摘要：放疗是肿瘤综合治疗的重要手段之一,目前已发展至精确放疗阶段,但医疗资源分布不均、医师之间水平各异、放疗轮廓勾画耗时长、计划设计及图像引导配准存在人因影响、自适应放疗等问题仍有待完善。为适应时代发展,开展放疗的智能化探索十分必要。人工智能技术的日益发展为实现智能放疗提供了新的方法,且基于深度学习(Deep Learning,DL)技术在图形处理与输出方面效果显著,在放疗领域的图形处理需求和放疗流程中具有天然的优势。智能放疗可以推动精确放疗向智能化个性化方向发展。本研究综述了DL在肿瘤智能放疗流程中的应用现状及发展趋势。

摘要：目的应用siRNA干扰技术抑制人肝细胞癌系HepG2细胞MTH1基因表达,并研究MTH1基因干扰后对HepG2细胞凋亡和迁移能力的影响。方法设计并化学合成3对特异性MTH1-siRNA,采用阳离子脂质体法瞬间转染肝癌HepG2细胞,离体培养肝癌HepG2细胞,并设正常对照组、阴性对照组及MTH1-siRNA1、MTH1-siRNA2、MTH1-siRNA3转染组。采用蛋白印迹(Western blot)法检测转染MTH1-siRNA后HepG2细胞MTH1蛋白水平表达的变化,并筛选干扰效果最佳序列。运用流式细胞技术和划痕实验检测转染siRNA-MTH1后HepG2细胞凋亡、体外迁移能力的变化。结果 MTH1-siRNA3转染组干扰效果与正常组和阴性对照组相比效果具有统计学意义(P=0.002,P=0.005)。MTH1-siRNA3转染组细胞凋亡率高于正常组及阴性对照组,差异有统计学意义(P=0.012,P=0.013);MTH1-siRNA3转染组细胞的划痕24、36 h愈合率均低于正常组和阴性对照组,差异有统计学意义(P=0.001,P=0.000)。结论 MTH1在肝癌细胞的凋亡及迁移中起重要作用,干扰MTH1的表达能促进肝癌细胞凋亡并降低肝癌细胞的迁移能力。

摘要：目的设计并化学合成针对骨形态发生蛋白2(BMP-2)的siRNA分子片段,转染人肝癌SMMC7721细胞,观察其对SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响。方法阳离子脂质体法瞬间转染SMMC7721细胞,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western印迹法检测转染BMP-2-siRNA后细胞BMP-2mRNA水平和蛋白水平的变化,MTT法和流式细胞术检测转染BMP-2-siRNA后SMMC7721细胞增殖、细胞周期和凋亡的变化。结果 3对特异性BMP-2-siRNA均有效地抑制了BMP-2基因的表达,以siRNA-B抑制效果最好。转染BMP-2-siRNA后SMMC7721细胞的增殖能力明显受到抑制(P<0.05)且明显促进了SMMC7721细胞的凋亡。结论靶向BMP-2基因的siRNA分子片段可以有效地抑制人肝癌SMMC7721细胞的增殖并促进其凋亡。

