摘要：现代科学技术的进步对教学任务提出了更高的要求。PBL(prob lem based learn ing)适应于这一要求,鼓励学生以问题为中心,在学习过程中探索问题,解决问题。将PBL灵活运用于生理学课堂教学,通过精心设计课堂提问、组织基于问题的专题讨论以及结合实验示教等多种方式,活跃课堂教学气氛、激发学生的探索热情,并充分培养学生的创造性思维能力,从而提高课堂教学质量。

摘要：目的 :将体外筛选具有切割内皮素 - 1(endothelin- 1,ET- 1) m RNA的 10 - 2 3脱氧核酶转染原代培养新生大鼠心肌细胞 ,观察其对心肌细胞 ET- 1m RNA的影响。 方法 :体外转录 ET- 1全长 RNA底物 ,设计并合成 5条 ET- 110 - 2 3脱氧核酶(DZ1～ DZ5 ) ,其 5′及 3′端各有 2个核苷酸硫代修饰 ,体外切割 ET- 1RNA底物 ,筛选有效脱氧核酶 ;5′标记荧光素 FAM的10 - 2 3脱氧核酶瞬间转染新生大鼠心肌细胞以观察对 10 - 2 3脱氧核酶的摄取 ;采用半定量 RT- PCR检测 ET- 1基因的表达。结果 :DZ2、DZ3、DZ4及 DZ5在体外均可切割 RNA底物 ,其中 DZ4两侧结合区结合自由能之差最大 ,其切割效率最高 ,达83.5 % ,而 DZ3两侧结合区结合自由能之差最小 ,其切割效率亦最低 (4 7.3% ) ;瞬间转染新生大鼠心肌细胞 2 4 h,心肌细胞内可见 10 - 2 3脱氧核酶的分布 ,半定量 RT- PCR结果显示转染 2 4 h后的 DZ4 (0 .2 μmol/ L)可减少血清诱导肥大心肌细胞 ET- 1m RNA及细胞总蛋白 ,降低细胞活力与蛋白质合成速率 (P<0 .0 5 )。 结论 :本研究设计的 10 - 2 3脱氧核酶能切割体外转录的ET- 1全长 RNA底物 ,转染心肌细胞后 ,可抑制 ET- 1m RNA的表达 ,减缓血清诱导心肌细胞肥大 ,10 - 2

摘要：目的:构建由载体介导的抑制人维生素D3受体(VDR)表达的RNA干扰载体,并在人骨肉瘤细胞中初步研究其对VDR表达及功能的影响。方法:通过在线筛选设计了两段针对人VDR的RNAi序列,并与载体pSilencer-2.1-U6连接,获得了表达载体pSilencer-2.1-U6-VDR1与pSilencer-2.1-U6-VDR2。利用脂质体转染法分别转入人骨肉瘤细胞系HOS-8603细胞中,通过Western印迹法检测其对内源性VDR蛋白表达、对1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]激活PKC作用的影响,利用细胞计数和MTT的方法检测其对1,25(OH)2D3抑制HOS-8603细胞增殖作用的影响。结果:在分别转染pSilencer-2.1-U6-VDR1/2的HOS-8603细胞中,与对照细胞比较,内源性VDR蛋白的表达、1,25(OH)2D3对细胞的增殖抑制作用以及1,25(OH)2D3快速诱导PKC磷酸化的作用均有显著降低。结论:构建的表达载体pSilencer 2.1-U6-VDR1与pSilencer 2.1-U6-VDR2均能在细胞水平显著抑制内源性VDR基因的表达,并能有效阻断一些由VDR介导的1,25(OH)2D3生物学作用,为进一步研究VDR与维生素D3的功能提供了一个有用工具。

摘要：目的 :构建并表达巨噬细胞分化抗原 1(Mac- 1)的 α链 CD11b与蓝色荧光蛋白 (BFP)的融合蛋白 CD11b- BFP,为进一步直视研究 Mac- 1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件。方法 :首先将 CD11b的全长 c DNA进行酶切并获得 2个片段 ,将其中含有终止密码的片段作为模板 ,通过设计引物进行 PCR,获得不含有终止密码的该片段 ,然后与另一片段进行连接 ,形成不含有终止密码的 Mac- 1全长 c DNA,将其插入到表达载体 p EBFP- N1中 ,构建完成 CD11b- BFP融合基因 ,最后将其转染至 U937细胞株中 ,通过荧光显微镜观察与流式细胞术检测 Mac- 1的表达及其黏附活性来进行鉴定。 结果 :经酶切鉴定 ,p CD11b- BFP构建完全正确 ,转染 U937细胞株后 ,可见 CD11b- BFP融合蛋白发出的蓝色荧光。 结论 :构建完成 CD11b-BFP融合基因并在

