摘要：目的:预测及鉴定结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位,为基于表位的结核疫苗研究提供依据。方法:应用SYFPEITHI数据库预测结核杆菌抗原Ag85C序列中可能存在的HLA-A*0201限制性T细胞表位,利用T2细胞株分析各预测的抗原肽与HLA-A*0201分子的亲合力,选取高亲合力肽诱导特异性CTL细胞,检测各高亲合力肽刺激其特异性CTL细胞分泌的IFN-γ水平、在体外的CTL增殖反应以及细胞杀伤毒性,逐步鉴定出Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位。结果:SYFPEITHI数据库从Ag85C序列中预测到14条能够结合HLA-A*0201分子的抗原肽,其中3个抗原肽(170～178 aa、317～325 aa和144～153 aa)显示与T2细胞上HLA-A*0201分子有高结合力,而抗原肽FLTREMPAWL(144～153 aa)能够诱导大多数HLA-A*0201阳性结核患者及PPD(+)健康志愿者产生特异性CTL细胞,并分泌大量的IFN-γ,能够诱导CTL体外发生增殖,能够产生特异性杀伤活性。结论:成功鉴定出抗原肽FLTREMPAWL(144～153 aa)结核杆菌抗原Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位,可作为结核疫苗设计的候选表位,为进一步研发新型有效的抗结核疫苗奠定了基础。

摘要：目的重组表达抗线粒体抗体二亚型(AMA-M2)的二个靶抗原丙酮酸脱氢酶复合体E2(PDC-E2)、2-氧戊二酸脱氢酶复合体E2(OGDC-E2)及其连接形成的二联体PO-E2融合蛋白,已用于人原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期发现和临床诊断。方法针对PDC-E2,OGDC-E2的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体pET28a(+),构建重组表达载体,pET28a(+)-PDC-E2,pET28a(+)-OGDC-E2,pET28a(+)-P0-E2,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质。表达蛋白经SDS-PAGE,Western-blot等鉴定。结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了三种重组质粒。IPTG诱导表达后,获得三种融合蛋白。经免疫学鉴定,重组抗原片段具有AMA-M2的免疫原性。结论重组表达的PO-E2融合蛋白将有利于原发性胆汁性肝硬化的实验室诊断。