC9K),并通过酵母表达获得相应蛋白,经初步活性鉴定其中两种符合设计目的。结论:毕赤酵母表达rmFⅦ蛋白,为抗肿瘤血管药物的研究、肿瘤的分子靶向性治疗奠定了基础。

摘要：目的：构建小鼠微小RNA miR-21的真核表达载体,在人胚肾293细胞中验证其活性表达,为进一步以此载体研究miR-21的功能打下基础。方法根据小鼠miR-21的成熟序列及其上下游约170 bp的序列设计引物,利用PCR技术从小鼠基因组DNA扩增含有miR-21前体的片段382 bp,克隆到质粒pRc/CMV,对重组质粒经双酶切及测序分析,鉴定完全正确后转染人胚肾293细胞,G418(1000 mg/L)筛选后获得miR-21稳定表达细胞系, Northern blot验证其在293细胞的过表达；同时构建pmiR-21-Luc reporter荧光素酶报告质粒,与miR-21重组质粒共转染293细胞进行荧光素酶活性分析,验证其调控活性。结果成功构建小鼠miR-21的真核表达载体,其可以在293细胞中稳定高效表达,荧光素酶活性实验证实其有生物活性。结论成功构建小鼠miR-21的真核表达载体,为进一步探讨miR-21的生物学功能奠定了实验基础。