摘要：目的:构建HIV-1 Gag PR蛋白P2/NC切割位点序列随机化的噬菌体展示文库,研究HIV-1蛋白酶(protease PR)耐药性突变对其敏感切割序列的影响。方法:PCR扩增制备重组HIV-1gag基因上的CAP2和NC片段,在CAP2片段5′端引入StuⅠ酶切位点,3′端PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化;在NC片段5′端设计重叠区域,3′端引入SalⅠ酶切位点。应用Overlapping PCR将CAP2和NC片段拼接并克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANTAB5S上,建立HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点随机化的噬菌体展示文库。结果:该噬菌体展示文库库容量为2.1×106,滴度为3.0×1012TU/ml,CAP2/NC片段插入率为52.1%;12个样品的序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布;10个阳性单克隆噬菌体CAP2/NC-LD3-pCANTAB5S样品中9个与IgG特异结合。结论:成功地对HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点进行了随机化并展示于噬菌体表面,构建了其噬菌体展示文库,为筛选耐药性突变的PR敏感切割序列及构建蛋白酶抑制剂噬菌体筛选模型打下基础。

摘要：生理实验教学在生理学课程的教学中起着重要的作用,开设自主设计性实验有助于激发学生的学习兴趣和探索精神,培养其创新和科研能力,但传统实验教学在培养学生的动手能力和基本科研思维方面同样也起着不可忽视的作用。如何将经典实验和自主设计性实验有机的统一起来,在传承中进行创新是生理实验教学改革中值得探索的问题。

摘要：目的 :应用内皮素 (endothelin ,ET) 110 2 3脱氧核酶抑制内源性ET 1表达 ,探讨内源性ET 1在急性缺血性心律失常发生中的作用。方法 :设计并合成ET 110 2 3脱氧核酶 ,作体外切割筛选 ;SD大鼠静脉注射ET 110 2 3脱氧核酶 ,观察心肌对 5’标记荧光素FAM的ET 110 2 3脱氧核酶的摄取和对其后离体灌流大鼠心脏左冠状动脉前降支结扎致急性缺血性心律失常的影响。结果 :设计合成的ET 110 2 3脱氧核酶在体外高效切割ET 1RNA底物 ;荧光标记ET 110 2 3脱氧核酶静脉注射 4h后 ,大鼠心肌组织内荧光广泛分布 ;静脉注射ET 110 2 3脱氧核酶4h后 ,左冠状动脉前降支结扎引起的急性缺血性心律失常显著减轻 ,并呈剂量依赖性 ,而对照序列无此效应。结论 :本实验设计的ET 110 2 3脱氧核酶能有效切割ET 1RNA ,减轻急性缺血性心律失常的发生 ,证明内源性ET 1在急性缺血性心律失常的发生中起重要作用。

摘要：目的：设计冠状动脉阻断与再通控制技术，用于建立清醒自由活动大鼠心肌缺血再灌注模型。方法：大鼠麻醉开胸后。左冠状动脉牵拉线穿过胸内一段小塑料管，然后引出体外。清醒状态下，牵拉该线时，可阻断冠状动脉，放松后使冠状动脉再通。结果：心肌缺血３０ｍｉｎ内，清醒大鼠１６（１６／２５）只存活，而麻醉开胸大鼠９（９／１０）只存活。利多卡因使清醒大鼠缺血性室颤降至８．３％（２／２４），而不影响心肌梗塞范围。清醒大鼠在心肌缺血时，心率显著增快且在缺血后５ｍｉｎ出现一峰值。放松牵拉线后，对照组１４（１４／１６）只，利多卡因组２１（２１／２２）只清醒大鼠ＳＴ段骤降。本法（１４／１６）再灌注成功，显著高于Ｈｉｍｏｒｉ法（６／１４，Ｐ＜０．０５）。结论：本技术简单可靠，成功率高，值得推广。