摘要：β-碳酸酐酶(β-carbonic anhydrases,β-CAs)是一种锌金属酶,能高效催化CO2的水合作用,参与包括呼吸、p H及CO2稳态、生物合成、毒力调节等生理过程,在生命活动中起重要作用。β-CAs广泛分布于真菌、细菌、绿藻、植物及少数原生动物和后生动物中,但在脊椎动物体内未发现。因此将β-CAs作为靶点,设计开发抗细菌、真菌、寄生虫感染药物有着广阔的前景。本文就β-CAs的分布、生理功能、抑制剂及其作为抗寄生虫药物靶点的研究进展作一综述。

摘要：目的　克隆恶性疟原虫海南株 (FCC1/HN)株糖酵解醛缩酶 (ALD)编码区基因。　方法　利用已知ALD基因序列设计一对特异性引物 ,从基因组DNA中用PCR扩增ALD基因 ,将其克隆入pQE 3 0载体 ,阳性克隆经酶切鉴定后测序 ,在此基础上将重组质粒转化大肠埃希菌M15进行表达。　结果　PCR扩增后获得特异性扩增片段 ,测序结果显示我国的恶性疟原虫FCC1/HN株与恶性疟原虫 3D7株ALD基因序列完全相同。重组融合蛋白通过镍 次氮基三乙酸 (Ni NTA)亲和层析及阳离子交换层析进行纯化。　结论　我国的恶性疟原虫FCC1/HN株与文献报道的恶性疟原虫 3D7株ALD编码区基因序列相同 。

摘要：目的　在毕赤酵母表达系统中获得大量构象正确的 3D7/MSP1 4 2重组蛋白进行疫苗有效性试验。方法　采用不对称PCR法拼接合成了 3D7/msp1 4 2基因 (12 0 2bp) ,用电穿孔法将合成基因导入毕赤酵母并进行诱导表达 ,用免疫印迹法检测表达产物。结果　按毕赤酵母密码子使用频率重新设计并全合成了 3D7/msp1 4 2基因序列 ,该合成基因在毕赤酵母系统 (Pichiapastoris)中得到高水平分泌表达 ,产生全长重组蛋白。识别构象表位的特异性单克隆抗体能与该重组蛋白反应。结论　重新设计的基因能在毕赤酵母中高水平分泌表达 ,并产生构象正确的重组蛋白 。

摘要：目的:对中华按蚊多态的微卫星DNA位点进行分离和筛选,并阐明其特征.方法:应用中华按蚊基因组DNA的酶切片段与生物素标记的寡核苷酸探针杂交,亲合素富集和超滤离心浓缩目的片段,扩增放大,克隆并测序,构建中华按蚊微卫星DNA库.在其中挑选合适的微卫星位点,建立扩增体系.应用中华按蚊现场样本扩增不同的微卫星位点,聚丙烯酰胺凝胶电泳筛选具有多态性的微卫星位点.结果:构建的中华按蚊微卫星DNA库中包含252条序列,GenBank注册登记号为EF620047～EF620298.其中,双核苷酸重复最为常见,三核苷酸重复次之,多核苷酸重复少见;含(CA)和(GT)重复的序列最多,重复次数最多可达56次;完整序列占35.3%,非完整序列占20.2%,复合序列占18.7%,其余为非典型序列.设计了22对引物扩增不同的微卫星位点,其中20个位点产生特异的PCR产物,PAGE结果显示其中15个位点具有多态性.结论:获得了中华按蚊新的多态微卫星位点共15个,为中华按蚊群体遗传和其他相关研究提供了分子标志.

摘要：目的 对混合样本方法检测蚊体内子孢子阳性率进行理论分析与方案设计。 方法 以均方误差达到预定精度要求为准则,确定混合样本大小与混合样本量。 结果 本文给出的混合检测方案是基于严格的统计分析得到的结果,与传统的逐一检测方法相比,可以大大减少检测次数并在一定程度上减少样本总量。 结论 依据感染率预估值确定混合样本大小与混合样本量的研究思路,具一定的可行性。与传统的无偏估计相比,用混合样本阳性数在样本总量中的比例作为感染率估计值具有计算简单、精度较高的优点。