摘要：目的线粒体的功能取决于线粒体的膜系统,而线粒体内膜的形态由近期发现的线粒体接触位点复合物(mitochondrial contact site and crista organizing system,MICOS)所调节,MICOS复合物的突变可改变嵴的形成,导致线粒体功能障碍。本研究采用慢病毒shRNA靶向敲低MICOS复合物亚基蛋白-线粒体内膜蛋白Mic19及Mic60表达,并研究敲低Mic19和Mic60对肝癌细胞生物学作用的影响。方法根据NCBI中的序列设计、构建并包装敲低Mic19及Mic60的重组慢病毒,收集被病毒上清感染后经嘌呤霉素筛选得到的肝癌HepG2阳性细胞,并以空白组、空载pLKO.1慢病毒质粒组作为对照。采用蛋白印迹法检测Mic19及Mic60蛋白的表达,以筛选敲低效率最高的稳定细胞株。采用MTT法、划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭情况,观察敲低Mic19及Mic60蛋白表达对肝癌细胞生物学行为的影响。结果 Mic19敲低组中蛋白相对表达量shRNA Mic19-1(0.579±0.042)和shRNA Mic19-2(0.524±0.111)均低于空白组(1.065±0.105)或空载组(1.07±0.092),差异有统计学意义,均P<0.01。Mic60敲低组蛋白相对表达量shRNA Mic60-1(0.172±0.107)、shRNA Mic60-2(0.269±0.027)明显低于空白组(1.065±0.105)或空载组(1.07±0.092),差异有统计学意义,均P<0.01。生长曲线表明,Mic19敲低组至感染第36h时的吸光度(A)值低于对照组,均P<0.05;Mic60敲低组至感染第12h时的A值显著低于对照组,P<0.01。划痕实验表明,至第48hMic19敲低组细胞迁移距离为(286.8±38.97)μm,Mic60敲低组细胞迁移距离为(214.6±41.64)μm,与空白组(500.8±25.6)μm或空载组(487.3±31.37)μm相比差异均有统计学意义,均P<0.01。在不铺胶的Transwell迁移实验中,Mic19敲低组穿膜细胞数为(440.4±65.35)个/低倍视野,Mic60敲低组穿膜细胞数为(235.2±21.3)个/低倍视野,均少于空白组(574.8±36.4)或空载组(574±53.95)个/低倍视野,均P<0.01。在铺胶的侵袭实验中,Mic19敲低组穿膜细胞数为(172.4±15.5)个/低倍视野,Mic60敲低组穿膜细胞数为(118.2±25.53)个/低倍视野,均少于对照组空白组(238.6±22.85)或空载组(227.8±22.27)个/低倍视野,差异有统计学意义,均P<0.01。结论重组慢病毒shRNA Mic19-2、shRNA Mic60-1可分别有效敲低HepG2细胞Mic19、Mic60的表达。慢病毒shRNA靶向敲低Mic19及Mic60表达可抑制肝癌HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并为后续进一步研究线粒体内膜蛋白(Mic19、Mic60)对肝癌细胞发生发展的影响提供依据。

摘要：背景与目的:原发性肝细胞癌是我国常见的恶性肿瘤之一,近期研究发现骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)信号通路在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。本研究采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)抑制骨形态发生蛋白受体Ⅱ(bone morphogenetic protein receptor,BMPR-Ⅱ)表达,观察抑制效果及抑制BMPR-Ⅱ表达后对人肝癌HepG2细胞增殖和侵袭的影响。方法:设计并化学合成针对BMPR-Ⅱ的3对小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),阳离子脂质体法瞬间转染HepG2细胞。采用离体培养肝癌HepG2细胞,并设正常对照组、空白对照组、阴性siRNA组及siRNA-BMPR-Ⅱ-a、siRNA-BMPR-Ⅱ-b、siRNA-BMPR-Ⅱ-c转染组。各组培养48 h后,运用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测HepG2细胞中BMPR-Ⅱ在mRNA和蛋白水平表达的变化,MTT比色法及Transwell侵袭实验检测转染后细胞增殖及侵袭的变化。结果:RT-PCR、Western blot显示,3个特异性siRNA-BMPR-Ⅱ转染组转染48 h后,其BMPR-Ⅱ的mRNA和蛋白表达与另外3组比较受到明显抑制,以siRNA-BMPR-Ⅱ-a转染组抑制效果最明显(0.70±0.06、0.45±0.10,P<0.05)。MTT比色法及Transwell侵袭实验显示,转染48 h后,siRNA-BMPR-Ⅱ-a转染组HepG2细胞的生长及穿膜数(48.27%±0.76%、25.20±1.60,P<0.05)明显低于正常对照组(82.64%±0.67%、60.40±1.39)及阴性对照组(81.21%±0.80%、59.50±1.85)。结论:siRNA干扰介导BMPR-Ⅱ基因沉默可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖和侵袭,BMPR-Ⅱ可作为肝癌抗肿瘤治疗的新靶点。

摘要：目的观察慢性心理应激对大鼠远端结肠收缩的影响。方法将SD大鼠随机分为对照组和实验组，束缚制动法制备慢性心理应激大鼠模型，离体灌流法观察远端结肠平滑肌的自发收缩活动及乙酰胆碱（Aeh）对平滑肌收缩的影响。结果行为学测定结果表明成功制备慢性心理应激大鼠模型。对照组大鼠纵形肌和环形肌的自发收缩幅度均显著低于实验组[（0．42±0．09）g比（0．58±0．10）g和（0．52±0．11）g比（0．67±0．11）g，P〈0．05]。Aeh剂量依赖性增加了各组大鼠远端结肠平滑肌的自发收缩幅度（P〈0．01），其在实验组的效应显著高于对照组（P〈0．05）。结论在慢性心理应激大鼠模型，远端结肠平滑肌的收缩强度及其对Aeh的反应均增加。

