摘要：背景:基于纳米技术发展起来的纳米载体介导的磁性载药系统,在外加磁场作用下,能实现位点特异性靶向给药的目的,有利于提高病灶部位的局部药物浓度,从而进一步提高治疗效果,减少全身毒副作用。目的:研究磁性聚乳酸-羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒的制备工艺,评价纳米粒子特性。设计:首先选择几个可能影响纳米微粒特性的因素进行了单因素实验,然后再根据实验结果,结合统计学中的正交设计,获得了最佳优化处方。单位:解放军第二军医大学长海医院特诊科。材料:实验于2005-01/2006-03在解放军第二军医大学药学院药剂教研室完成。实验用氧化酚砷购自美国Sigma公司,聚乳酸-羟基乙酸由山东医疗器械研究所提供,纳米级四氧化三铁购自美国Sigma公司,聚乙烯醇购自北京有机化工厂,二氯甲烷等其他试剂均为分析纯,购于上海国药集团化学试剂有限公司。方法:运用超声乳化-溶剂挥发法制备磁性聚乳酸-羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒,通过透射电镜观察微粒形态,振动样品磁强计确证纳米微粒磁性的存在,激光粒径仪测定纳米粒的粒径大小和分布,高效液相法测定氧化酚砷的载药量及包封率,并计算氧化酚砷体外释放百分率。主要观察指标:磁性聚乳酸-羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒的形态、粒径、载药量、包封率、磁性及体外释放情况。结果:①微粒包封率和载药量:实验制备的纳米粒平均包封率为34.2%;5批纳米粒载药量分别为3.06%,3.15%,3.18%,3.21%,3.41%,平均载药量为3.20%,批间差异较小,说明工艺稳定性、重现性好。②微粒形态:纳米微粒呈圆形,表面光滑,分布均匀,不粘连,磁性微球中可见非均匀分散的黑色不透光区,为四氧化三铁微粒。③微粒粒径:分布范围窄(140～500nm),平均290nm。④微粒磁性:在不断改变外加磁场的大小与方向的情况下,微粒具有不同的磁化强度,说明氧化酚砷聚乳酸纳米微粒具有一定的磁响应性。⑤体外释放实验:氧化酚砷经过最初的快速释放后,进入缓慢控释阶段,于第8天时达到最终基本稳定的平台期。结论:实验获得了较满意的磁性聚乳酸-羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒制备工艺;该纳米微粒在外加磁场的情况下有较好磁靶向性的作用,同时具备良好药物缓释作用。

摘要：目的采用RNA干扰技术沉默大鼠胰腺腺泡细胞AR42J的Beclinl基因表达，构建稳定的Beclinl基因沉默的AR42J细胞系。方法设计并合成3种靶向大鼠BeclinlmRNA的shRNA及阴性对照shRNA，分别插入质粒GVl12，重组质粒分别命名为p—***1-1、P—***-2、P—sh—Beclinl-3及p—shRNA—NC。应用1ip03000将重组质粒瞬转人AR42J细胞，应用RT—PCR检测细胞Beclin1mRNA表达，筛选出沉默效率最高的质粒，在293T细胞内经慢病毒包装（LV—shBeclinl），感染AR42J细胞，应用嘌呤霉素筛选，采用***及蛋白质印迹法分别检测病毒感染细胞BeclinlmRNA和蛋白表达。结果重组质粒经琼脂糖凝胶电泳分离及测序证实shRNA序列符合预期。p—sh—Beclinl-1、P—sh—Beclinl-2、P—sh—Beclinl-3及p-shRNA—NC转染后AR42J细胞BeclinlmRNA表达抑制率分别为（17．8±4．0）％、（30．6±2．8）％、（45．8±7．7）％、（7．0±11．8）％。3个p—sh—Beclinl转染细胞的表达抑制率均较未转染细胞显著增加，差异有统计学意义（P值均〈0．05），而转染P—shRNA—NC细胞的表达抑制率与未转染细胞的差异无统计学意义。抑制率最高的p—sh—Beelinl．3经慢病毒包装，感染AR42J细胞，感染细胞的BeelinmRNA表达抑制率为（86．1±1．2）％，蛋白表达抑制率为（87．9±2．8）％，与未感染细胞的差异均有统计学意义（P值均〈0．01）。结论成功建立Beclinl基因沉默的AR42J细胞株，为探讨Bedim基因在急性胰腺炎发病机制中的作用提供新的细胞模型。