摘要：目的 建立我国多斑按蚊复合体5成员种的分子鉴别方法。 方法 测定并分析各成员种的rDNA-ITS2序列,并设计种特异引物,应用PCR法鉴别。结果 多斑按蚊复合体5成员种的ITS2序列长度和GC含量分别为伪威氏按蚊328 bp、58.54％、多斑按蚊330 bp、57.85％、威氏按蚊337 bp、59.05％、达罗毗按蚊334 bp、58.68％和塞沃按蚊338 bp、57.69％,各种内的ITS2序列保守,而种间的差异率范围为9.7％～18.9％。应用5.8S引物和5个种特异引物可以分别扩增出119、186、231、327和406 bp等5条清晰不同的种特异条带,以鉴别各蚊种。 结论 基于ITS2序列差异建立的我国多斑按蚊复合体5成员种的PCR鉴别简便易行、可靠。

摘要：[目的]通过拼接完成对SARS S蛋白的上下游序列S1和S2的合成,并在大肠杆菌中表达,获得具活性的S1和S2蛋白。[方法]利用不对称PCR方法以及采用设计酶切位点将2个片段连接的方法合成SARS香港株S蛋白上下游2个片段S1和S2;构建S1和S2这2个基因片段的原核表达载体,pET28a-S1和pET28a-S2,并转化BL21表达菌株,然后用IPTG诱导目的基因的表达并提取纯化目的蛋白。[结果]连接得到S1和S2这2个基因片段,并成功地在大肠杆菌中得到表达。[结论]该研究为后续SARS疫苗研究提供检测抗原奠定了基础。

摘要：目的比较多重PCR（multiplex PCR）、PCR一限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）、半巢式PCR等3种检测棘球蚴的PCR方法，优化可区分多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫羊株（G1型）和骆驼株（G6型）、石渠棘球绦虫和带科绦虫的方法。方法根据细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、石渠棘球绦虫、带科绦虫线粒体基因序列，用DNAStar软件设计半巢式PCR通用引物，建立半巢式PCR法，并与文献报道的多重PCR法、PCR—RFLP平行扩增3份巨颈绦虫囊尾蚴、48份多房棘球蚴、8份细粒棘球蚴样本DNA，比较3种检测方法的特异性和灵敏度，并以细粒棘球蚴组织DNA为模板测定3种方法的灵敏度。结果半巢式PCR法灵敏度最高，59份样本全部扩增出561bp条带，但需要测序才能确定虫种；多重PCR法能扩增出3份巨颈绦虫囊尾蚴（带绦虫）样本（3／3，100％），5份（5／8，62．5％）细粒棘球蚴样本，23份（23／48，47．9％）多房棘球蚴样本，其余28份样本为假阴性；PCR—RFLP扩增细粒棘球蚴、多房棘球蚴和巨颈绦虫囊尾蚴（带科绦虫）的阳性率与多重PCR相同，且PCR—RFLP不能区分细粒棘球绦虫G1型和带科绦虫。统计学分析显示半巢式PCR法的棘球蚴检出率高于PCR—RFLP法和多重PCR法。半巢式PCR法灵敏度分别是PCR—RFLP法和多重PCR法的1000倍和100倍，最低检出细粒棘球蚴DNA浓度为253pg／ul。结论根据不同研究目的，可组合选用多重PCR法、PCR—RFLP法、半巢式PCR法区分细粒棘球绦虫G1型、G6型，多房棘球绦虫，石渠棘球绦虫和带绦虫。

摘要：间日疟原虫多核亚种和灵长类的诺氏疟原虫的红内期形态十分相似,仅靠传统的形态学鉴定方法和患者的临床症状难以区分。虽然诺氏疟原虫感染人的病例少有报道,但并不应忽视。利用分子诊断方法,根据不同种疟原虫基因组内相对保守的序列,设计特异性核酸序列进行鉴定,可以明确诊断。

摘要：目的建立多重PCR法鉴定蚊胃血来源。方法依据常见蚊吸血对象(人、牛、猪和犬)的线粒体DNA细胞色素b序列的差异,设计种特异引物,建立多重PCR法,并应用该法检测现场按蚊标本。结果应用多重PCR法共检测249只按蚊,血源来自牛和猪的共91只和63只,未检出吸人血按蚊。立即处死并干燥保存的现场按蚊标本检测成功率最高,为92.50%。结论多重PCR法鉴定蚊胃血血源快速、灵敏,结果客观、可靠。