摘要：目的构建一种特异性标记过氧化物酶体的GFP腺病毒载体。方法设计含过氧化物酶体信号肽的GFP序列,PCR法扩增该序列片段,并将其与腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack连接,然后将连接产物转化到大肠埃希菌DH5α感受态细胞中获得重组质粒并测序鉴定。重组质粒经限制性内切酶PmeⅠ酶切线性化后,转化到含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183感受态细胞中进行同源重组。重组腺病毒质粒经限制性内切酶PacⅠ酶切线性化后感染293A细胞,进行病毒包装,得到含过氧化物酶体信号肽的Ad-GFP-Peroxi重组腺病毒颗粒。用腺病毒Ad-GFP-Peroxi和不含过氧化物酶体信号肽的腺病毒Ad-GFP感染培养的大鼠心肌细胞H9C2,48 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光强弱。将用Ad-GFP-Peroxi腺病毒感染的H9C2细胞分为正常培养组和1%O2浓度培养组,培养24 h后于共聚焦显微镜下观察,并进行荧光信号聚集情况分析。结果含过氧化物酶体信号肽的GFP腺病毒载体构建成功。与不含过氧化物酶体信号肽的腺病毒Ad-GFP相比,含过氧化物酶体信号肽的腺病毒Ad-GFP-Peroxi能够特异性显示大鼠心肌细胞H9C2内过氧化物酶体的分布,且缺氧培养的H9C2细胞内过氧化物酶体分布出现聚集现象。结论利用同源重组方法成功构建了过氧化物酶体特异性GFP腺病毒,其对大鼠心肌细胞H9C2有较高的感染效率,共聚焦显微镜下可以明确显示心肌细胞内过氧化物酶体的分布情况。

摘要：目的在左房内精准有效操控消融导管是保证心房颤动(简称房颤)消融高效成功的技术关键。我们根据圆规画圆原理设计了新型轴支撑消融导管,本实验拟验证其是否具有精准有效的操控性。方法将同一实验动物先后随机分入实验组和对照组,分别采用轴支撑冷盐水灌注消融导管(轴支撑组)和非轴支撑冷盐水灌注消融导管(非轴支撑组)进行右上肺静脉标测/消融操作。将轴支撑导管的轴支撑钢丝撤回钢丝腔内即成为非轴支撑导管。采用EnSite Velocity^(TM)心脏三维标测系统重建左房及右上肺静脉。实验内容包括导管在右上肺静脉邻近区域的贴靠标测及标测消融两部分。结果 8只动物中,房间隔穿刺致2例动物心包压塞,1例死亡,7例动物完成实验程序。在贴靠标测实验中,轴支撑组完成环肺静脉间断贴靠、环肺静脉连续贴靠和肺静脉前庭放射状线性连续贴靠的操作时间和曝光时间分别显著少于非轴支撑组(P均<0.001);在标测消融实验中,完成环肺静脉消融和肺静脉前庭放射状线性消融的操作时间和曝光时间分别显著少于非轴支撑组(P均<0.001)。在左房操作过程中,轴支撑组不经意退回右房的次数显著少于非轴支撑组[(0.7±0.8)次vs(5.1±1.3)次,P<0.001];轴支撑组从原房间隔穿刺孔再进入左房的时间显著少于非轴支撑组[(1.0±0.2)min vs(5.0±0.9)min,P<0.001]。动物解剖未见留置在肺静脉及左房内的导引钢丝表面及导管钢丝腔开口有血栓附着,右上肺静脉内膜未见划痕、撕裂和血栓附着。结论轴支撑消融导管的操控性能明显优于非轴支撑导管。轴支撑导管的移动方向及移动距离易于控制,到位精准,贴靠标测稳定,具有较高的安全性。