摘要：目的:利用3D打印技术为鼻腔NK/T细胞淋巴瘤患者定制个性化的组织补偿块,研究其在放疗计划中的剂量学影响。方法:选取10例早期鼻腔NK/T淋巴瘤患者,分别采用无组织补偿块的常规_(CTno-bolus)图像和3D打印组织补偿块的CT_(bolus)图像进行放疗计划设计,靶区处方剂量均为50Gy/25次。使用剂量体积直方图评估两种计划中计划靶区、危及器官的剂量学差异。结果:3D打印组织补偿块与体表紧密贴合,提高了靶区的均匀性和适形度;晶体、视神经和腮腺剂量在3D打印组织补偿块计划中均低于无组织补偿块计划(P<0.05)。结论:3D打印组织补偿块有效提高了鼻腔NK/T细胞淋巴瘤紧邻体表靶区的剂量分布,值得临床推广。

摘要：目的:研究Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)小干扰RNA(siRNA)是否通过NF-κB信号途径下调Bcl-2而抑制宫颈癌细胞的增殖。方法:设计并合成针对TLR4基因的3条特异性siRNA)及阴性siRNA,并同时设立空白对照,然后用脂质体LipofectamineTM2000转染细胞。通过半定量RT-PCR和Western印迹法分别检测转染前后He La细胞中TLR4 mRNA和蛋白表达水平,Western印迹法检测p65及Bcl-2蛋白表达水平,MTT法和平板克隆检测细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期。结果:3条针对TLR4基因的siRNA均能抑制TLR4的mRNA和蛋白表达,其中TLR4-siRNA-003的沉默效率最高。转染TLR4-siRNA-003 48 h后细胞中TLR4的mRNA和蛋白表达水平分别下调62%和89%,p65及Bcl-2蛋白水平明显下调,同时细胞增殖明显受到抑制,细胞凋亡率显著升高,细胞周期被阻滞于G1期。结论:TLR4特异性siRNA能够有效沉默TLR4基因表达,并通过NF-κB信号通路下调Bcl-2而显著抑制宫颈癌He La细胞的增殖。TLR4可能成为治疗宫颈癌的一个新靶点。

摘要：目的:研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)对肾癌细胞多药耐药基因1(multidrug resistance,MDR1)表达的抑制作用,并分析干扰前后肾癌细胞对顺铂(cisplatin)敏感度的变化。方法:根据MDR1基因序列设计3条小干扰RNA(small in-terfering RNA,siRNA),转染肾癌A498细胞;RT-PCR法检测转染前后MDR1 mRNA表达水平的变化,筛选出干扰效率最高的siRNA序列;进而利用慢病毒包装siRNA重组质粒,感染A498细胞,RT-PCR法筛选沉默效果最好的细胞株进行克隆;Western印迹法检测MDR1蛋白表达水平;MTT法检测干扰前后顺铂对半数细胞抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)的变化。结果:3条siRNA序列均能不同程度地抑制细胞MDR1基因的表达,其中siRNA-1序列能更有效地封闭MDR1基因,使MDR1 mRNA表达水平下降67%;筛选得到稳定转染的细胞株与未干扰细胞株相比,MDR1蛋白表达量明显下降(P<0.01),并使顺铂对细胞的IC50值降低约83.37%(P<0.01)。结论:RNAi能有效抑制肾癌A498细胞MDR1基因的表达,并可显著增加其对顺铂的敏感度,从而使肾癌细胞化疗耐药逆转成为可能。

摘要：目的明确正常组织和人乳腺癌细胞株MCF-7中caveolin-1的表达情况,构建pcDNA3.1(+)/caveolin-1表达质粒,并鉴定其表达。方法 RT-PCR法检测9种正常人体组织及人乳腺癌细胞株MCF-7中caveolin-1基因的扩增情况;Western blotting法检测MCF-7细胞中caveolin-1蛋白的表达情况。设计克隆引物和表达引物,RT-PCR法扩增caveolin-1基因,用EcoRⅠ+XbaⅠ内切酶消化回收PCR产物和质粒pcDNA3.1(+),连接后构建pcDNA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒。挑选pcDNA3.1(+)/caveolin-1转染感受态细菌后的单菌落进行PCR鉴定,阳性菌落培养后提取质粒行酶切鉴定及测序鉴定。瞬时转染MCF-7细胞后Western blotting检测caveolin-1蛋白的表达情况。结果①9种正常组织中均有caveolin-1基因扩增,MCF-7细胞中无caveolin-1基因扩增且无蛋白表达;②pcD-NA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒转染MCF-7细胞后caveolin-1蛋白表达良好。结论成功构建了pcDNA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒,瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞后caveolin-1表达稳定。