摘要：目的 探讨转化生长因子(TGF)-β／Smads信号转导通路中Smads相关蛋白、TGF-β1及 其Ⅰ、Ⅱ型受体在胰腺上皮内瘤变(PanIN)和胰腺癌组织中表达的意义。方法 用EnVision和SP免疫 组化技术检测266灶不同级别PanINs和121例胰腺癌组织中Smads相关蛋白、TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受 体的表达并联系临床病理学指标进行相关分析。结果 高级别PanINs病灶Smad4表达率(60.6％,20／ 33)显著低于低级别PanINs Smad4表达率(79.8％,186／233)(P<0.05);而高级别PanINs中Smad7、 TGF-β1、TGF-βRⅡ表达率明显高于低级别PanINs(P<0.05)。胰腺癌组织中,Smad4蛋白表达率在淋 巴结转移组和神经受累组显著低于各自对照组(P<0.05);Smad7、TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体的表达率 在淋巴结转移组和神经受累组则分别显著高于各自对照组(P<0.05)。胰腺上皮内瘤变和胰腺癌组织 中Smad2、4、7蛋白,TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体表达率的差异具有非常显著性(P<0.01)。结论 从低级 别PanINs到高级别PanINs再到胰腺癌中,Smad4蛋白表达率逐渐降低,而Smad7、TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ 型受体表达率逐渐升高,支持胰腺癌形成的分子模型。

摘要：目的探讨大黄素抑制人胃腺癌细胞SGC-7901生长作用的机制。方法设计空白对照组及不同浓度的大黄素溶液作用于胃腺癌细胞SGC-7901,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定肿瘤细胞抑制率,流式细胞技术检测细胞凋亡率以及细胞增殖周期的变化。结果在一定范围内,大黄素的浓度越高、作用时间越长对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,80μmol/L大黄素处理胃癌细胞72 h后增殖抑制率达90%,凋亡率也越高,大黄素组G0/G1期细胞比例显著升高,S期和G2/M期细胞降低。结论大黄素可显著抑制胃癌细胞的生长,诱导凋亡,影响细胞周期。其抑制作用具有时效和量效关系。

摘要：目的观察DNA甲基转移酶1（DNMTl）基因沉默后对人胰腺癌PaTu8988细胞的DNMT活性及hMLH·1基因CpG岛DNA甲基化状态的影响。方法由美国Ambion公司设计合成DNMTIsiRNA和阴性对照siRNA，分别用15、30nmol／L的浓度转染胰腺癌PaTu8988细胞，以未转染组细胞作为对照。应用实时PCR和蛋白质印迹法检测DNMTlmRNA和蛋白的表达；用DNMT活性检测试剂盒检测其活性；用亚硫酸氢盐测序PCR（BSP）法检测hMLH-1基因CpG岛的甲基化状态；实时PCR法检测hMLH-1mRNA的表达。结果转染48h后，DNMTlsiRNAl5、30nmol／L组细胞DNMTlmRNA表达量分别为0．573±0．026和0．143-3-0．044，显著低于对照组的1．020±0．217及阴性siRNA15、30nmol／L组的0．900±0．475和0．938±0．327（P值均〈0．05）；DNMTlsiRNA组的DNMTl蛋白表达亦低于对照组和阴性siRNA组。DNMTlsiRNAl5、30nmol／L组细胞DNMT活性分别为0．364±0．124和0．250±0．072，明显低于对照组的0．931±0．065及阴性siRNA15、30nmol／L组的0．665±0．055和0．472±0．040。DNMT活性与DNMTlmRNA表达呈正相关（r=0．69，P〈0．01）。DNMTlRNA干扰后导致hMLH-1基因CpG位点的8个甲基化减少到1个甲基化。结论DNMTlsiRNA能特异性抑制胰腺癌PaTu8988细胞DNMTl基因的表达，明显抑制DNMT的活性，并引起hMLH-1基因CpG岛去甲基化。

摘要：目的评估瑞巴派特联合法莫替丁治疗幽门螺杆菌感染的活动期胃溃疡患者溃疡愈合质量。方法采用多中心、随机、开放、阳性药物对照研究设计。120例患者随机分为治疗组与对照组。治疗组用瑞巴派特100 mg,po,tid,法莫替丁片20mg,po,bid;对照组用奥美拉唑胶囊20 mg,每日晨空腹口服。疗程均为6 wk。治疗前后分别行病理组织学检查评估溃疡愈合质量。结果治疗6 wk后,2组患者上腹痛、腹胀、反酸、嗳气等症状均有显著改善(P<0.01)。2组溃疡愈合有效率无显著性差异。2组患者治疗后组织学表现较治疗前显著好转(P<0.01)。治疗组患者中性黏液含量恢复较对照组好(P<0.05)。治疗组发生2例不良反应,对照组无不良反应。治疗组药物费用显著低于对照组,节约治疗费用21.6%。结论瑞巴派特联合法莫替丁治疗伴幽门螺杆菌感染的活动期胃溃疡具有更好的溃疡愈合质量与更少的药物费用。